馬紅悅，李 玲，烏亞汗，田 羽，李艷艷，龐保平*

(1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)草原昆蟲(chóng)研究中心, 呼和浩特 010020; 2.內(nèi)蒙古鑲黃旗草原工作站, 內(nèi)蒙古鑲黃旗 013250)

核糖體蛋白S3a(RpS3a)是一種核糖體小亞基蛋白，除參與蛋白質(zhì)合成外，還有許多生理功能，如細(xì)胞凋亡(Naoraetal., 1998)、細(xì)胞轉(zhuǎn)化(Lecomteetal., 1997)、卵子形成(Reynaudetal., 1997；Zuritaetal., 1997)、信號(hào)傳導(dǎo)(Norihisaetal., 2002)及免疫功能(Huetal., 2000)等。目前，從高等的哺乳動(dòng)物到低等的細(xì)菌，已有許多物種的S3a基因被成功解析，并且S3a蛋白的一些核糖體外的功能也得到了證實(shí)(朱保健等，2010)。然而，目前昆蟲(chóng)核糖體蛋白的研究較少，且主要集中于模式昆蟲(chóng)-黑腹果蠅Drosophilamelanogaster(Schmidtetal., 1996; Reynaudetal., 1997; van Beestetal., 1998; 李艷紅, 2014)、經(jīng)濟(jì)昆蟲(chóng)-家蠶Bombyxmori(Yang and Sehnal, 1998)、柞蠶Antheraeapernyi(朱保建等, 2010)和衛(wèi)生害蟲(chóng)-尖音庫(kù)蚊Culexpipiens(Robichetal., 2007; Heetal., 2009; Kimetal., 2010; Kim and Denlinger, 2010)、埃及伊蚊Aedesaegyptt(Mazzacano and Fallon, 1996; Niu and Fallon, 2000)、家蠅Muscadomestica(胡亞等, 2016)及麻蠅Sarcophagacrassipalpis(Craiq and Denlinger, 2000)等，對(duì)農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)核糖體蛋白的研究?jī)H限于對(duì)幾種主要害蟲(chóng)核糖體蛋白基因的克隆及表達(dá)譜分析，如煙草天蛾Manducasexta(Song and Gilbert, 1997)、地中海實(shí)蠅Ceratitiscapitate(Gagouetal., 2000; Verrasetal., 2004)、菜蛾(Wangetal., 2005)、甜菜夜蛾Spodopteraexigua(潘湛清等, 2008)、粘蟲(chóng)Mythimnaseparata(李柯等, 2010; 李柯, 2012)、褐飛虱Nilaparvatalugens(朱家俊等, 2016; Zhuetal., 2017)及松墨天牛Monochamusalternatus(羅淋淋等, 2016)等。

滯育是昆蟲(chóng)為躲避不利的環(huán)境條件而暫時(shí)停止發(fā)育的季節(jié)性適應(yīng)策略，在昆蟲(chóng)生命活動(dòng)中起著重要作用。然而，核糖體蛋白在昆蟲(chóng)滯育中的作用卻很少了解。Robich等(2007)首次發(fā)現(xiàn)RpS3a在尖音庫(kù)蚊滯育初期顯著下調(diào)。Kim等(2010)進(jìn)一步證實(shí)，RpS3a在非滯育雌成蟲(chóng)中持續(xù)表達(dá)，而在滯育初期(成蟲(chóng)羽化后7～10 d)急劇下調(diào)，應(yīng)用RNAi沉默RpS3a可使非滯育雌蟲(chóng)卵泡停止發(fā)育，但沉默效應(yīng)只有10 d，RNAi短暫的RpS3a抑制不能持續(xù)地阻止卵巢發(fā)育，并且外用保幼激素可抵消RpS3a的干擾效應(yīng)。卵巢發(fā)育停止是成蟲(chóng)滯育的主要特征(Kimetal., 2010)，上述研究表明核糖體蛋白可能在昆蟲(chóng)成蟲(chóng)滯育中起著重要作用。

