陳蘭濤 李曉娜 謝杰 田丹丹 劉單霞 段寶民

【摘要】 目的 ?分析成人膿毒癥與腸道菌群失衡的相關性。

方法 ?選擇2017年1月至2019年12月期間75例膿毒癥患者及同期24名健康體檢者為研究對象，分別設為患者組、健康組，其中患者組依據(jù)其病情嚴重程度分為膿毒癥組45例、膿毒癥休克組30例，均實施糞便菌群檢測，評價成人膿毒癥與腸道菌群的相關性。

結(jié)果 ?患者組腸道菌群失衡[B/E（雙歧桿菌/腸桿菌）]<1）占比為80.00%，較健康組（25.00%）高（ P <0.01）;患者組中膿毒癥組、膿毒癥休克組腸道菌群失衡占比分別為73.33%、90.00%，;健康組、膿毒癥組、膿毒癥休克組B/E值比較，差異有統(tǒng)計學意義（ P <0.001），膿毒癥休克組B/E值低于膿毒癥組（ P <0.05）;膿毒癥患者病情嚴重程度與B/E比值水平呈負相關（Kendalls tau-b= -0.439， P <0.001）。

結(jié)論 ?成人膿毒癥嚴重程度與腸道菌群失衡呈現(xiàn)相關性。

【關鍵詞】 ?腸道菌群失衡;成人膿毒癥;內(nèi)毒素

中圖分類號： R459.7?? ?文獻標志碼： A?? ?DOI： 10.3969/j.issn.1003-1383.2021.08.005

Study on correlation between sepsis and imbalance of intestinal flora in adults

CHEN Lantao， LI Xiaona， XIE Jie， TIAN Dandan， LIU Danxia， DUAN Baomin▲

（Emergency Center， Kaifeng Central Hospital， Kaifeng 475000， Henan， China）

【Abstract】 Objective ?To analyze correlation between sepsis and the imbalance of? intestinal flora in adults.

Methods ?75 patients with sepsis from January 2017 to December 2019 and 24 healthy people who underwent physical examination during the same period were selected for the study. They were divided into patient group and healthy group， among which the patient group were divided into sepsis group （ n ?= 45） and sepsis shock group （ n ?= 30） according to the severity of the disease， and all of which were given fecal flora testing to evaluate the correlation between sepsis and intestinal flora in adults.

Results ?The percentage of intestinal flora imbalance （bifidobacterium/enterobacteriaceae [B/E] < 1） in the patient group was 80.00%， which was higher than that in the healthy group （25.00% ） （ P ?< 0.01）; the percentage of intestinal flora imbalance in the sepsis group and the sepsis shock group was 73.33% and 90.00%， respectively （ P ?< 0.05）; the difference of the B/E ratio of the healthy group， the sepsis group and the sepsis shock group was statistically significant （ P ?< 0.001）， and that of the sepsis shock group was lower than that of the sepsis group （ P ?< 0.05）; the severity of sepsis patients was negatively correlated with the level of B/E ratio （Kendalls tau-b = -0.439， ?P ?< 0.001）.

Conclusion ?The severity of sepsis in adults is correlated with the imbalance of intestinal flora.

【Key words】 ?imbalance of intestinal flora; adult sepsis; endotoxin

膿毒癥指病原微生物侵入組織器官及血液循環(huán)誘發(fā)的全身性炎性反應，隨著感染癥狀加重，可逐漸出現(xiàn)多器官功能障礙、休克等癥狀，嚴重威脅患者生命安全[1]。人的胃腸道大約有1000多種不同種類的細菌[2]，包括專性厭氧菌（95%）和兼性厭氧菌（5%），專性厭氧菌包括雙歧桿菌、梭狀芽孢桿菌等，雙歧桿菌是80%的嬰兒和25%的成年人中可培養(yǎng)的主要微生物，這些微生物在腸道特定區(qū)域內(nèi)，直接激活腸上皮的發(fā)育和分化，并維持腸上皮細胞的完整性[3]，是保證腸道生理機能及免疫功能的重要屏障，其多種疾病狀態(tài)下都會發(fā)生較大改變[4]，甚至當機體出現(xiàn)應激反應時，腸道菌群微生態(tài)平衡都會遭到破壞，表現(xiàn)出胃腸道癥狀[5]。相關研究認為[6～7]，發(fā)生膿毒癥后患者腸道菌群平衡性會出現(xiàn)明顯變化，腸道屏障能力喪失，可影響患者腸道營養(yǎng)吸收能力，進而影響其免疫功能恢復[8]。因此，明確膿毒癥患者病情嚴重程度及腸道菌群關系，對實施針對性營養(yǎng)供給及治療具有積極意義。本研究選取我院2017年1月至2019年12月期間75例膿毒癥患者及同期24名健康體檢者為研究對象，探討膿毒癥嚴重程度與腸道菌群間的關系，現(xiàn)匯報如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2017年1月至2019年12月期間75例膿毒癥患者及同期24名健康體檢者為研究對象，分別設為患者組、健康組，其中患者組依據(jù)其病情嚴重程度分為膿毒癥組45例、膿毒癥休克組30例。各組間患者年齡、體重指數(shù)及男女所占比例資料相近（ P >0.05）;研究符合醫(yī)學倫理。見表1。

