陳運(yùn)景，何貴省，蘇亞靜，吳燦章，敬波，吳煌福

1.海南醫(yī)學(xué)院研究生院，海南 ?？?570100；

2.海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院乳甲外科，海南 海口 570100

乳腺癌是全球女性最常見(jiàn)、死亡率最高的惡性腫瘤，據(jù)2018 年GLDBOCAN (全球癌癥流行病學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)）估計(jì)全球癌癥發(fā)病率和死亡率顯示：女性乳腺癌發(fā)病率為11.55% (2 088 849/18 078 957)、僅次于肺癌發(fā)病率的11.58% (2093 876/18 078 957)[1-2]。已有研究分析表明，在未來(lái)10 年中，中國(guó)乳腺癌(breast cancer，BC)的發(fā)病率和死亡率將繼續(xù)上升[3]。隨著醫(yī)療技術(shù)和癌癥細(xì)胞分子技術(shù)發(fā)展，可手術(shù)治療的乳腺癌患者在手術(shù)切除腫瘤后，通過(guò)基因測(cè)序、候選突變基因來(lái)選擇術(shù)后的輔助治療，如化學(xué)治療、雌激素受體調(diào)節(jié)劑、雌激素受體拮抗劑，免疫抑制劑、靶向治療、放療等，乳腺癌患者生存率得到提高。但由于腫瘤原因多樣、發(fā)病機(jī)制尚未明確、生物學(xué)侵襲性、病理和分子水平上的異質(zhì)性，大部分乳腺癌患者因遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和相關(guān)并發(fā)癥而死亡，尤其是老年患者[2，4]。眾所周知，乳腺癌是一種全身性疾病，以綜合治療為主；乳腺癌的發(fā)病機(jī)制分子研究已成為國(guó)內(nèi)外研究的主要焦點(diǎn)之一，因此對(duì)乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制研究，為臨床治療乳腺癌惡性腫瘤的藥物研究提供方向，為乳腺癌患者個(gè)體化治療及靶向治療提供依據(jù)。近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)和靶向藥物的發(fā)現(xiàn)，藥物的應(yīng)用，極大地提高了乳腺癌患者的生存時(shí)間[5]，但部分患者的腫瘤診斷如年齡大、分期高、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、分級(jí)高等對(duì)預(yù)后不良有顯著影響[6]。因此，通過(guò)分子生物學(xué)信息分析了解乳腺癌相關(guān)基因表達(dá)，探索致病分子機(jī)制意義重大。

近年來(lái)，許多研究表明，乳腺癌的發(fā)生及進(jìn)展是一個(gè)多因素、多階段、多基因共同參與的變化過(guò)程，其中易感基因突變是乳腺癌發(fā)生發(fā)展重要機(jī)制之一[7]。全基因組關(guān)聯(lián)研究(GWAS)已經(jīng)證明染色體5P15.33上的TERT-CLDTMIL 區(qū)域是一個(gè)乳腺癌易感基因位點(diǎn)[8]，對(duì)于乳腺癌相關(guān)TERT (telomerase reverse transcriptase 端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶)基因的研究已成為當(dāng)前科研熱點(diǎn)。TERT 為端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶，是端粒酶中具有生物活性作用的催化亞基，對(duì)端粒酶維持端粒長(zhǎng)度起重要作用，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞無(wú)限生長(zhǎng)[9]。研究表明，TERT高表達(dá)與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)，并且與惡性腫瘤的預(yù)后不良有關(guān)，下調(diào)TERT 表達(dá)則抑制腫瘤的發(fā)展[10]。研究顯示，TERT啟動(dòng)子突變導(dǎo)致TERT基因表達(dá)上調(diào)及基因多態(tài)性與前列腺癌預(yù)后不良及侵襲性有關(guān)[11-12]，因此，TERT 基因啟動(dòng)子突變可能成為前列腺癌診斷和預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志物。但TERT基因在乳腺癌中的生物學(xué)功能及潛在機(jī)制研究尚少。