沙蔥螢葉甲Galerucadaurica(Joannis)屬鞘翅目Coleoptera葉甲科Chrysomelidae螢葉甲亞科Galerucinae，是近年來(lái)在內(nèi)蒙古草原上猖獗成災(zāi)的新害蟲(chóng)，主要啃食沙蔥Alliummongolium、多根蔥A.polyrhizum、野韭A.ramosum等百合科蔥屬牧草(昊翔等, 2015)。沙蔥螢葉甲一年發(fā)生一代，以卵滯育越冬(高靖淳等, 2015; Zhouetal., 2016)，幼蟲(chóng)最早于4月上中旬開(kāi)始出現(xiàn)，夏季成蟲(chóng)羽化取食約7～10 d后停止取食活動(dòng)，聚集于草叢、牛糞及石塊下滯育越夏，為專(zhuān)性滯育；成蟲(chóng)羽化約80～90 d后滯育解除，開(kāi)始取食、交配及產(chǎn)卵(陳龍等, 2018a；Maetal., 2019)。目前對(duì)沙蔥螢葉甲成蟲(chóng)夏滯育及其機(jī)理的了解還很少，主要集中在不同滯育階段體內(nèi)糖類(lèi)、蛋白、脂肪含量(陳龍等, 2018a)及海藻糖酶(陳龍等, 2018b)和熱激蛋白(陳龍等, 2019)基因表達(dá)量的變化。本研究前期應(yīng)用蛋白組學(xué)技術(shù)分析了沙蔥螢葉甲成蟲(chóng)夏滯育不同階段蛋白組成的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)多個(gè)核糖體蛋白差異表達(dá)(Maetal., 2019)。因此，本試驗(yàn)擬克隆沙蔥螢葉甲R(shí)pS3a基因，分析其在沙蔥螢葉甲不同發(fā)育階段及不同溫度脅迫下的表達(dá)特性，以期為進(jìn)一步揭示RpS3a在沙蔥螢葉甲生長(zhǎng)發(fā)育及其夏滯育中的調(diào)控作用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

本試驗(yàn)所用的供試沙蔥螢葉甲越冬卵于2019年 4月采自?xún)?nèi)蒙古錫林郭勒盟鑲黃旗草原。將越冬卵置于溫度25℃±1℃、相對(duì)濕度70%±5%、光周期為14 L∶10 D的PRX-350C智能型人工氣候箱(寧波海曙賽福實(shí)驗(yàn)儀器廠)中孵育，幼蟲(chóng)孵化后以沙蔥飼養(yǎng)。期間收集：(1)發(fā)育階段：卵、幼蟲(chóng)1～3齡、預(yù)蛹、蛹、成蟲(chóng)羽化3、7、10、15、25、40、60、80和100 d。每組3個(gè)生物學(xué)重復(fù)，每個(gè)生物學(xué)重復(fù)：卵50粒，1～3齡幼蟲(chóng)各5～10頭，預(yù)蛹和蛹各5頭，成蟲(chóng)4頭(♀∶♂=2∶2)。(2)溫度處理：選擇羽化3 d的成蟲(chóng)，分別在0、5、10、15、20、25、30、35及40℃處理1 h，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)雌雄各2頭。用液氮迅速冷凍后置于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 主要試劑

TaKaRa MiniBEST Universal RNA Extraction Kit, PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser(Perfect Real Time), SMARTer?RACE 5′/3′ Kit User Manual, TaKaRa MiniBEST Agarose Gel DNA Extraction Kit, pMD19-T Vector Cloing Kit, DNA 2000 Marker等均購(gòu)自大連TaKaRa有限公司；PGEM-T Easy載體，T7 RiboMAXTM Express RNAi System試劑盒，GoTaq?qPCR Master Mix(2×), T4 DNA連接酶等均購(gòu)自美國(guó)Promega公司；Taq PCR Master Mix(2×, blue dye)購(gòu)自上海生工有限公司；感受態(tài)細(xì)胞DH5α購(gòu)自Tiangen生化科技有限公司。

1.3 總RNA提取和反轉(zhuǎn)錄

將1.1節(jié)中超低溫凍存的樣品分別用液氮研磨，采用TaKaRa MiniBEST Universal RNA Extraction Kit試劑盒提取總RNA，使用分光光度計(jì)(NanoPhotometerTMP-Class)和1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)總RNA的濃度及完整性。按照PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser(Perfect Real Time)說(shuō)明書(shū)操作，反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA第1鏈，并置于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 沙蔥螢葉甲R(shí)pS3a中間片段的克隆