1.2 納入與排除標準

納入標準：（1）均符合膿毒癥診斷指南標準[9]，感染或疑似感染的患者，膿毒癥相關序貫器官衰竭[sequential（sepsis-related） organ failure assesment，SOFA]評分較基線上升≥2分診斷為膿毒癥;膿毒癥休克為經(jīng)補液治療后仍表現(xiàn)為血流灌注障礙及低血壓，需要血管活性藥物維持平均 動脈壓（MAP）≥65 mmHg及血乳酸濃度≥2 ?mmol/L。（2）符合腸道菌群失衡診斷標準[10]：①具有腹瀉、腹部不適等癥狀;②實驗室檢查糞便鏡檢球菌/桿菌比例失衡;③糞便培養(yǎng)計數(shù)B/E（雙歧桿菌/腸桿菌）<1;④糞便培養(yǎng)中非正常細菌明顯增多或占絕對優(yōu)勢;滿足以上兩項者即診斷為腸道菌群失衡。（3）患者年齡≥18歲。（4）患者（或）家屬對研究知情同意。

排除標準：（1）伴嚴重器官功能障礙者;（2）伴凝血功能障礙者;（3）嚴重精神障礙，無法配合完成研究者;（4）臨床資料不完整者;（5）既往胃腸道疾病史者。

1.3 方法

取受試者0.5 g糞便樣本，置于滅菌厭氧試管中，加入PBS（磷酸緩沖鹽）緩沖液4.5 mL進行10 min震蕩搖勻，2000 r/min離心10 min，收集上清;混合液初始濃度為10-1，取0.15 mL混合液融入1.35 mL 0.9%氯化鈉溶液中，此時混合濃度為10-2，持續(xù)進行10倍梯度稀釋至10-8;將MRS瓊脂培養(yǎng)基（青島海博生物，魯青械備20160069號）沸水溶化后置48℃恒溫水浴中備用，取0.1 mL混懸液接種于瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)48 h;將中國藍瓊脂培養(yǎng)基（鄭州安圖生物工程股份有限公司，豫食藥監(jiān)械生產(chǎn)許20160058號）復溫至常溫25℃，取0.1 mL混懸液接種于瓊脂培養(yǎng)基中，36℃培養(yǎng)24 h;菌株與Viteck2系統(tǒng)鑒定，質(zhì)控標準株為ATCC29521、ATCC25922;計算B/E值：選適當菌落稀釋計數(shù)，結(jié)果以單位/克對數(shù)值表示，B/E>1提示腸道菌群正常，B/E<1表示腸道菌群紊亂，且比值越小表示腸道菌群紊亂程度越高[10]。

1.4 觀察指標

（1）比較健康組、患者組腸道菌群失衡占比，即B/E<1占比;（2）評價患者腸道菌群失衡占比與膿毒癥的相關性。

1.5 統(tǒng)計學方法

計算軟件選用SPSS 26.0，計量資料以（ ?±s ）表示，多組間比較采用方差分析，進一步兩兩比較采用 q 檢驗，菌群失調(diào)占比等計數(shù)資料以（%）表示，用χ2檢驗，組間比較用單因素ANOVA檢驗;危險性相關評價用采用Kendalls tau-b相關分析;檢驗水準：α=0.05，雙側(cè)檢驗。

2 結(jié)? 果

2.1 健康組、患者組腸道菌群失衡占比

患者組腸道菌群失衡占比為80.00%，較健康組25.00%高（ P <0.05）;患者組中膿毒癥組、膿毒癥休克組腸道菌群失衡占比分別為73.33%、90.00%，膿毒癥組腸道菌群失衡占比較膿毒癥休克組低（ P <0.05），即隨著感染程度加重，B/E<1所占比例升高，腸道菌群失調(diào)患者比例增加。見表2。