人類(lèi)癌癥基因組圖譜(human Cancer Genome Atlas TCGA)數(shù)據(jù)庫(kù)是一個(gè)廣泛的單個(gè)癌基因癥類(lèi)型的基因組數(shù)據(jù)，保存包括基因表達(dá)數(shù)據(jù)、miRNA表達(dá)數(shù)據(jù)、拷貝數(shù)變異、DNA甲基化、SNP等數(shù)據(jù)，為科學(xué)研究人員提供了大量、全面的腫瘤基因組和表觀遺傳學(xué)特征數(shù)據(jù)，識(shí)別及綜合分析癌癥基因組數(shù)據(jù)和基因組與臨床數(shù)據(jù)的關(guān)系及與腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展的相關(guān)[13-15]。

總之，TERT 表達(dá)在惡性腫瘤中起到促癌基因作用；目前TERT基因在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用研究尚少，具體發(fā)病機(jī)制未明。本研究通過(guò)下載TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)乳腺癌中miRNA表達(dá)數(shù)據(jù)及臨床特征數(shù)據(jù)，分析TERT在乳腺癌中的作用及致病機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 數(shù)據(jù)下載及整理從TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)下載乳腺癌的miRNA表達(dá)數(shù)據(jù)以及臨床資料，共收集1 222份癌標(biāo)本；其中正常標(biāo)本113份，乳腺癌腫瘤標(biāo)本1 109份。將下載的基因表達(dá)數(shù)據(jù)及臨床資料數(shù)據(jù)文件解壓成文本文件，利用R軟件程序?qū)?shù)據(jù)整理為可處理的表達(dá)矩陣數(shù)據(jù)，包括基因名稱(chēng)(Ensembl ID，ensemble 格式名稱(chēng))和基因表達(dá)矩陣文件、臨床數(shù)據(jù)。在ensembl官網(wǎng)(http://asia.ensemble.org/index)中下載人類(lèi)基因注釋文件，在R語(yǔ)言程序中將基因Ensemble ID轉(zhuǎn)化成為Gene ID，以進(jìn)一步分析。

1.2 TERT 表達(dá)差異分析利用R 軟件包對(duì)下載的mRNA 表達(dá)數(shù)據(jù)進(jìn)行整合和標(biāo)準(zhǔn)化處理，提取TERT 基因，利用R stats 包Wilcox.test 函數(shù)Wilcoxon秩和檢驗(yàn)對(duì)TERT基因表達(dá)量數(shù)據(jù)在正常和腫瘤分組樣本下做差異分析。

1.3 TERT表達(dá)與臨床病理相關(guān)性分析及生存分析將乳腺癌患者中TERT 表達(dá)量水平的中位值分為T(mén)ERT 高表達(dá)組與TERT 低表達(dá)組，聯(lián)合臨床資料，使用R 軟件中survival 包進(jìn)行生存分析(Kaplan-Meier法)，分析乳腺癌中該基因表達(dá)量高與患者生存率的關(guān)系。為了研究不同的臨床特征(年齡、分級(jí)、TNM 分期等)和TERT基因表達(dá)與乳腺癌患者預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系，使用coxph 函數(shù)進(jìn)行COX 單、多因素回歸分析，并統(tǒng)計(jì)P值和HR (風(fēng)險(xiǎn)比)。在COX多因素分析基礎(chǔ)上通過(guò)R軟件中的nomogram函數(shù)建立預(yù)測(cè)生存率的列線圖，用Kaplan Meier 生存曲線建立對(duì)列線圖的預(yù)測(cè)能力進(jìn)行驗(yàn)證。

1.4 TERT 共表達(dá)分析分析TERT 基因的共表達(dá)情況，其中相關(guān)性系數(shù)過(guò)濾條件為0.4，P 值為0.001。 篩選與TERT表達(dá)顯著的75個(gè)基因，用“corrplot”、“circlize”包繪制TERT相關(guān)性分析圈圖。

