何虹，朱榮，丁建東，盧日剛

（廣西壯族自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所，南寧 530021）

為了驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力，確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可比性，定期開(kāi)展實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)活動(dòng)，能直接反映實(shí)驗(yàn)室的儀器設(shè)備和技術(shù)素質(zhì)的實(shí)際水平和出具報(bào)告的能力［1-2］。本次諾氟沙星含量測(cè)定的盲樣考核所采用的檢驗(yàn)方法，參考藥品原料藥諾氟沙星的現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)［3］，采用目前藥品檢驗(yàn)常用的高效液相色譜法測(cè)定［4］。本次盲樣考核用曼德?tīng)杊／k統(tǒng)計(jì)替代通常的離群值檢驗(yàn)方法，避免冒失地剔除不一致的數(shù)據(jù)導(dǎo)致方法精密度的誤判，幫助考察實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員（QC）對(duì)于高效液相色譜法的檢測(cè)能力，以及監(jiān)控實(shí)驗(yàn)室的持續(xù)檢測(cè)能力，有助于識(shí)別實(shí)驗(yàn)室的問(wèn)題并采取糾正措施，提高質(zhì)量管理水平。

1 樣品與方法

1.1 盲樣考核樣品

本次盲樣考核樣品為諾氟沙星樣品，由南寧金馬制藥廠（有限公司）生產(chǎn)，樣品呈類(lèi)白色粉末，包裝于棕色瓶?jī)?nèi)。經(jīng)均勻性和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)合格后的樣品，作為盲樣考核用樣品發(fā)送給參加本次盲樣考核的16 家實(shí)驗(yàn)室［5］。

為了更加客觀、公正地評(píng)價(jià)參加實(shí)驗(yàn)室結(jié)果及防止實(shí)驗(yàn)室間數(shù)據(jù)串通，本次盲樣考核配送給每個(gè)實(shí)驗(yàn)室1 個(gè)工作對(duì)照品、1 個(gè)樣品，以及2 個(gè)干擾樣品（準(zhǔn)備3 個(gè)干擾樣品，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室隨機(jī)配送2 個(gè)，干擾樣品不參與結(jié)果評(píng)判）。

1.2 樣品測(cè)定方法

1.2.1 儀器工作條件

色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相：0.025 mol／L 磷酸溶液（用三乙胺調(diào)pH 值至3.0）-乙腈（87∶13）；檢測(cè)波長(zhǎng)：278 nm；流量：1.0 mL／min；進(jìn)樣體積：20 μL。

1.2.2 樣品處理

（1）供試品溶液的制備。取細(xì)粉樣品100 mg，精密稱(chēng)定，置于200 mL 容量瓶中，加0.1 mol／L鹽酸溶液4 mL 溶解，用水稀釋至標(biāo)線，搖勻，精密量取續(xù)濾液5 mL，置于50 mL 容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至標(biāo)線，搖勻，作為供試品溶液。

（2）對(duì)照品溶液的制備。取諾氟沙星工作對(duì)照品25 mg，精密稱(chēng)定，加適量0.1 mol／L 鹽酸溶液溶解，同法操作，用流動(dòng)相稀釋成諾氟沙星質(zhì)量濃度為25 mg／mL 對(duì)照品溶液。

1.2.3 樣品測(cè)定

將儀器調(diào)至最佳狀態(tài)，取諾氟沙星供試品溶液和對(duì)照品溶液各20 μL 注入液相色譜儀，記錄諾氟沙星色譜峰的保留時(shí)間和峰面積，以保留時(shí)間作為定性依據(jù)，以色譜峰面積作為定量依據(jù)，按外標(biāo)法-單點(diǎn)校正法計(jì)算諾氟沙星樣品的含量。諾氟沙星樣品的含量按照公式(1)計(jì)算：