2.2 患者組病情嚴重程度及腸道菌群失衡相關性分析

如表2所示，健康組、膿毒癥組及膿毒癥休克組B/E值比較，差異有統(tǒng)計學意義（ P <0.001），健康組與膿毒癥組、膿毒癥休克組患者B/E值比較差異均有統(tǒng)計學意義（ P <0.01），膿毒癥組與膿毒癥休克組患者B/E值比較差異有統(tǒng)計學意義（ P <0.05）;用Kendalls tau-b相關評價研究膿毒癥患者病情嚴重程度與B/E值水平關系，Kendalls tau-b=-0.439， P <0.001。即B/E值<1后其比值越小，膿毒癥患者病情越嚴重。

3 討? 論

膿毒癥為臨床常見感染性病癥，隨炎癥反應加重可誘發(fā)器官及循環(huán)功能障礙，病死率高[5，11～13]。從動物模型中獲得的臨床前數(shù)據(jù)表明，腸道微生物在宿主對膿毒癥的防御中起保護作用[14～16]，營養(yǎng)缺乏可能改變腸道微生物組分，削弱上皮屏障功能，導致細菌易位。另外，抗生素等藥物使用也可能是膿毒癥患者腸道菌群失衡的因素，在革蘭氏陽性和革蘭氏陰性的小鼠模型中，抗生素可引起腸道微生物群的破壞[15，17]，甚至出現(xiàn)多重耐藥菌如艱難梭菌的院內(nèi)感染。

膿毒癥患者營養(yǎng)吸收能力下降、機體器官組織恢復能力緩慢，而腸道菌群為腸道營養(yǎng)物質(zhì)吸收主要影響因素[18];且臨床研究發(fā)現(xiàn)膿毒癥患者多伴腹瀉、腹脹等胃腸道癥狀，考慮與腸道菌群失衡相關，因此明確成人膿毒癥患者與腸道菌群失衡的相關性具重要意義，可為臨床針對性治療提供參考依據(jù)[19]。

本研究發(fā)現(xiàn)，膿毒癥組患者腸道菌群失衡占比較健康組高，且在膿毒癥患者組間比較中，膿毒癥組患者腸道菌群失衡占比較膿毒癥休克組低;同時對比健康組、膿毒癥組和膿毒癥休克組B/E值發(fā)現(xiàn)，三組患者B/E值比較有統(tǒng)計學意義，通過Kendalls tau-b相關評價研究發(fā)現(xiàn)膿毒癥嚴重程度與腸道菌群失衡呈正相關，即膿毒癥癥狀嚴重程度高，其腸道菌群失衡情況嚴重，考慮原因為：膿毒癥屬應激反應，可誘發(fā)患者黏膜屏障通透性增加，腸道細菌及內(nèi)毒素移位甚至通過誘發(fā)感染性癥狀，并隨著炎性反應加劇，腸道菌群屏障保護能力下降或消失，機體免疫能力下降，觸發(fā)機體過炎癥反應，誘發(fā)全身器官功能損害[20]。因此建議膿毒癥患者入院治療期間需注意患者腸道功能恢復，并盡早使用腸內(nèi)營養(yǎng)以避免腸道發(fā)生萎縮誘發(fā)菌群失衡。有報道，基于益生菌、益生菌或共生體（益生菌和益生菌聯(lián)合使用）的療法可以減少危重疾病中普遍存在的對健康微生物體的破壞，改善微生物群的恢復，從而限制感染的出現(xiàn)，并最終加速腸道菌群恢復[21]，提升機體免疫能力、穩(wěn)定腸道功能[22]。

綜上，本研究證實膿毒癥患者與其腸道菌群失衡存在相關性，且膿毒癥病情程度越嚴重，腸道菌群失衡程度越高，因此在膿毒癥治療時需注意保護腸道菌群穩(wěn)定性。但是我們納入患者人數(shù)比較少，可能實驗結(jié)果會有偏倚，需要臨床大數(shù)據(jù)進一步臨床觀察。

參 考 文 獻

[ 1] ??陳嬌嬌，周瑩群.腸道菌群在炎癥性腸病發(fā)病機制中作用的研究進展[J].世界臨床藥物，2019，40（5）：324-328.

[ 2] ??QIN J，LI R，RAES J，et al.A human gut microbial gene catalogue established by metagenomic sequencing[J].Nature，2010，464（7285）：59-65.