1.5 TERT表達(dá)與腫瘤微環(huán)境及免疫細(xì)胞浸潤(rùn)相關(guān)性分析使用CIBERSORT 算法[17]對(duì)不同亞組的乳腺癌患者RNA-seq數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，用來(lái)推斷22種免疫浸潤(rùn)細(xì)胞的相對(duì)比例，并對(duì)基因表達(dá)量以及免疫細(xì)胞含量進(jìn)行Spearman 相關(guān)性分析。P<0.05 被認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.6 TERT表達(dá)與藥物敏感性分析基于最大的藥物基因組學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)(GDSC 癌癥藥物敏感性基因組學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)，https://www.cancerrxgene.org/)[18]，使用R 軟件包“pRRophetic”來(lái)預(yù)測(cè)每個(gè)腫瘤樣本的化療敏感性；用回歸的方法得到每種特定化療藥物治療的IC50估計(jì)值，并用GDSC訓(xùn)練集進(jìn)行10次交叉驗(yàn)證檢驗(yàn)回歸和預(yù)測(cè)精度。所有參數(shù)都選擇了默認(rèn)值，包括去除批處理效應(yīng)的“combat”以及取重復(fù)基因表達(dá)的平均值。

1.7 GSEA 通路富集分析GSEA 分析[19]使用預(yù)先定義的基因集，將基因按照在腫瘤樣本和正常樣本中表達(dá)水平的高低進(jìn)行排序，然后檢驗(yàn)該基因集合是否富集在這個(gè)排序表的頂端或者底端。本研究通過(guò)GSEA比較預(yù)先定義的基因集的高風(fēng)險(xiǎn)組及低風(fēng)險(xiǎn)組的信號(hào)通路差異情況，探討兩組患者預(yù)后差異的可能分子機(jī)制，其中置換次數(shù)設(shè)置為1 000，置換類(lèi)型設(shè)置為phenotype。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法TERT 基因在正常樣本和腫瘤樣本的差異分析使用秩和檢驗(yàn)，TERT 表達(dá)的乳腺癌患者的生存分析和驗(yàn)證回歸模型使用χ2檢驗(yàn)和Kaplan Meier 檢驗(yàn)；利用Cox 比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行單因素及多因素分析。所有統(tǒng)計(jì)分析均用R 語(yǔ)言(3.6版)進(jìn)行。所有統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)均為雙側(cè)，以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TERT基因在正常組織與乳腺癌腫瘤組織中的差異性表達(dá)TCGA 乳腺癌數(shù)據(jù)集分析顯示TERT在乳腺癌樣本中的表達(dá)量高于正常樣本，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)圖1?；谌橄侔┗颊咝詣e、腫瘤分期及淋巴結(jié)亞組中分析，與正常組織樣本相比，TERT 基因在乳腺癌樣本中表達(dá)顯著上調(diào)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)圖2。

圖1 TCGA 乳腺癌數(shù)據(jù)集中TERT 在乳腺正常組織和乳腺癌組織中的表達(dá)差異

圖2 不同性別和腫瘤分期乳腺癌患者的TERT表達(dá)水平

2.2 高表達(dá)TERT 基因乳腺癌患者的生存率降低基于TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)及Prognoscan數(shù)據(jù)庫(kù)雙重驗(yàn)證TERT 基因表達(dá)量對(duì)乳腺癌患者生存率的影響，以TERT 表達(dá)水平中位值為分界點(diǎn)分為高低兩組，結(jié)果表明TERT高低表達(dá)水平兩組的生存率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)圖3A。取TERT 表達(dá)水平的最大選擇秩統(tǒng)計(jì)量分為高低兩組，結(jié)果表明TERT 表達(dá)高低兩組的生存率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，圖3B)。用Prognoscan在線數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)基因表達(dá)綜合(GEO)數(shù)據(jù)集進(jìn)行驗(yàn)證TERT基因不同表達(dá)量對(duì)乳腺癌患者的生存影響，其中三個(gè)TERT 表達(dá)量分組下生存狀態(tài)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，數(shù)據(jù)集分別為GSE1379 (P<0.05)、GSE11121 (P<0.05)、GSE12276 (P<0.05)，見(jiàn)圖4。