根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室建立的沙蔥螢葉甲轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，篩選注釋為沙蔥螢葉甲R(shí)pS3a的基因序列，并通過(guò)NCBI網(wǎng)站序列進(jìn)行比對(duì)鑒定。利用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)引物RpS3a-F和RpS3a-R(表1)，引物由上海生工生物有限公司合成。反應(yīng)體系(25 μL): PCR Master Mix 12.5 μL, 上/下游引物(0.2 μmol/L)各1 μL，cDNA模板1 μL(100 ng/μL)和RNase-free Water 9.5 μL。PCR反應(yīng)程序：94℃預(yù)變性5 min; 94℃變性30 s，65℃退火30 s，72℃延伸1 min, 30個(gè)循環(huán); 72℃延伸10 min，4℃保存。PCR反應(yīng)結(jié)束后，將產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，將目的DNA片段純化、回收后連接pMD?19-T載體并且轉(zhuǎn)化至感受態(tài)細(xì)胞DH5α，吸取200 μL菌液涂平板，在37℃下倒置過(guò)夜培養(yǎng)12～16 h，待菌落長(zhǎng)出后，進(jìn)行藍(lán)白斑篩選，挑取陽(yáng)性克隆菌落并PCR驗(yàn)證后，送至北京六合華大基因有限公司測(cè)序。

1.5 沙蔥螢葉甲R(shí)pS3a的3′端序列和5′端序列克隆

以沙蔥螢葉甲成蟲(chóng)羽化3 d的RNA為模板，利用SMARTer?RACE 5′/3′ Kit User Manual試劑盒合成5′-RACE-Ready cDNA和3′-RACE-Ready cDNA。根據(jù)測(cè)序驗(yàn)證后的中間片段，分別設(shè)計(jì)5′/3′特異性引物(gene-specific primer, GSP)和嵌套基因特異性引物(nested gene-specific primer, NGSP)(表1)。分別用試劑盒中自帶的10×Universal Primer A Mix(UPM)引物和特異性引物GSP配對(duì)進(jìn)行Touchdown PCR。反應(yīng)體系共50 μL：5′-or 3′-RACE-Ready cDNA 2.5 μL，10×UPM 5 μL，5′ or 3′ GSP(10 μmol/L)1 μL，Master Mix 41.5 μL。反應(yīng)程序：94℃ 30 s變性，70℃ 3 min延伸，5個(gè)循環(huán)；94℃ 30 s變性，70℃ 30 s退火，72℃ 3 min延伸，5個(gè)循環(huán)；94℃ 30 s變性，68℃ 30 s退火，72℃ 3 min延伸，25個(gè)循環(huán)。用Tricine-EDTA稀釋Touchdown PCR反應(yīng)產(chǎn)物15倍為模板，以試劑盒自帶short引物和NGSP為配對(duì)進(jìn)行巢式PCR反應(yīng)，反應(yīng)體系同1.4節(jié)，反應(yīng)程序：90℃ 5 min預(yù)變性，90℃ 30 s變性，68℃ 30 s退火，72℃ 3 min延伸，30個(gè)循環(huán)。用1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物后，純化回收目的片段、連接載體、轉(zhuǎn)化、測(cè)序等同1.4。

表1 引物信息

1.6 生物信息學(xué)分析

利用NCBI ORF finder(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/orffinder/)預(yù)測(cè)沙蔥螢葉甲R(shí)pS3a的開(kāi)放閱讀框，采用NCBI中的BlastP(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)和DNAMAN 6.0(Lynnon Biosoft，加拿大)進(jìn)行同源性分析及序列比對(duì)，使用在線軟件SignalIP 4.1 Server(http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/)預(yù)測(cè)沙蔥螢葉甲R(shí)pS3a的信號(hào)肽序列，運(yùn)用DNAMAN 6.0軟件(Lynnon Biosoft，加拿大)進(jìn)行分子量和等電點(diǎn)的預(yù)測(cè)，蛋白跨膜區(qū)分析采用TMHMM在線軟件(http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/)，用Phylosuite軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)(貝葉斯法MrBayes)，1 000次抽樣分析(Zhangetal., 2020)。

