高錄貴 王 景 仲華玲 孟 云 趙 政 劉明美

(江蘇聯(lián)合職業(yè)技術(shù)學(xué)院淮安生物工程分院，淮安 223200)

長(zhǎng)久以來(lái)，生長(zhǎng)快、培育周期短、一次栽培只要管理得當(dāng)便可長(zhǎng)久利用[1]的竹材加工剩余物未得到工業(yè)化利用[2]。竹酢液又叫竹醋液，是竹材經(jīng)熱解、冷凝收集得到的棕褐色透明液體，低溫條件下與食用糊精噴霧干燥即得竹酢粉。竹酢液/粉組分復(fù)雜，富含醋酸、酚類、酮類等有機(jī)活性物質(zhì)，其在斷奶仔豬和育肥豬方面的應(yīng)用研究取得了一定成果。研究表明，竹醋液/粉在提高育肥豬生長(zhǎng)性能與機(jī)體抵抗力及改善肉品質(zhì)與肉色等方面發(fā)揮著重要作用[3-5]，并能提高斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能、調(diào)節(jié)免疫器官中細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-10、白細(xì)胞介素-22等的mRNA表達(dá)水平[6]，提高脫氧雪腐鐮刀菌烯醇作用下的仔豬的生長(zhǎng)性能、抗氧化性能和緩解小腸黏膜損傷等[7-8]。

隨著綠色添加劑在畜禽養(yǎng)殖中的開發(fā)及應(yīng)用，國(guó)內(nèi)外學(xué)者開始關(guān)注竹酢液/粉在畜牧生產(chǎn)中的應(yīng)用，并取得了一定成果，但研究多聚焦于斷奶仔豬和育肥豬，在反芻動(dòng)物上的研究卻鮮有報(bào)道。近年來(lái)，隨著人們生活水平的提高及對(duì)羊肉營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的廣泛認(rèn)可，羊肉消費(fèi)量呈現(xiàn)逐年上漲態(tài)勢(shì)，有關(guān)肉羊綠色生產(chǎn)的研究也開始受到關(guān)注。有研究顯示，飼糧中添加2%竹酢粉能提高妊娠后期母羊血液中紅細(xì)胞數(shù)量、血紅蛋白濃度以及血清中總蛋白、免疫球蛋白G、免疫球蛋白M含量與總抗氧化能力[9]。截至目前，竹酢液/粉對(duì)斷奶湖羊影響的研究未見報(bào)道，故本試驗(yàn)擬以斷奶湖羊?yàn)樵囼?yàn)對(duì)象，探究竹酢粉對(duì)斷奶湖羊生長(zhǎng)性能、血液生理生化指標(biāo)及血清抗氧化和免疫指標(biāo)的影響，以期為竹酢粉在羊生產(chǎn)中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用竹酢粉其主要活性物質(zhì)為有機(jī)酸，含量為1.1%，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的竹酢粉水溶液在25 ℃時(shí)的pH≤3.5。根據(jù)劉明美等[9]在妊娠后期母羊飼糧中添加2%的竹酢粉、蔣竹英等[7-8]在斷奶仔豬飼糧中添加1%的竹醋液，考慮到斷奶湖羊可能對(duì)飼料添加劑的適應(yīng)性更強(qiáng)，故本試驗(yàn)確定5%作為飼糧中竹酢粉的添加量。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼糧

選擇體重相近、健康的2月齡斷奶湖羊10只，隨機(jī)分成2組，每組5只，分別飼喂羊場(chǎng)斷奶湖羊基礎(chǔ)飼糧(對(duì)照組)和基礎(chǔ)飼糧+5%(質(zhì)量比)竹酢粉(試驗(yàn)組)。基礎(chǔ)飼糧為市售的育肥羊配合顆粒料，其營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)見表1。竹酢粉按照5%的質(zhì)量比與育肥羊配合顆粒料攪拌均勻后飼喂。預(yù)試期7 d，正試期21 d。試驗(yàn)期內(nèi)湖羊飼養(yǎng)管理同羊場(chǎng)其他羊只的常規(guī)管理，自由采食和飲水。