圖3 TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)TERT基因表達(dá)與乳腺癌患者生存率的關(guān)系

圖4 GEO乳腺癌數(shù)據(jù)集中TERT基因在乳腺癌組織和正常組織中的差異表達(dá)

2.3 臨床特征和高表達(dá)TERT 對(duì)乳腺癌患者預(yù)后的影響Cox 單因素、多因素回歸分析，如表1 所示，單因素Cox分析結(jié)果表明，臨床特征如年齡(HR=1.03，P<0.05)、腫瘤分期(HR=2.1，P<0.05)、浸潤(rùn)深度(HR=1.5，P<0.05)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(HR=6.4，P<0.05)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(HR=1.7，P<0.05)與乳腺癌患者總生存期相關(guān)，而TERT表達(dá)(HR=1.2，P<0.05)與總生存期無(wú)相關(guān)性。多因素Cox分析結(jié)果提示年齡(HR=1.03，P<0.05) 和TERT表達(dá)量(HR=1.474，P<0.05)與乳腺癌患者總生存期相關(guān)。因此，單因素分析提示TERT 表達(dá)對(duì)患者生存期無(wú)相關(guān)，但多因素Cox 分析提示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能TERT 表達(dá)對(duì)患者生存期影響受到其他因素的影響，表明年齡與TERT 基因?yàn)槿橄侔┆?dú)立預(yù)后因素，可能成為重要的預(yù)后標(biāo)志物。在Cox多因素回歸分析的基礎(chǔ)上，將臨床特征如年齡、腫瘤分期、TNM分期和TERT 基因表達(dá)量通過(guò)nomogram 函數(shù)建立一個(gè)列線圖(圖5)，對(duì)臨床特征和TERT 表達(dá)量進(jìn)行評(píng)分，將各分值進(jìn)行相加，得到總分，然后再根據(jù)總分來(lái)預(yù)測(cè)TERT 基因表達(dá)乳腺癌中的5 年和8 年生存率，對(duì)臨床治療和預(yù)測(cè)乳腺癌患者的預(yù)后提供理想模型。為了驗(yàn)證列線圖對(duì)乳腺癌患者生存率的預(yù)測(cè)能力，使用Kaplan Meier 曲線建立預(yù)測(cè)校準(zhǔn)曲線圖，結(jié)果顯示如圖6 所示，5 年生存率和8 年生存率的預(yù)測(cè)校準(zhǔn)曲線在標(biāo)準(zhǔn)曲線附近，表明列線圖的預(yù)測(cè)能力良好。

表1 Cox 單因素、多因素分析TERT 表達(dá)與臨床特征對(duì)乳腺癌患者預(yù)后的影響

圖5 基于臨床特征和TERT 基因構(gòu)建的乳腺癌患者預(yù)測(cè)5 年和8 年生存率的列線圖

圖6 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.4 乳腺癌中TERT 的共表達(dá)基因及調(diào)控分子進(jìn)一步根據(jù)TCGA 數(shù)據(jù)庫(kù)中乳腺癌患者的表達(dá)譜，通過(guò)相關(guān)性分析來(lái)探討乳腺癌中TERT 基因的共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)。共篩選出75個(gè)與TERT表達(dá)顯著相關(guān)的基因，其中相關(guān)性系數(shù)正/負(fù)相關(guān)TOP 5基因熱圖(圖7A)所示，與TERT表達(dá)正相關(guān)絕對(duì)值最大的前5個(gè)基因如CNPY1、FSD1、HMGB1P1、ALKAL1、GF1B，與TERT表達(dá)負(fù)相關(guān)絕對(duì)值最大的前5 個(gè)基因如MCM5、DERA、CACNA1G-AS1、AC004858.1、SLCTA14。 以及共表達(dá)相關(guān)性圈圖如圖所示(圖7B)。LinkedOmics數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)一步探討與TERT潛在調(diào)控的miRNA，結(jié)果如圖所示(圖8)。其中正相關(guān)前五個(gè)miRNA 為hsa-mir-337、hsa-mir-10b、hsa-mir-1245、hsa-mir-199a-1、hsa-mir-377，負(fù)相關(guān)前五個(gè)為：hsa-mir-106b、hsa-mir-550a-2、hsa-mir-92a-2、hsa-mir-1307、hsa-mir-18a。