1.7 沙蔥螢葉甲R(shí)pS3a的表達(dá)譜分析

利用熒光定量技術(shù)(qPCR)檢測(cè)RpS3a在沙蔥螢葉甲不同發(fā)育時(shí)期以及不同溫度下的相對(duì)表達(dá)量。定量實(shí)驗(yàn)在FTC-3000實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(Funglyn Biotech, 加拿大)上進(jìn)行。qPCR特異性引物為qRpS3a-F/qPRS3a-R，內(nèi)參為SDHA(Tanetal., 2017)，反應(yīng)體系(20 μL): cDNA模板2 μL, qRpS3a-F和qRpS3a-R引物(10 μmol/L)各0.4 μL, GoTaq?qPCR Master Mix 10 μL, ddH2O 7.2 μL。反應(yīng)程序：95℃預(yù)變性3 min，95℃ 15 s，60℃ 1 min，40個(gè)循環(huán)；95℃ 15 s，65℃ 15 s，95℃ 15 s。每個(gè)處理3個(gè)生物學(xué)重復(fù)，進(jìn)行4次技術(shù)重復(fù)，采用2-ΔΔCt方法進(jìn)行定量分析(Livak and Schmittgen, 2001)。

1.8 數(shù)據(jù)分析

利用SPSS 20.0進(jìn)行單因素方差分析，Duncan法進(jìn)行多重比較，數(shù)據(jù)結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(SE)表示，顯著水平P<0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 沙蔥螢葉甲R(shí)pS3a的cDNA全長(zhǎng)克隆及序列分析

根據(jù)沙蔥螢葉甲轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，篩選注釋為沙蔥螢葉甲R(shí)pS3a的基因序列，設(shè)計(jì)引物進(jìn)行中間片段的PCR擴(kuò)增，獲得目的片段的大小為690 bp，所得測(cè)序結(jié)果與轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)中的序列信息完全一致。在3′和5′ RACE中分別獲得350 bp和170 bp兩個(gè)片段，通過(guò)序列拼接及測(cè)序驗(yàn)證得到RpS3a的cDNA全長(zhǎng)序列，命名為GdRpS3a(GenBank登錄號(hào)為：MN660144)。GdRpS3a的全長(zhǎng)為800 bp，開(kāi)放閱讀框(open-reading frame, ORF)為687 bp，共編碼228個(gè)氨基酸，5′非編碼區(qū)(untranslated region, UTR)長(zhǎng)度為58 bp，3′ UTR長(zhǎng)度為55 bp；具有核糖體蛋白S3a家族的保守功能域。推測(cè)的編碼蛋白分子量為25.63 kDa，預(yù)測(cè)等電點(diǎn)(pI)為10.53。SignalIP 4.1 Server預(yù)測(cè)結(jié)果顯示該蛋白無(wú)信號(hào)肽。TMHMM在線軟件分析蛋白質(zhì)跨膜區(qū)域結(jié)果表明，GdRpS3a不含跨膜結(jié)構(gòu)。

2.2 GdRpS3a的同源序列對(duì)比及系統(tǒng)進(jìn)化分析

利用NCBI Blast同源性搜索，得到其它8個(gè)同為鞘翅目物種的RpS3a序列，利用DNAMAN軟件進(jìn)行氨基酸序列比對(duì)。結(jié)果顯示，沙蔥螢葉甲R(shí)pS3a的氨基酸序列與同一亞科的玉米根螢葉甲DiabroticavirgiferavirgiferaRpS3a的一致性最高，為54.10%；其次是馬鈴薯甲蟲(chóng)Leptinotarsadecemlineata和光肩星天牛Anoplophoraglabripennis，同為52.99%。此外，白楊葉甲Chrysomelatremula、小蜂窩甲蟲(chóng)Aethinatumida、米象Sitophilusoryzae、山松大小蠹Dendroctonusponderosae、赤擬谷盜Triboliumcastaneum的氨基酸一致性分別為49.44%、49.25%、43.98%、42.32%和41.20%(圖1)。