表1 育肥羊配合顆粒料營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 1 Nutrition indexes of formula pelleted feed for fattening sheep (DM basis) %

1.3 樣品采集與測(cè)定

1.3.1 生長(zhǎng)性能

正試期第1天和第21天晨飼前對(duì)湖羊逐只稱重，統(tǒng)計(jì)初重和末重，計(jì)算平均日增重(ADG)；記錄每組試驗(yàn)羊的采食量，根據(jù)總增重和總采食量計(jì)算料重比(F/G)。

1.3.2 血樣采集及測(cè)定指標(biāo)

正試期第21天晨飼前每只羊頸靜脈采血3份。其中，一份分裝于乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管，使用PE-6800VET全自動(dòng)動(dòng)物血細(xì)胞分析儀檢測(cè)血常規(guī)指標(biāo)，包括白細(xì)胞數(shù)量、紅細(xì)胞數(shù)量、血紅蛋白濃度、紅細(xì)胞壓積、紅細(xì)胞平均體積、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度和血小板數(shù)量；另一份分裝于肝素鋰抗凝管，使用SMT-120V全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血液生化指標(biāo)，包括總蛋白、白蛋白、球蛋白、甘油三酯、葡萄糖、鈣、無(wú)機(jī)磷、尿素氮、肌酐含量及天門冬氨基酸轉(zhuǎn)移酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、淀粉酶、肌酸激酶活性；剩下的一份分裝于普通管，室溫放置2 h，4 ℃靜置2～3 h，待血液凝固收縮后，3 000 r/min條件下離心10 min，收集上層血清，使用華衛(wèi)德朗DR-200BS酶標(biāo)分析儀以比色法測(cè)定血清中總抗氧化能力、超氧化物歧化酶活性、細(xì)胞因子(白細(xì)胞介素-2、γ-干擾素)和免疫球蛋白(免疫球蛋白M、免疫球蛋白G和免疫球蛋白A)含量。

1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

使用Excel 2007對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行初步整理后，采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，以P<0.01作為差異極顯著標(biāo)準(zhǔn)，以P<0.05作為差異顯著標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié) 果

2.1 竹酢粉對(duì)斷奶湖羊生長(zhǎng)性能的影響

由表2可知，飼糧中添加5%竹酢粉的試驗(yàn)組斷奶湖羊的末重、平均日增重與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0.05)，料重比比對(duì)照組增加了7.40%。

表2 斷奶湖羊的生長(zhǎng)性能Table 2 Growth performance of weaned Hu sheep

2.2 竹酢粉對(duì)斷奶湖羊血常規(guī)指標(biāo)的影響

由表3可知，試驗(yàn)組斷奶湖羊血液中白細(xì)胞數(shù)量極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，紅細(xì)胞數(shù)量、血紅蛋白濃度、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，其他指標(biāo)與對(duì)照組雖無(wú)顯著差異(P>0.05)，但也均高于對(duì)照組。

表3 斷奶湖羊的血常規(guī)指標(biāo)Table 3 Blood routine indexes of weaned Hu sheep

2.3 竹酢粉對(duì)斷奶湖羊血液生化指標(biāo)的影響

由表4可知，試驗(yàn)組斷奶湖羊血液中淀粉酶活性和尿素氮/肌酐顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，天門冬氨基酸轉(zhuǎn)移酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性與尿素氮含量也低于對(duì)照組，但差異不顯著(P>0.05)，甘油三酯和肌酐含量高于對(duì)照組，差異亦不顯著(P>0.05)，其他指標(biāo)與對(duì)照組均無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表4 斷奶湖羊的血液生化指標(biāo)Table 4 Serum biochemical indexes of weaned Hu sheep