1.2.4 樣品結(jié)果

以百分含量報(bào)告測(cè)定結(jié)果（按照對(duì)照品計(jì)算，不扣除水分），保留小數(shù)點(diǎn)后2 位，并將兩次測(cè)定的結(jié)果、平均值以及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差填入結(jié)果報(bào)告單中。

1.3 評(píng)價(jià)方法

本次盲樣考核采用安德森-達(dá)林（AD）檢驗(yàn)和曼德?tīng)枺∕andel's）h／k檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和評(píng)價(jià)。

1.3.1 安德森-達(dá)林統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)

安德森-達(dá)林（AD）統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)可用于度量數(shù)據(jù)服從特定概率分布的程度。AD 統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)按照公式(2)計(jì)算。

1.3.2 曼德?tīng)杊／k統(tǒng)計(jì)量檢驗(yàn)

曼德?tīng)杊／k統(tǒng)計(jì)量檢驗(yàn)用來(lái)評(píng)定分析數(shù)據(jù)的一致性，該統(tǒng)計(jì)屬于單水平下實(shí)施的單因素方差分析。h值是實(shí)驗(yàn)室間一致性的統(tǒng)計(jì)量，即水平下某參加實(shí)驗(yàn)室與水平總體之差的度量，反映單個(gè)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)結(jié)果的均值與所有實(shí)驗(yàn)室結(jié)果均值的偏差。k值是把單個(gè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的重復(fù)性偏差與所有參與盲樣考核實(shí)驗(yàn)室的平均重復(fù)性偏差進(jìn)行對(duì)比，反映單個(gè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)各實(shí)驗(yàn)結(jié)果與其均值相比，其它實(shí)驗(yàn)室的偏差。h-crit 臨界值和k-crit 臨界值分別按公式(3)和公式(4)計(jì)算［6］：

采用曼德?tīng)杊／k統(tǒng)計(jì)量檢驗(yàn)，既可以檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室間測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確度，又可以檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)測(cè)試結(jié)果的精密度。一般情況下，某個(gè)實(shí)驗(yàn)室的h值越大，表明其測(cè)試結(jié)果準(zhǔn)確度越低。當(dāng)h值不大于5%的臨界值時(shí)，認(rèn)為該值為可信值；當(dāng)h值大于5%的臨界值且不大于1%的臨界值時(shí)，認(rèn)為該值為歧離值；當(dāng)h值大于1%的臨界值時(shí)，認(rèn)為該值為離群值。某個(gè)實(shí)驗(yàn)室的k值越大，表明其實(shí)驗(yàn)室測(cè)試結(jié)果的精密度越低。當(dāng)k值不大于5%的臨界值時(shí)，認(rèn)為該值為可信值，當(dāng)k值大于5%的臨界值且不大于1%的臨界值時(shí)，認(rèn)為該值為歧離值；當(dāng)k值大于1%的臨界值時(shí)，認(rèn)為該值為離群值。

2 結(jié)果與分析

2.1 參加對(duì)象

本次盲樣考核的對(duì)象為廣西壯族自治區(qū)內(nèi)9 個(gè)市的16 家實(shí)驗(yàn)室，其中9 家為自治區(qū)內(nèi)各市級(jí)的藥品檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室，其余7 家為自治區(qū)內(nèi)有GMP 認(rèn)證的藥品生產(chǎn)企業(yè)QC 實(shí)驗(yàn)室。樣品發(fā)放前，由廣西壯族自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所負(fù)責(zé)樣品均勻性和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)。

2.2 盲樣考核結(jié)果

參加盲樣考核的16 個(gè)實(shí)驗(yàn)室（代碼為i=A01、A02、A03、A04、A05、A06、A07、A08、A09、A10、A11、A12、A13、A14、A15、A16），按照1.2 檢驗(yàn)方法對(duì)盲樣中諾氟沙星的含量進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)樣品進(jìn)行2 次獨(dú)立測(cè)定(編號(hào)為j=1、2)，16 家參加盲樣考核實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 16 家參加盲樣考核實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果 %

