錢明珠，胡俊英，林 倩，孫鶴文，王瑋玉，李 欣，王申鋒，王新平* (.吉林大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院 教育部人獸共患病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，吉林 長(zhǎng)春 3006；.河南農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院，河南 鄭州 45450)

牛腸道病毒(bovine enterovirus，BEV)感染是由腸道病毒引起牛的以消化道和呼吸道癥狀為主要特征的一種新發(fā)動(dòng)物疫病，各種品種和日齡的牛群均易感[1]，具有較高的發(fā)病率。國(guó)外流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，牛群的BEV感染陽(yáng)性率為17.6%～80.0%[2]。該病主要表現(xiàn)發(fā)熱、咳嗽、流涕、腹瀉等臨床癥狀，給養(yǎng)牛業(yè)的發(fā)展造成了嚴(yán)重危害。BEV感染最早于1959年由美國(guó)學(xué)者M(jìn)OLL等[3]首次報(bào)道，此后許多國(guó)家和地區(qū)也先后報(bào)道了BEV感染[4-5]。李英利等[6]于2011年從內(nèi)蒙古腹瀉犢牛體內(nèi)分離到1株F種腸道病毒，確定了國(guó)內(nèi)存在F種腸道病毒感染。邢澤黎等[7]于2012年從吉林長(zhǎng)春某發(fā)病牛群中分離出E種腸道病毒HY12，首次確定了國(guó)內(nèi)牛群存在E種腸道病毒感染。錢明珠等[8]于2019年從河南省不同地區(qū)牛群中分離出2株F種腸道病毒，確定了河南省牛群也存在F種腸道病毒感染。

近年來(lái)，BEV感染在我國(guó)有逐年升高的趨勢(shì)，感染牛群出現(xiàn)腹瀉與呼吸道癥狀，給養(yǎng)牛業(yè)造成了較大經(jīng)濟(jì)損失。由于BEV感染為國(guó)內(nèi)新發(fā)疫病，有關(guān)該病的流行病學(xué)調(diào)查資料尚不完善，且BEV在國(guó)內(nèi)地區(qū)的流行情況還缺乏系統(tǒng)研究。為了解河南省BEV感染情況，為該病的防控提供流行病學(xué)理論依據(jù)，本研究應(yīng)用雙抗體夾心ELISA方法對(duì)采自河南省不同地區(qū)的牛群糞便樣品進(jìn)行了BEV感染的檢測(cè)，并對(duì)不同地區(qū)、不同年份、不同品種、不同飼養(yǎng)方式、不同季節(jié)牛群的BEV感染情況進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)與分析，初步確定出河南省牛群BEV感染的流行病學(xué)本底。該結(jié)果為河南省BEV的防控提供了重要的流行病學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集與處理2016—2020年從河南省17個(gè)地市采集牛糞便樣品共計(jì)1 970份，其中臨床表現(xiàn)有明顯腹瀉癥狀的糞便樣品1 108份，無(wú)明顯腹瀉癥狀的糞便樣品862份。糞便樣品的處理參照文獻(xiàn)[9]的方法進(jìn)行，即待檢牛糞便樣品以pH值為7.2 的磷酸鹽緩沖液(PBS)按1∶5(W/V)的比例稀釋，8 500 r/min離心15 min后，取上清液即為待檢樣品，于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 主要試劑BEV雙抗體夾心ELISA檢測(cè)試劑盒[10-11]由本實(shí)驗(yàn)室制備并保存；BEV陽(yáng)性對(duì)照樣品和陰性對(duì)照樣品均由吉林大學(xué)動(dòng)物檢驗(yàn)檢疫教研室保存，經(jīng)RT-PCR檢測(cè)和電鏡觀察均檢測(cè)為BEV雙陽(yáng)性和BEV雙陰性。

1.3 雙抗體夾心ELISA檢測(cè)樣品利用吉林大學(xué)動(dòng)物檢驗(yàn)檢疫教研室研制的BEV雙抗體夾心ELISA檢測(cè)試劑盒[10-11]依次對(duì)處理后的樣品進(jìn)行BEV病原學(xué)檢測(cè)。根據(jù)ELISA檢測(cè)結(jié)果，進(jìn)行不同地區(qū)、不同年份、不同品種、不同飼養(yǎng)方式、不同季節(jié)的比較分析，確定河南省BEV感染的流行病學(xué)特點(diǎn)。