2.4 竹酢粉對(duì)斷奶湖羊血清抗氧化和免疫指標(biāo)的影響

由表5可知，試驗(yàn)組斷奶湖羊血清中白細(xì)胞介素-2含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，γ-干擾素含量有高于對(duì)照組的趨勢(shì)(P=0.053)，其他指標(biāo)與對(duì)照組均無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表5 斷奶湖羊血清抗氧化和免疫指標(biāo)Table 5 Serum antioxidant and immune indexes of weaned Hu sheep

3 討 論

3.1 竹酢粉對(duì)斷奶湖羊生長(zhǎng)性能的影響

竹酢粉能提高斷奶仔豬[3,5,8,10]和肉雞[11]的生長(zhǎng)性能，究其原因可能是竹酢粉中的酸、酚等成分對(duì)動(dòng)物腸道微生物產(chǎn)生了有益影響，從而改善了腸道環(huán)境。本研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加5%竹酢粉對(duì)斷奶湖羊的生長(zhǎng)性能無(wú)顯著影響。這可能與牛、羊等反芻動(dòng)物瘤胃內(nèi)微生物數(shù)量龐大，竹酢粉對(duì)機(jī)體與其體內(nèi)微生物的互利共生關(guān)系影響不大或者試驗(yàn)期較短或者瘤胃微生物對(duì)竹酢粉進(jìn)行了降解等有關(guān)，具體原因還需進(jìn)一步研究。

3.2 竹酢粉對(duì)斷奶湖羊血液生理指標(biāo)的影響

白細(xì)胞數(shù)量的變化可以反映機(jī)體細(xì)胞免疫水平的高低，進(jìn)而反映機(jī)體的免疫狀態(tài)[12]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加5%竹酢粉能極顯著提高斷奶湖羊血液中白細(xì)胞數(shù)量，蔣竹英等[8]的研究也有類似發(fā)現(xiàn)，說(shuō)明飼喂竹酢粉可提高湖羊的抗病能力。紅細(xì)胞不僅是血液輸送氧氣的主要載體，還含有多種天然免疫分子，具有多種天然免疫功能，是一種重要的天然免疫細(xì)胞[13]。研究表明，在飼糧或脫氧雪腐鐮刀菌烯醇污染下飼糧中添加竹醋液，可提高斷奶仔豬血液中紅細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白濃度[7-8]；飼糧中添加2%竹酢粉能提高妊娠后期母羊血液中紅細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白濃度[9]。本試驗(yàn)得到了相似結(jié)果，這說(shuō)明竹酢粉在預(yù)防動(dòng)物貧血、提高新陳代謝和天然免疫等方面有一定作用。

3.3 竹酢粉對(duì)斷奶湖羊血液生化指標(biāo)的影響

胰腺、唾液腺、胃、膽囊、空腸、回腸等是血清淀粉酶的主要來(lái)源，當(dāng)其損傷或出現(xiàn)炎癥時(shí)，會(huì)引起血液中淀粉酶活性升高[14]。天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶作為評(píng)價(jià)肝功能的重要指標(biāo)，可以反映肝臟的受損情況。當(dāng)心臟和肝臟組織細(xì)胞發(fā)生炎癥、壞死或在冷熱應(yīng)激狀態(tài)時(shí)，血清轉(zhuǎn)氨酶活性升高[15]。本試驗(yàn)中，竹酢粉可顯著降低血液中淀粉酶活性，同時(shí)谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性也稍低于對(duì)照組，表明竹酢粉可能對(duì)湖羊的胰腺和肝臟具有一定的保護(hù)作用。

血液中的甘油三酯主要來(lái)源于食物攝入、消化吸收、轉(zhuǎn)化或動(dòng)物體內(nèi)自身合成，甘油三酯的主要功能是供給與儲(chǔ)存能源，還可固定和保護(hù)內(nèi)臟。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)組斷奶湖羊血液中甘油三酯含量略高于對(duì)照組，表明竹酢粉可能會(huì)提高湖羊?qū)χ镜奈?。肌酐是機(jī)體內(nèi)肌肉代謝的產(chǎn)物，在肌肉中，肌酸主要通過(guò)不可逆的非酶脫水反應(yīng)緩緩地形成肌酐，再釋放到血液中，隨尿排泄，因此血液中肌酐含量與體內(nèi)肌肉總量關(guān)系密切。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)組斷奶湖羊血液中肌酐含量略高于對(duì)照組，表明試驗(yàn)組湖羊的肌肉含量高于對(duì)照組或竹酢粉使湖羊肌肉代謝加強(qiáng)。