2.3 盲樣考核結(jié)果數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

因參加實(shí)驗(yàn)室的數(shù)量未能滿(mǎn)足穩(wěn)健統(tǒng)計(jì)［7］的要求，故剔除每家實(shí)驗(yàn)室的干擾樣品值后，固定檢測(cè)樣品分別采用安德森-達(dá)林檢驗(yàn)、曼德?tīng)杊／k統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)，對(duì)16 家參加實(shí)驗(yàn)室的盲樣考核結(jié)果進(jìn)行單因素方差統(tǒng)計(jì)分析。

2.3.1 測(cè)定結(jié)果的安德森-達(dá)林統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)

根據(jù)表1 中16 家參加盲樣考核實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果數(shù)據(jù)，采用安德森-達(dá)林檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析，運(yùn)用公式(2)計(jì)算出16 家實(shí)驗(yàn)室結(jié)果數(shù)據(jù)的安德森-達(dá)林統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)量見(jiàn)表2。

表2 16 家實(shí)驗(yàn)室盲樣考核結(jié)果AD 統(tǒng)計(jì)量

2.3.2 測(cè)定結(jié)果的曼德?tīng)杊／k統(tǒng)計(jì)量檢驗(yàn)

根據(jù)表1 中檢測(cè)結(jié)果數(shù)據(jù)，按公式(3)和公式(4)，采用曼德?tīng)杊／k檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算出16 家實(shí)驗(yàn)室的曼德?tīng)杊統(tǒng)計(jì)量和k統(tǒng)計(jì)量見(jiàn)表3。

表3 實(shí)驗(yàn)室間檢測(cè)結(jié)果的曼德?tīng)杊／k 統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)表

在95%的概率下，分別繪制各實(shí)驗(yàn)室的曼德?tīng)杊值分析柱狀圖（圖1）和k值分析柱狀圖（圖2）。

圖1 水平樣品下的實(shí)驗(yàn)室間檢測(cè)結(jié)果h 統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)量柱狀圖

圖2 水平樣品下的實(shí)驗(yàn)室間檢測(cè)結(jié)果k 統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)量柱狀圖

結(jié)合表3 數(shù)據(jù)，從h值統(tǒng)計(jì)圖中（圖1）可知，在曼德?tīng)杊的統(tǒng)計(jì)結(jié)果中，實(shí)驗(yàn)室A09、A15 及A14的結(jié)果分別為-1.990、-1.900、1.951，屬于歧離值，其余13 家結(jié)果為正常值。由k值統(tǒng)計(jì)圖（圖2）可知，在曼德?tīng)杒的統(tǒng)計(jì)結(jié)果中，實(shí)驗(yàn)室A05 的結(jié)果分別為2.115，屬于歧離值，其余14 家結(jié)果為正常值。若僅根據(jù)實(shí)驗(yàn)室間曼德?tīng)杊／k檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量判定實(shí)驗(yàn)室結(jié)果可疑，容易導(dǎo)致誤判的可能，需要進(jìn)一步分析。經(jīng)查看上述4 家實(shí)驗(yàn)室盲樣考核原始數(shù)據(jù)的記錄，表明不存在樣品前處理、程序、謄抄等方面的失誤。隨后征詢(xún)了A05、A09、A14 及A15 實(shí)驗(yàn)室的意見(jiàn)，這4 家實(shí)驗(yàn)室均認(rèn)為是嚴(yán)格遵守規(guī)范進(jìn)行操作。曼德?tīng)杊和k檢驗(yàn)中的歧離值屬于隨機(jī)誤差，因此16 家實(shí)驗(yàn)室的盲樣考核結(jié)果滿(mǎn)意。