圖1 沙蔥螢葉甲與其它昆蟲(chóng)RpS3a的氨基酸序列比對(duì)

所建立的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)表明(圖2)：沙蔥螢葉甲R(shí)pS3a與玉米根螢葉甲的RpS3a親緣關(guān)系最近，首先聚為一分支，置信度為83%；然后與同為葉甲科的馬鈴薯甲蟲(chóng)聚在一起，再與白楊葉甲聚為一大分支，在一定程度上反應(yīng)其親緣關(guān)系。

圖2 基于氨基酸序列構(gòu)建沙蔥螢葉甲與其它昆蟲(chóng)RpS3a的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)

2.3 沙蔥螢葉甲R(shí)pS3a在不同發(fā)育階段的表達(dá)模式

RpS3a在沙蔥螢葉甲的不同發(fā)育階段均有表達(dá)，且存在顯著差異(P<0.05)。成蟲(chóng)滯育結(jié)束后(80 d和100 d)表達(dá)量最高，其次60日齡成蟲(chóng)、幼蟲(chóng)、預(yù)蛹和蛹，最低為卵和3～40日齡成蟲(chóng)(圖3)。

圖3 GdRpS3a在沙蔥螢葉甲不同發(fā)育階段的表達(dá)水平

2.4 不同溫度下沙蔥螢葉甲R(shí)pS3a的表達(dá)模式

沙蔥螢葉甲成蟲(chóng)經(jīng)不同溫度處理1 h后，GdRpS3a的相對(duì)表達(dá)量存在顯著差異(P<0.05)，其中30℃下表達(dá)量最高，約為常溫對(duì)照25℃的10倍；其次為15℃，約為對(duì)照的6倍；最低為0℃和25℃；其它溫度處理間表達(dá)量差異不顯著(P>0.05)(圖4)。

圖4 沙蔥螢葉甲GdRpS3a在不同溫度下的表達(dá)水平

3 結(jié)論與討論

核糖體蛋白在生物體內(nèi)普遍存在且種類(lèi)繁多，參與一系列的生命過(guò)程，包括細(xì)胞凋亡、調(diào)控轉(zhuǎn)錄、惡性轉(zhuǎn)化及免疫應(yīng)答等細(xì)胞功能(Warner and Mclntosh, 2009)。核糖體蛋白S3a存在于40S的核糖體亞基上，在蛋白質(zhì)翻譯過(guò)程中起著重要作用，是生命體中蛋白質(zhì)合成和細(xì)胞代謝的重要調(diào)控因子(Shemeretal., 2000)。本研究通過(guò)RACE技術(shù)，首次從沙蔥螢葉甲中成功克隆了RpS3a的cDNA全長(zhǎng)序列。系統(tǒng)發(fā)育分析表明，沙蔥螢葉甲R(shí)pS3a與玉米根螢葉甲R(shí)pS3a的親緣關(guān)系上最近，二者同屬于鞘翅目葉甲科螢葉甲亞科。該基因編碼的氨基酸序列與玉米根螢葉甲、馬鈴薯甲蟲(chóng)等物種的RpS3a序列進(jìn)行比對(duì)，存在一個(gè)RpS3a蛋白家族的保守功能域。因此，本研究所克隆的基因?qū)儆诤颂求w蛋白S3a家族中的一員。