圖7 乳腺癌中TERT基因的共表達(dá)基因

圖8 LinkedOmics數(shù)據(jù)庫(kù)中TERT潛在調(diào)控的miRNA相關(guān)性分析

2.5 TERT 表達(dá)量與腫瘤微環(huán)境及免疫細(xì)胞浸潤(rùn)相關(guān)性腫瘤微環(huán)境主要由腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞、免疫細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)、多種生長(zhǎng)因子、炎癥因子及特殊的理化特征和癌細(xì)胞自身等共同組成，腫瘤微環(huán)境顯著影響著腫瘤的診斷、生存結(jié)局和臨床治療敏感性。通過(guò)分析在TCGA 數(shù)據(jù)集中核心基因與腫瘤免疫浸潤(rùn)的關(guān)系，進(jìn)一步探討核心基因影響乳腺癌進(jìn)展的潛在分子機(jī)制。使用CIBERSORT 算法和Spearman 相關(guān)性分析，分析TERT 與腫瘤微環(huán)境的相關(guān)性。研究結(jié)果表明，TERT與T cells CD4 memory activated、Macrophages M0、Macrophages M1顯著正相關(guān)，與Mast cells resting、T cells CD4 memory resting 顯著負(fù)相關(guān)(圖9A)；TERT 與Mast cells resting 的線性關(guān)系如圖所示(圖9B)。

圖9 乳腺癌中TERT基因與免疫細(xì)胞浸潤(rùn)相關(guān)性

2.6 TERT 基因的GSEA 通路富集分析接下來(lái)研究TERT 基因涉及的具體信號(hào)通路，探討TERT 影響腫瘤進(jìn)展的潛在分子機(jī)制。GSEA 結(jié)果表明，TERT 可富集Mismatch repair、Primary immunodeficiency、RNA polymerase 信號(hào)通路(圖10)，提示TERT可能通過(guò)免疫途徑影響乳腺癌進(jìn)展。

圖10 乳腺癌TERT基因的Gsea通路富集分析

2.7 乳腺癌患者TERT 表達(dá)與藥物敏感性分析早期乳腺癌進(jìn)行手術(shù)治療結(jié)合化療、靶向治療效果明確。研究基于GDSC 數(shù)據(jù)庫(kù)的藥物敏感性數(shù)據(jù)，通過(guò)R 包“pRRophetic”來(lái)預(yù)測(cè)腫瘤樣本的化療敏感性，進(jìn)一步探討核心基因與常見(jiàn)藥物的敏感性。研究結(jié)果如圖11 所示，TERT 的表達(dá)與患者 對(duì)Imatinib ( 伊馬替尼)、Cisplatin ( 順鉑)、Gefitinib ( 吉非替尼)、Dasatinib ( 達(dá)沙替尼)、Erlotinib(埃羅替尼)以及Gemcitabine (吉西他濱)的敏感性相關(guān)(P<0.05)。

