張世良，董曉茜，鄢長(zhǎng)余，楊瑞，唐思，劉君，夏素霞

（1遼寧省中醫(yī)藥研究院，遼寧 沈陽(yáng)；2大連市檢驗(yàn)檢測(cè)認(rèn)證技術(shù)服務(wù)中心，遼寧 大連）

0 引言

心可舒膠囊收載于文獻(xiàn)[1]，由山楂、丹參、葛根、木香、三七五味藥材組成，主要效用為活血化瘀，行氣止痛。方中丹參為君藥，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中僅有原兒茶醛的薄層鑒別項(xiàng)目，不能對(duì)丹參的質(zhì)量進(jìn)行有效的控制，本試驗(yàn)參考相關(guān)文獻(xiàn)[2-5]采用超高效液相色譜建立了同時(shí)測(cè)定丹參中3種成分的方法，為控制心可舒膠囊的質(zhì)量提供了方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters Acquity H-CLASS液 相 色 譜 儀；Sartorius BP211D、SartoriusBP221S電子天平。

1.2 試劑與試藥

丹 參 素 鈉（110855-201915 97.8%）、原 兒 茶醛（110810-201909 99.6%）、丹 酚 酸B（111562-201917 96.6%）對(duì)照品來(lái)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；甲醇、乙腈、甲酸均為色譜純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 含量測(cè)定

2.1.1 色譜條件

采 用Agilent Extend-C18（100mm×2.1mm，2.7μm）色譜柱，以乙腈（A）-0.1%甲酸梯度洗脫(0-3min，5A；3-9min，5A→13A；9-18min，13A→25A)；檢 測(cè) 波 長(zhǎng)280nm；流速0.5ml/min；柱溫30℃。

2.1.2 溶液的制備

2.1.2.1 對(duì)照品溶液

分別精密稱取丹參素鈉、原兒茶醛和丹酚酸B對(duì)照品10mg，分別置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液，分別精密量取丹參素鈉、原兒茶醛和丹酚酸B對(duì)照品儲(chǔ)備液1ml、1ml、2ml，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，作為混合對(duì)照品溶液。

2.1.2.2 供試品溶液

取本品10粒內(nèi)容物，準(zhǔn)確稱量，研磨，混勻，取約0.5g，準(zhǔn)確稱量，置具塞錐形瓶中，準(zhǔn)確添加50%甲醇50ml，稱量，超聲處理30min，放冷，再稱量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)濾后取濾液，即得。

2.1.2.3 陰性樣品溶液

取缺丹參的陰性樣品，按“2.1.2.2”項(xiàng)下的方法制備陰性樣品溶液并進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖，結(jié)果陰性無(wú)干擾（見(jiàn)圖1）。

圖1 uPLC色譜圖

2.2 方法學(xué)驗(yàn)證

2.2.1 線性范圍的考察

精密吸取對(duì)照品溶液，分別制成每1ml含5μg、10μg、20μg、40μg、80μg、100μg的溶液。在上述色譜條件下分別進(jìn)樣測(cè)定。以質(zhì)量濃度（X，mg/ml）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見(jiàn)表1。

表1 線性方程及范圍

2.2.2 精密度考察

取同一供試品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得丹參素鈉RSD為0.8%、原兒茶醛RSD為0.9%、丹酚酸B峰面積的RSD為0.6%。結(jié)果表明，儀器精密度良好。

2.2.3 穩(wěn)定性考察

取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、12、24h進(jìn)樣測(cè)定。測(cè)得丹參素鈉RSD為0.5%、原兒茶醛RSD為1.0%、丹酚酸B峰面積的RSD為0.7%。表明3種成分在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.4 重復(fù)性考察

取同一批供試品，平行制備6份供試品溶液，測(cè)定，記錄各組分色譜峰面積。丹參素鈉、原兒茶醛和丹酚酸B含量測(cè)定結(jié)果RSD分別為0.8%、0.8%、0.6%。

2.2.5 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的心可舒膠囊約0.25g，精密稱定，共6份，分別加入丹參素鈉、原兒茶醛和丹酚酸B對(duì)照品儲(chǔ)備液，按“2.1.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果丹參素鈉、原兒茶醛和丹酚酸B的平均回收率(n=6)分別為98.9%、98.8%、98.4%，RSD為0.7%、0.5%、0.8%。

3 討論

3.1 提取條件與提取溶劑的選擇

該制劑處方中丹參經(jīng)過(guò)加水煎煮后制成浸膏，因此本試驗(yàn)選擇超聲處理方式提取。本試驗(yàn)分別用純水、50%甲醇、70%甲醇、甲醇、乙醇進(jìn)行提取，結(jié)果顯示50%甲醇的提取效率最高，因此提取溶劑選擇50%甲醇。

3.2 提取時(shí)間的選擇

準(zhǔn)確稱量同一樣品3份，分別用50%甲醇為提取溶劑經(jīng)超聲處理20min、30min、40min，經(jīng)測(cè)定30min與40min提取結(jié)果基本一致，因此認(rèn)為超聲提取30min基本提取完全。

3.3 流動(dòng)相的選擇

在試驗(yàn)中比較了甲醇-水、甲醇-磷酸水、乙腈-水、乙腈-磷酸水、乙腈-甲酸水等流動(dòng)相系統(tǒng)，最終選用乙腈-甲酸水系統(tǒng)作為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫，待測(cè)成分與雜質(zhì)分離度符合規(guī)定，峰形較好[6-8]。