核糖體蛋白主要作用是參與蛋白質(zhì)的合成，但許多核糖體蛋白還具有次要功能(Wool, 1996)。RpS3a在果蠅Drosophilidae的整個(gè)發(fā)育過(guò)程中均有表達(dá)(van Beestetal., 1998)，特別是在胚胎發(fā)育過(guò)程和卵巢發(fā)育的雌成蟲(chóng)中高表達(dá)，是卵子形成必需的(Reynaudetal., 1997)。隨后在其他昆蟲(chóng)中的研究中也獲得了類(lèi)似的結(jié)果，如：地中海實(shí)蠅CcRpS21在胚胎和幼蟲(chóng)中的表達(dá)量高于蛹和成蟲(chóng)，且雌成蟲(chóng)高于雄成蟲(chóng)(Verrasetal., 2004)；一種搖蚊Chironomusriparius的RpL11、RpL13、RpS3和RpS6在胚胎形成過(guò)程中的表達(dá)量顯著高于幼蟲(chóng)、蛹和成蟲(chóng)(Martínez-Guitarteetal., 2007; Park and Kwak, 2012)；尖音庫(kù)蚊RpS4在卵中高表達(dá)而在幼蟲(chóng)中低表達(dá)(Huetal., 2007)；褐飛虱NlRPL5在抱卵的雌成蟲(chóng)中最高，其次為若蟲(chóng)，雄成蟲(chóng)和剛羽化的雌成蟲(chóng)最低；RNAi沉默該基因?qū)е侣殉舶l(fā)育遲緩、產(chǎn)卵量下降(Zhuetal., 2017)。上述研究表明，核糖體蛋白與昆蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育，特別是與胚胎發(fā)育有關(guān)。通過(guò)對(duì)沙蔥螢葉甲GdRpS3a在整個(gè)生命周期中的表達(dá)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，幾乎在整個(gè)昆蟲(chóng)的發(fā)育階段都有表達(dá)。本研究中，GdRpS3a在沙蔥螢葉甲不同發(fā)育階段差異表達(dá)，卵及羽化40 d內(nèi)成蟲(chóng)中的表達(dá)量顯著低于幼蟲(chóng)、預(yù)蛹、蛹及羽化60 d后成蟲(chóng)中的表達(dá)量。前期研究表明，沙蔥螢葉甲成蟲(chóng)秋季產(chǎn)卵后即以卵滯育越冬，越冬卵必須經(jīng)過(guò)秋冬季的低溫才能解除滯育(Zhouetal., 2016)。夏季成蟲(chóng)羽化后大量取食，約羽化7～10 d后停止取食或少量取食，活動(dòng)停止，進(jìn)入專(zhuān)性滯育狀態(tài)。羽化約80～90 d后結(jié)束滯育，開(kāi)始逐漸取食、交尾產(chǎn)卵等(陳龍等, 2018a)。核糖體蛋白在細(xì)胞分化活躍的組織中高表達(dá)(Jainetal., 2004; Martínez-Guitarteetal., 2007)。因此，GdRpS3a在細(xì)胞分化基本停滯的滯育卵和滯育前(3 d和7 d)及滯育前、中期(10、15、25和40 d)的成蟲(chóng)中表達(dá)量低而在生長(zhǎng)發(fā)育較快的幼蟲(chóng)期、預(yù)蛹期、蛹期以及滯育后期(60 d)和解除后的成蟲(chóng)期(80 d和100 d)高表達(dá)是合理的。Reynaud等(1997)也發(fā)現(xiàn)RpS3a在未滯育的雌蚊中高表達(dá)，而在滯育的雌蚊中低表達(dá)。蛋白組學(xué)研究表明，包括RpS3a在內(nèi)的多種核糖體蛋白在滯育解除后上調(diào)表達(dá)(Maetal., 2019)。因此，可認(rèn)為RpS3a上調(diào)表達(dá)可能促進(jìn)了沙蔥螢葉甲成蟲(chóng)卵巢的發(fā)育，隨著卵巢的發(fā)育，成蟲(chóng)夏滯育逐漸解除。但該推論還需通過(guò)對(duì)卵巢的解剖觀察及其它實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證。

溫度是影響昆蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育及繁殖的重要因素之一。然而，目前溫度對(duì)核糖體蛋白表達(dá)影響的研究卻很少。本研究中，溫度對(duì)沙蔥螢葉甲GdRpS3a的表達(dá)有顯著影響，但沒(méi)有一定的規(guī)律性，表達(dá)量不隨溫度的上升而升高或下降。GdRpS3a在30℃下表達(dá)量最高，而超過(guò)30℃(35℃和40℃)表達(dá)量下降，這可能是因?yàn)楦邷夭焕诶ハx(chóng)的生長(zhǎng)發(fā)育。而Martínez-Guitarte等(2007)的研究卻表明35℃高溫對(duì)搖蚊RpL11和RpL13的表達(dá)無(wú)顯著影響。造成差異的原因可能與核糖體蛋白或昆蟲(chóng)種類(lèi)不同有關(guān)。