圖11 乳腺癌TERT基因與藥物的敏感性分析

3 討論

乳腺癌是全球女性最常見(jiàn)、死亡率最高的惡性腫瘤，因此研究乳腺癌的發(fā)病機(jī)制及預(yù)后生物分子是必要的，目前研究表明，TERT基因表達(dá)與與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展顯著相關(guān)及預(yù)后不良有關(guān)[20]。在甲狀腺癌中，研究發(fā)現(xiàn)TERT基因表達(dá)上調(diào)與TERT擴(kuò)增及TERT啟動(dòng)子突變有關(guān)，并且與甲狀腺不良預(yù)后有關(guān)[21]。在尿路上皮癌、子宮頸癌、頭頸癌中，也研究表明TERT 表達(dá)上調(diào)與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)[22-24]。但TERT基因表達(dá)在乳腺癌中研究較少，發(fā)病機(jī)制尚未清楚。近年來(lái)，隨著分子診斷技術(shù)和科技發(fā)展，利用TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)數(shù)據(jù)分析乳腺癌中預(yù)后的標(biāo)志物及致病機(jī)制，為預(yù)測(cè)乳腺癌患者預(yù)后及研究致病分子機(jī)制和治療提供新思路。

在這項(xiàng)研究中，基于TCGA 數(shù)據(jù)庫(kù)[16]中的乳腺癌數(shù)據(jù)集對(duì)TERT基因在乳腺癌中的表達(dá)進(jìn)行了全面和詳細(xì)的評(píng)估，結(jié)果表明TERT 基因在腫瘤組織及正常組織中表達(dá)的差異，研究發(fā)現(xiàn)，TERT基因在乳腺癌樣本中表達(dá)顯著升高，并且TERT高表達(dá)乳腺癌患者，其生存期較短。被證實(shí)是乳腺癌的獨(dú)立預(yù)后因子[26-27]。

共表達(dá)基因是大量功能相關(guān)的基因在相關(guān)一組條件下有非常相似的表達(dá)譜，如被共同的轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控的基因、產(chǎn)物構(gòu)成同一蛋白復(fù)合體、參與相同的調(diào)控通路等。因此這些共表達(dá)基因在生物學(xué)上具有相似的功能。通過(guò)基因共表達(dá)分析來(lái)預(yù)測(cè)其共表達(dá)基因，發(fā)現(xiàn)TERT基因表達(dá)與CNPY1、FSD1、HMGB1P1、ALKAL1、GF1B 共同促進(jìn)乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展，其中有研究表明ALKAL1 通過(guò)激活SHH 信號(hào)通路參與大腸癌的遷徙和侵襲[28]。但FSD1 低表達(dá)可促進(jìn)愛(ài)因斯坦- 巴爾病毒(EBV) 相關(guān)胃癌的進(jìn)展[29]。 CNPY1、HMGB1P1、GF1B 等在腫瘤中的生物學(xué)功能鮮有研究。分析與TERT基因上調(diào)抑制MCM5、DERA、CACNA1G-AS1、AC004858.1、SLCTA14基因的表達(dá)參與了乳腺癌的侵襲，其中已有研究發(fā)現(xiàn)下調(diào)MCM5表達(dá)水平通過(guò)減少了處于G2期的細(xì)胞增殖來(lái)抑制乳腺癌的增殖及轉(zhuǎn)移[30]。這與此項(xiàng)研究不一致。需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。通過(guò)LinkedOmics數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)一步預(yù)測(cè)可能調(diào)控TERT 基因的分子，得出交集的miRNA：hsa-mir-337、hsa-mir-10b、hsa-mir-1245、hsa-mir-199a-1、hsa-mir-377，其中hsa-mir-10b 已經(jīng)被證實(shí)和TERT 啟動(dòng)子突變與神經(jīng)膠質(zhì)瘤預(yù)后不良有關(guān)[31]。通過(guò)相關(guān)性分析基因共表達(dá)基因和潛在調(diào)控分子，可以為T(mén)ERT 可能參與分子機(jī)制研究提供實(shí)驗(yàn)方向及理論基礎(chǔ)。這對(duì)于展望目前乳腺癌治療的進(jìn)步應(yīng)該是非常有意義的，可能會(huì)發(fā)現(xiàn)潛在的生物標(biāo)志物或預(yù)后決定因素的靶點(diǎn)。