[ 3] ??GUARNER F，MALAGELADA J R.Gut flora in health and disease[J].Lancet，2003，361（9356）：512-519.

[ 4] ??MORON R，GALVEZ J，COLMENERO M，et al.The importance of the microbiome in critically ill patients：role of nutrition[J].Nutrients，2019，11（12）：3002.

[ 5] ??崔甜甜，王麗杰.腸屏障與腸源性內(nèi)毒素血癥[J].中國小兒急救醫(yī)學，2019，26（2）：134-138.

[ 6] ??LANKELMA J M， VAN VUGHT L A， BELZER C， et al. Critically ill patients demonstrate large interpersonal variation in intestinal microbiota dysregulation： a pilot study[J]. Intensive Care Med，2017，43（1）：59-68.

[ 7] ??MCDONALD D，ACKERMANN G，KHAILOVA L，et al.Extreme dysbiosis of the microbiome in critical illness[J].mSphere，2016，1（4）：e00199-e00116.

[ 8] ??萬有棟，朱瑞雪，潘新亭，等.膿毒性休克患者腸道微生態(tài)變化臨床研究[J].中華急診醫(yī)學雜志，2019，28（3）：350-355.

[ 9] ??中國醫(yī)師協(xié)會急診醫(yī)師分會，中國研究型醫(yī)院學會休克與膿毒癥專業(yè)委員會.中國膿毒癥/膿毒性休克急診治療指南（2018）[J].感染、炎癥、修復，2019，20（1）：3-22.

[10] ??《中華消化雜志》編委會.腸道菌群失調(diào)診斷治療建議[J].中華消化雜志，2009， 29（5）：335-337.

[11] ??王慧英，吳琳.10例重型顱腦損傷繼發(fā)膿毒癥患者的腸內(nèi)營養(yǎng)護理[J].檢驗醫(yī)學與臨床，2017，14（z2）：407-408.

[12] ??OJIMA M，MOTOOKA D，SHIMIZU K，et al.Metagenomic analysis reveals dynamic changes of whole gut microbiota in the acute phase of intensive care unit patients[J].Dig Dis Sci，2016，61（6）：1628-1634.

[13] ??DEFAZIO J，F(xiàn)LEMING I D，SHAKHSHEER B，et al.The opposing forces of the intestinal microbiome and the emerging pathobiome[J].Surg Clin North Am，2014，94（6）：1151-1161.

[14] ??YEH A，ROGERS M B，F(xiàn)IREK B，et al.Dysbiosis across multiple body sites in critically ill adult surgical patients[J].Shock，2016，46（6）：649-654.

[15] ??SCHUIJT T J，LANKELMA J M，SCICLUNA B P，et al.The gut microbiota plays a protective role in the host defence against pneumococcal pneumonia[J].Gut，2016，65（4）：575-583.

[16] ??DESHMUKH H S，LIU Y H，MENKITI O R，et al.The microbiota regulates neutrophil homeostasis and host resistance to Escherichia coli K1 Sepsis in neonatal mice[J].Nat Med，2014，20（5）：524-530.

[17] ??LANKELMA J M，BIRNIE E，WEEHUIZEN T A F，et al.The gut microbiota as a modulator of innate immunity during melioidosis[J].PLoS Negl Trop Dis，2017，11（4）：e0005548.

[18] ??劉麗平，胡生文，帥佃奎，等.前列地爾對膿毒癥胃腸功能障礙的臨床觀察[J].蘭州大學學報（醫(yī)學版），2017，43（3）：23-28.

[19] ??江利冰，李瑞杰，張斌，等. 2016年膿毒癥與膿毒性休克處理國際指南[J]. 中華急診醫(yī)學雜志，2017，26（3）：263-266.

[20] ??曹迎，曲志成，張紅升，等.中醫(yī)外治法治療膿毒癥胃腸功能障礙的Meta分析[J].北京中醫(yī)藥，2017，36（11）：1022-1026.

[21] ??DAVISON J M，WISCHMEYER P E.Probiotic and synbiotic therapy in the critically ill：State of the art[J].Nutrition，2019，59：29-36.

[22] ??張小彬，劉丹，王妍柏，等.血清腸型脂肪酸結(jié)合蛋白和D-乳酸水平在膿毒癥患者早期腸道損傷中的臨床意義[J].中華危重病急救醫(yī)學，2019，31（5）：545-550.

（收稿日期：2021-03-25 修回日期：2021-05-15）

（編輯：潘明志）