董 磊，沙麗穎，楊 雪，張 輝

（青島大學(xué)附屬醫(yī)院，山東266000）

參芪幾丁聚糖膠囊為本院醫(yī)院制劑，由女貞子、黃芪、黨參、白花蛇舌草、半枝蓮、幾丁聚糖等多味中藥組成，具有滋陰補(bǔ)氣、解毒散瘀等功效，臨床用于防治腫瘤患者放化療引起的副作用，提高肌體免疫力，修復(fù)各種理化損傷。處方中女貞子為主要成分，《神農(nóng)本草經(jīng)》言其主補(bǔ)中，安五臟，養(yǎng)精神，除百疾，久服肥健。將其列為補(bǔ)益藥之上品。女貞子含有多種化學(xué)成分，主要有環(huán)烯醚萜類、三萜類、黃酮類、揮發(fā)油、多糖類、苯乙醇苷、脂肪酸、氨基酸和微量元素等。現(xiàn)代藥理研究表明，女貞子具有抗炎、抗菌、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、延緩衰老、保肝護(hù)肝、降糖降脂、抗病毒等多種藥理作用［1］。女貞子中含有的齊墩果酸、特女貞苷為測(cè)定女貞子含量的常用指標(biāo)成分。本文參考《中國(guó)藥典》2020版將特女貞苷作為參芪幾丁聚糖膠囊中女貞子含量測(cè)定的指標(biāo)成分。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀Waters 1525，2487紫外檢測(cè)器（美國(guó)沃特世公司）；GR-202電子分析天平（日本AND公司）。特女貞苷對(duì)照品（批號(hào)為11926-201906，含量以95.0%計(jì)，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；參芪幾丁聚糖膠囊（0.33 g/粒，批號(hào)20201009、20201112、20201210，青島大學(xué)附屬醫(yī)院）；甲醇（色譜純，德國(guó)merk公司）；水為自制超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 采用高效液相色譜法，色譜柱為Waters Symmetry C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇-水（40∶60）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為224 nm，柱溫為35℃，流速為1.0 ml/min，進(jìn)樣量為10 μl。

2.2溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取特女貞苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml含0.25 mg的特女貞苷對(duì)照品儲(chǔ)備液，精密量取儲(chǔ)備液2 ml置10 ml量瓶中，加40%甲醇溶解至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品細(xì)粉2 g，精密稱定，置50 ml量瓶中，加40%甲醇適量，超聲30 min，放冷至室溫，加40%甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 按參芪幾丁聚糖膠囊處方及制劑工藝，制成缺女貞子的陰性樣品。按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備陰性樣品溶液，即得。

2.3 專屬性試驗(yàn) 取“2.2”項(xiàng)下特女貞苷對(duì)照品溶液、供試品溶液（批號(hào)為20201009）和陰性樣品溶液各10 μl，注入高效液相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果供試品溶液色譜圖中呈現(xiàn)與特女貞苷對(duì)照品保留時(shí)間一致的色譜峰，各成分之間分離度良好，無(wú)雜質(zhì)峰干擾，陰性樣品對(duì)待測(cè)成分特女貞苷無(wú)干擾。表明在此色譜條件下，該方法的專屬性良好,理論板數(shù)按特女貞苷峰計(jì)算大于4 000，分離度大于1.5。見(jiàn)圖1。

圖1 對(duì)照品（A）

2.4 線性關(guān)系考查 分別精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液0.1、0.5、1、2、3和5 ml于10 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，得含特女貞苷濃度分別為2.5、12.5、25、50、75和125 μg/ml的對(duì)照品溶液，分別精密量取10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜峰。以特女貞苷對(duì)照品的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積積分值為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=11 204 X+8 730.7（r=0.999 9）。結(jié)果表明特女貞苷質(zhì)量濃度在2.5～125 μg/ml范圍內(nèi)，濃度與峰面積線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下特女貞苷對(duì)照品溶液10 μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定并記錄色譜峰面積，結(jié)果平均峰面積RDS為1.1%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品（批號(hào)為20201009），按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12和16 h進(jìn)樣，記錄色譜峰面積，結(jié)果平均峰面積RSD為1.7%（n=6），表明供試品溶液在16 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品（批號(hào)為20201009）2 g，6份，分別置50 ml量瓶中，加40%甲醇適量，超聲30 min，放冷至室溫，加40%甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過(guò)，取續(xù)濾液搖勻作為供試品溶液。另取特女貞苷對(duì)照品25 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液，精密量取儲(chǔ)備液2 ml置10 ml量瓶中，加40%甲醇溶解至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。精密量取上述溶液各10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。每粒樣品中特女貞苷的平均含量為119.8 μg，RSD為1.6%（n=6）。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的參芪幾丁聚糖膠囊樣品（批號(hào)為20201009）9份，每份約1 g，精密稱定，分別加對(duì)照品儲(chǔ)備液1.1、1.4和1.7 ml，制成高、中、低3個(gè)濃度的供試品溶液，每個(gè)濃度重復(fù)3份。按“2.2.2”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為99.6%，RSD為0.2%。見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

2.9 樣品測(cè)定 取不同批號(hào)的樣品，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 3批樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 流動(dòng)相的選擇 參照《中國(guó)藥典》2020年版一部女貞子中特女貞苷的含量測(cè)定方法及參考文獻(xiàn)［2-6］，分別考查了0.1%磷酸水-乙腈、乙腈-水、甲醇-水等不同流動(dòng)相，試驗(yàn)結(jié)果表明甲醇-水（40∶60）分離效果較好。

3.2 提取條件的選擇 預(yù)試驗(yàn)對(duì)特女貞苷提取時(shí)間（20、30、50和60 min）進(jìn)行了考查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)超聲提取30 min可提取完全，方法簡(jiǎn)便、易行、效率高，有利于節(jié)約實(shí)驗(yàn)室的人力、物力，因此提取方法確定為超聲30 min。

3.3 耐用性考查 分別考查不同批號(hào)色譜柱、不同流速（1和0.8 ml/min）、不同柱溫（35和30℃）、不同甲醇比例（40%和45%）色譜條件下的耐用性。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算本品的含量。結(jié)果顯示，色譜條件發(fā)生微小變化對(duì)檢測(cè)結(jié)果無(wú)影響，該方法耐用性良好。

參芪幾丁聚糖膠囊原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)未對(duì)女貞子指標(biāo)成分進(jìn)行測(cè)定，本文通過(guò)查閱文獻(xiàn)，采用高效液相色譜法，測(cè)定參芪幾丁聚糖膠囊中特女貞苷的含量，建立了參芪幾丁聚糖膠囊的含量測(cè)定方法。結(jié)果顯示該方法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果可靠準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，為提高參芪幾丁聚糖膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考，為更加全面地評(píng)價(jià)參芪幾丁聚糖膠囊的質(zhì)量提供科學(xué)依據(jù)。