腫瘤細(xì)胞的組織微環(huán)境對(duì)腫瘤的發(fā)展起著至關(guān)重要的作用。腫瘤微環(huán)境顯著影響著腫瘤的診斷、生存結(jié)局和臨床治療敏感性。通過(guò)分析在TCGA 數(shù)據(jù)集中核心基因與腫瘤免疫浸潤(rùn)的關(guān)系及核心基因影響乳腺癌進(jìn)展的潛在分子機(jī)制。研究結(jié)果表明，TERT與M0 型巨噬細(xì)胞、記憶激活的CD4 T 細(xì)胞、M1 型巨噬細(xì)胞)顯著正相關(guān)，與靜息的肥大細(xì)胞、靜息的記憶CD4 T 細(xì)胞)顯著負(fù)相關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)三陰性乳腺癌患者的細(xì)胞毒性和記憶性T 細(xì)胞顯著減少，而調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和凋亡T細(xì)胞顯著增加。腫瘤浸潤(rùn)有極化調(diào)節(jié)性T細(xì)胞提示三陰性乳腺癌患者的免疫抑制微環(huán)境和預(yù)后較差，認(rèn)為腫瘤浸潤(rùn)極化調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞提示免疫抑制微環(huán)境和三陰性乳腺癌患者預(yù)后較差[32]。研究發(fā)現(xiàn)記憶CD4+T 細(xì)胞誘由淋巴結(jié)中激活的單核/巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的，作用于特定腫瘤細(xì)胞，從而起到抗腫瘤免疫作用，而且miR-18a 通過(guò)抑制CD4+T 細(xì)胞的增殖和增加活化誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡[33-34]。

TERT 基因表達(dá)是乳腺癌疾病進(jìn)展及預(yù)后的分子，并且早期乳腺癌手術(shù)治療、化療、靶向治療效果明確。因此，進(jìn)一步探討核心基因與常見(jiàn)化療藥物的敏感性。研究結(jié)果表明，TERT 的高表達(dá)乳腺癌患者對(duì)伊馬替尼、順鉑、吉非替尼、達(dá)沙替尼、埃羅替尼以及吉西他濱等藥物敏感性高。但低表達(dá)hTERT 抑制通過(guò)改變白血病腫瘤細(xì)胞周期導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞衰老來(lái)增強(qiáng)伊馬替尼[35]，并且上調(diào)hTERT端粒酶活性增加伊馬替尼對(duì)白血病的耐藥性[36]。順鉑在抗腫瘤藥物中是屬于鉑類(lèi)藥物，在腫瘤細(xì)胞中可抑制其DNA復(fù)制來(lái)達(dá)到抗腫瘤作用，有較強(qiáng)的廣譜抗癌作用。順鉑也可以與其他抗腫瘤藥聯(lián)合用藥，如順鉑聯(lián)合紫衫類(lèi)藥物治療頭頸鱗狀細(xì)胞癌[37]及間變性甲狀腺癌[38]。吉西他賓為胞密啶類(lèi)抗腫瘤藥。研究表明，吉西他賓與hTERT抑制劑聯(lián)合用藥可增加抗腫瘤活性[39]。吉非替尼是一種選擇性表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)洛氨酸激酶抑制劑。研究表明吉非替尼通過(guò)EGFR 誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞hTERT 下調(diào)，使乳腺癌細(xì)胞端粒酶活性喪失，使腫瘤細(xì)胞失活[40-41]。

綜上所述，TERT在乳腺癌中異常上調(diào)，其過(guò)表達(dá)提示這患者預(yù)后差及腫瘤的惡性發(fā)展，并且主要參與了錯(cuò)配修復(fù)、原發(fā)性免疫缺陷、RNA 聚合酶信號(hào)通路的調(diào)控。TERT 基因是乳腺癌治療的新型靶點(diǎn)，與多種化療藥物、靶向治療藥物敏感性相關(guān)。