2 結(jié)果

2.1 河南省不同地區(qū)樣品BEV感染的檢測(cè)結(jié)果對(duì)河南省17個(gè)地市中采集的1 970份牛糞便樣品進(jìn)行BEV感染的病原學(xué)檢測(cè)，總樣品BEV感染的流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果如表1所示，共檢出BEV感染樣品460份，平均感染率達(dá)23.35%。其中BEV感染率較高的地區(qū)為新鄉(xiāng)市、周口市、開(kāi)封市，分別為43.00%，36.67%，30.36%；焦作市的BEV感染率最低，僅為9.21%。上述結(jié)果表明，河南省各個(gè)地市牛群均存在BEV感染，且不同地區(qū)感染情況不同，個(gè)別地區(qū)BEV感染較為嚴(yán)重。

表1 河南省不同地區(qū)BEV感染的流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果

2.2 河南省不同地區(qū)牛腹瀉樣品與非腹瀉樣品的BEV感染檢測(cè)結(jié)果對(duì)采集的樣品按腹瀉樣品與非腹瀉樣品進(jìn)行分類統(tǒng)計(jì)，結(jié)果見(jiàn)圖l。在采集的1 108份臨床具有明顯腹瀉癥狀的牛糞便樣品中共檢測(cè)出BEV感染樣品289份，平均感染率達(dá)26.08%，其中以新鄉(xiāng)市的BEV感染率最高，達(dá)48.33%，以焦作市的感染率最低，僅為11.11%。同時(shí)，對(duì)采集的862份臨床未見(jiàn)明顯腹瀉癥狀的牛糞便樣品進(jìn)行了BEV感染的病原學(xué)檢測(cè)，共檢測(cè)出BEV感染樣品171份，平均感染率達(dá)19.84%，其中以周口市的BEV感染率最高，達(dá)39.74%，以平頂山市的感染率最低，僅為3.85%。該結(jié)果表明，河南省不同地區(qū)的腹瀉牛群與非腹瀉牛群中均存在BEV的感染。進(jìn)一步對(duì)各個(gè)地區(qū)牛群的腹瀉與非腹瀉樣品BEV感染進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)除周口、駐馬店、信陽(yáng)和鶴壁市外，其他大部分地區(qū)牛群的BEV感染率在腹瀉樣品中均高于非腹瀉樣品。

A.腹瀉樣本；B.非腹瀉樣本圖1 不同地區(qū)腹瀉樣品與非腹瀉樣品BEV感染檢測(cè)結(jié)果

2.3 河南省不同年份樣品BEV感染的檢測(cè)結(jié)果對(duì)不同年份采集樣品的BEV感染進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如圖2所示，2016-2020年采集樣品的BEV感染率分別為18.32%，21.93%，23.58%，25.06%，27.47%，其中，2019年采集樣品BEV感染率較2016-2018年的BEV感染率分別提高了6.74%，3.13%，1.48%；2020年采集樣品的BEV感染率較2016-2019年的BEV感染率分別提高了9.15%，5.54%，3.89%，2.41%。該結(jié)果表明河南省不同年份采集的樣品中均存在BEV的感染，且BEV感染率呈逐年上升的趨勢(shì)。

圖2 不同年份樣品的BEV感染調(diào)查結(jié)果

2.4 河南省不同品種牛BEV感染檢測(cè)結(jié)果應(yīng)用ELISA方法對(duì)采集于不同品種奶牛和肉牛的樣品進(jìn)行BEV感染檢測(cè)，其中奶牛樣品為1 137份，肉牛樣品為833份，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2和表3。奶牛樣品共檢出277份BEV陽(yáng)性，肉牛樣品檢測(cè)出183份BEV陽(yáng)性，BEV陽(yáng)性率分別為24.36%和21.97%。在奶牛不同品種中，以娟姍牛樣品的BEV陽(yáng)性率最高，達(dá)26.37%；荷斯坦牛樣品的BEV陽(yáng)性率較低，為23.75%。在肉牛的不同品種中，以夏南牛樣品的BEV陽(yáng)性率最高，達(dá)23.47%；西門塔爾牛樣品的BEV陽(yáng)性率次之，為22.02%；利木贊牛樣品的BEV陽(yáng)性率最低，為 21.43%。該結(jié)果表明，不同品種的奶牛和肉牛均可感染BEV。

表2 不同品種奶牛的BEV感染情況

表3 不同品種肉牛BEV的感染結(jié)果

2.5 河南省不同飼養(yǎng)方式下牛群BEV感染檢測(cè)結(jié)果河南省不同飼養(yǎng)方式下牛群BEV感染的檢測(cè)結(jié)果如圖3所示，在1 970份牛糞便樣品檢測(cè)中，舍飼方式、放牧方式、半舍飼方式下牛群BEV感染率分別為25.93%，10.34%，14.62%。表明不同飼養(yǎng)方式下牛群感染BEV的情況不同，其中，舍飼牛群BEV陽(yáng)性率明顯高于半舍飼牛群和放牧牛群。