尿素氮是機(jī)體蛋白質(zhì)代謝的主要終末產(chǎn)物，血液中尿素氮含量是反映蛋白質(zhì)的代謝方向和飼料氨基酸平衡的一個(gè)指標(biāo)。肝臟是體內(nèi)生成尿素的最主要器官，因此肝臟尿素生成量的減少可為其他器官如肌肉的蛋白質(zhì)沉積提供充足的氨基酸等原材料。陳代文等[16]的研究發(fā)現(xiàn)，血清尿素氮含量與豬的肌肉增長(zhǎng)或日增重呈負(fù)相關(guān)。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組斷奶湖羊血液中尿素氮含量略低于對(duì)照組，表明竹酢粉可能會(huì)提高湖羊?qū)Φ睦寐剩黾蛹∪獾鞍踪|(zhì)沉積。

3.4 竹酢粉對(duì)斷奶湖羊血清抗氧化和免疫指標(biāo)的影響

總抗氧化力是反映機(jī)體對(duì)外來(lái)刺激的代償能力和機(jī)體自由基代謝狀態(tài)強(qiáng)弱的重要指標(biāo)[17]，超氧化物歧化酶具有消除超氧陰離子毒性、保護(hù)細(xì)胞免受損傷的功能[18]。研究發(fā)現(xiàn)，竹醋液在清除氧自由基和提高油脂抗氧化能力方面具有與茶多酚相似的效果[19]，斷奶仔豬飼糧中添加1%竹醋液能夠提高血清總抗氧化力[8]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼糧中添加5%竹酢粉后斷奶湖羊血清總抗氧化力和超氧化物歧化酶活性無(wú)顯著變化。

免疫球蛋白G是動(dòng)物血清中的主要免疫球蛋白，在機(jī)體抗菌、抗病毒、抗感染方面發(fā)揮主要作用；免疫球蛋白M是機(jī)體初次接觸抗原物質(zhì)最早產(chǎn)生的抗體，具有激活補(bǔ)體等作用；血清免疫球蛋白A含量占總免疫球蛋白A的85%左右，其具有免疫球蛋白G、免疫球蛋白M的部分生物學(xué)功能[20]。本研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加5%竹酢粉對(duì)斷奶湖羊血清中免疫球蛋白M、免疫球蛋白G和免疫球蛋白A含量均無(wú)顯著影響。

細(xì)胞因子在免疫調(diào)節(jié)中起重要作用。白細(xì)胞介素-2和γ-干擾素可由Th1型細(xì)胞分泌，主要促進(jìn)T淋巴細(xì)胞增殖、介導(dǎo)細(xì)胞免疫和炎癥反應(yīng)[21]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼糧中添加5%竹酢粉能顯著提高斷奶湖羊血清中白細(xì)胞介素-2，并有提高γ-干擾素含量的趨勢(shì)，結(jié)合前面有關(guān)極顯著提高其血液中白細(xì)胞數(shù)量的結(jié)果，初步得出5%竹酢粉可能在提高斷奶湖羊抗病力和細(xì)胞免疫力方面發(fā)揮了一定作用。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)條件下，斷奶湖羊飼糧中添加5%竹酢粉對(duì)其生長(zhǎng)性能無(wú)顯著影響，但可顯著或極顯著提高其血液中白細(xì)胞數(shù)量、紅細(xì)胞數(shù)量、血紅蛋白濃度、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量，顯著降低血漿中淀粉酶活性和提高細(xì)胞免疫因子(白細(xì)胞介素-2、γ-干擾素)含量。綜上可知，5%竹酢粉在提高斷奶湖羊免疫力和抗病力方面發(fā)揮了一定作用。