3 技術(shù)分析與建議

3.1 技術(shù)分析

本次盲樣考核共發(fā)放3 個(gè)不同濃度的樣品，除1 個(gè)固定檢測(cè)樣品（A）外，隨機(jī)發(fā)放2 個(gè)干擾樣品。采用曼德?tīng)杊／k檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析方法，對(duì)16 家實(shí)驗(yàn)室的所有測(cè)定數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，分別計(jì)算每個(gè)濃度樣品參加實(shí)驗(yàn)室上報(bào)數(shù)據(jù)的k值，發(fā)現(xiàn)共有7 家實(shí)驗(yàn)室收到相同的3 個(gè)不同濃度樣品（A、C、D）。綜合這7 家實(shí)驗(yàn)的k值數(shù)據(jù)，繪制出3 個(gè)濃度樣品的k值分析圖（圖3）并進(jìn)行比較。分析發(fā)現(xiàn)A04 實(shí)驗(yàn)室3 個(gè)不同濃度k值均接近0，表明該實(shí)驗(yàn)室提交的檢測(cè)數(shù)據(jù)可信度差［14］。從圖3 分析圖中可更直觀的顯示7 家實(shí)驗(yàn)室3 個(gè)不同濃度的檢測(cè)情況，疑存檢驗(yàn)人員修改數(shù)據(jù)的情況發(fā)生。該問(wèn)題應(yīng)引起A04 實(shí)驗(yàn)室管理者的高度注意，應(yīng)對(duì)人、機(jī)、料、法、環(huán)等因素進(jìn)行核查［15］。

圖3 3 個(gè)濃度樣品數(shù)據(jù)的k 值分析圖

本次盲樣考核的16 家實(shí)驗(yàn)室有9 家為本區(qū)域內(nèi)的藥品檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室，其余7 家為藥品生產(chǎn)企業(yè)QC 實(shí)驗(yàn)室，從原始數(shù)據(jù)（表1）分析，采用安德森-達(dá)林檢驗(yàn)和曼德?tīng)杊／k檢驗(yàn)的各參加實(shí)驗(yàn)室的測(cè)試結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，簡(jiǎn)單、直觀、有效，且利于比較，及時(shí)發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室存在的不足，了解與其它實(shí)驗(yàn)室的差距，便于進(jìn)行下一步改進(jìn)［16］。

3.2 改進(jìn)建議

基于曼德?tīng)杊／k統(tǒng)計(jì)法評(píng)價(jià)這次的盲樣考核結(jié)果，發(fā)現(xiàn)本次參加的A04 實(shí)驗(yàn)室3 個(gè)不同濃度k值均接近0，可再組織一次同類(lèi)型多水平濃度盲樣考核，追蹤該實(shí)驗(yàn)室提交的數(shù)據(jù)，若再次發(fā)現(xiàn)A04實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)此類(lèi)情況，可以表明該實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)人員有修改數(shù)據(jù)的情況存在。實(shí)驗(yàn)室盲樣考核使用曼德?tīng)杊／k統(tǒng)計(jì)，可及時(shí)發(fā)現(xiàn)問(wèn)題，真正起到發(fā)揮質(zhì)量管理工具的作用。

4 總結(jié)

采用曼德?tīng)杊／k檢驗(yàn)方法評(píng)估盲樣考核結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)差與準(zhǔn)確度后，各個(gè)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)表現(xiàn)的優(yōu)劣和誤差可以被確定。每一個(gè)參加者可以了解其結(jié)果在本次盲樣考核計(jì)劃中所處的水平，對(duì)于各自存在的問(wèn)題可以進(jìn)一步查證原因，及時(shí)改正。今后應(yīng)繼續(xù)加強(qiáng)藥品檢測(cè)人員的業(yè)務(wù)綜合技能的培訓(xùn)，積極組織多種形式的內(nèi)外部能力驗(yàn)證，提升QC 檢驗(yàn)人員的藥品檢測(cè)能力水平。建議各實(shí)驗(yàn)室在檢測(cè)過(guò)程中，確保一切檢測(cè)活動(dòng)可控、可追溯、可重現(xiàn)，保證實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制措施的落實(shí)。