圖3 河南省不同飼養(yǎng)方式下牛群BEV感染率

2.6 河南省不同季節(jié)牛群BEV感染的檢測(cè)結(jié)果對(duì)不同季節(jié)牛群的BEV感染進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如圖4所示，春季、夏季、秋季、冬季牛群BEV感染率分別為18.75%，27.44%，26.11%，16.46%。該結(jié)果表明BEV感染沒(méi)有明顯的季節(jié)性，不同季節(jié)均可感染，但BEV感染率夏、秋季節(jié)較高，春、冬季節(jié)較低。

圖4 不同季節(jié)牛群BEV感染情況

3 討論

BEV感染在國(guó)內(nèi)是一種新發(fā)傳染病，臨床上以消化道和呼吸道癥狀及神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂為特點(diǎn)。本病感染率高，易于與其他病原體發(fā)生混合感染，造成較高的致死率，給畜牧業(yè)健康發(fā)展帶來(lái)危害。國(guó)內(nèi)學(xué)者楊永寧等[12]對(duì)西寧市牦牛BEV的流行病學(xué)進(jìn)行了調(diào)查與分析，發(fā)現(xiàn)西寧市不同地區(qū)的腹瀉牦牛和健康牦牛中均存在BEV感染，且不同地區(qū)感染差異較大，部分地區(qū)BEV陽(yáng)性率較高。何歡等[13]利用RT-PCR方法對(duì)青藏高原地區(qū)牦牛的腹瀉糞便樣品和健康糞便樣品中的BEV攜帶率進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查，發(fā)現(xiàn)不同地區(qū)的腹瀉樣品和健康樣品中均檢出了BEV。李欣等[14]對(duì)山東省某地區(qū)BEV感染進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，發(fā)現(xiàn)奶牛和肉牛均存在BEV感染的情況。由于BEV感染在國(guó)內(nèi)屬于新發(fā)傳染病，其在國(guó)內(nèi)的感染與流行病學(xué)本底尚不清楚。

本研究對(duì)河南省17個(gè)地市的牛群進(jìn)行了BEV感染的流行病學(xué)調(diào)查，初步確定了上述地區(qū)BEV感染的流行病學(xué)本底，揭示出河南省不同地區(qū)均存在不同程度的BEV感染。不同地區(qū)的感染情況及感染率存在較大差異，可能是由于地區(qū)間自然地理及不同牛場(chǎng)所采取的防疫措施不同所致。對(duì)腹瀉樣品和非腹瀉樣品的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)大部分(76%)地區(qū)腹瀉樣品的BEV檢出率明顯高于非腹瀉樣品。由于BEV感染主要呈現(xiàn)腹瀉與呼吸道癥狀，極易與其他傳染病混淆，因此，在進(jìn)行牛的腹瀉性疫病和呼吸道疫病鑒別診斷時(shí)，考慮的病原也應(yīng)該將腸道病毒納入其中。CHAN等[15]認(rèn)為BEV感染全年都能發(fā)生，但在夏、秋季多發(fā)。本研究發(fā)現(xiàn)河南省牛群BEV感染在夏、秋季多發(fā)的結(jié)果與CHAN等[15]報(bào)道的結(jié)果一致，且本研究發(fā)現(xiàn)牛群BEV感染呈現(xiàn)逐年升高的趨勢(shì)。

BEV感染的主要傳播途徑為接觸傳播，通過(guò)接觸被感染動(dòng)物的口鼻分泌物、尿液、糞便或者被糞便污染的料草等能夠直接引發(fā)病毒的傳播，有報(bào)道認(rèn)為該病還可能通過(guò)噴嚏、咳嗽產(chǎn)生的飛沫導(dǎo)致牛群的感染。本病主要傳染源是患病牛和無(wú)癥狀的病毒攜帶者[16-18]，各年齡階段的牛均為易感動(dòng)物。郭金玉等[19]研究認(rèn)為，密集型的飼養(yǎng)方式致使牛群之間密切接觸，一旦有牛感染BEV就會(huì)引起牛群的廣泛感染。此次對(duì)牛群BEV感染的流行病學(xué)調(diào)查證實(shí)牛群BEV感染率在舍飼飼養(yǎng)方式下明顯高于半舍飼和放牧飼養(yǎng)方式，這可能是由于BEV在密集型飼養(yǎng)環(huán)境下更容易在牛群中傳播。

鑒于BEV感染屬于新發(fā)傳染病，本研究對(duì)河南省不同地區(qū)牛群BEV感染進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查，初步探究了該省牛群BEV感染的流行病學(xué)特點(diǎn)及其流行分布情況，為今后防控本病提供了重要的流行病學(xué)理論依據(jù)。