陳欣玥，金君華，張紅星，謝遠(yuǎn)紅

(北京農(nóng)學(xué)院食品科學(xué)與工程學(xué)院/食品質(zhì)量與安全北京實(shí)驗(yàn)室/ 農(nóng)產(chǎn)品有害微生物及農(nóng)殘安全檢測與控制北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京102206)

乳酸菌細(xì)菌素是由乳酸菌產(chǎn)生的一類具有抑菌活性的蛋白或多肽，近年來乳酸菌細(xì)菌素以其穩(wěn)定無毒、不改變食品風(fēng)味的特點(diǎn)常作為一種新型生物防腐劑應(yīng)用于食品加工與貯藏中，且有望成為抗生素的替代品[1]。細(xì)菌素按照化學(xué)結(jié)構(gòu)與分子量大小可分為四類：分子量為5 kD的羊毛硫抗生素[2]；分子量小于10 kD的小分子熱穩(wěn)定肽，分為IIa、IIb、IIc這3個(gè)亞類[2]；分子量大于10 kD的熱敏感大分子蛋白[2]；復(fù)合型乳酸菌細(xì)菌素[2]。目前，在所有乳酸菌細(xì)菌素中，針對IIa類乳酸菌細(xì)菌素的研究較為深入[3]：IIa類乳酸菌細(xì)菌素是由乳酸菌代謝產(chǎn)生的、具有革蘭氏陽性單增李斯特菌強(qiáng)抑菌活性的、未修飾的小分子熱穩(wěn)定肽[3-4]。IIa類細(xì)菌素對革蘭氏陰性菌的作用方式主要是與敏感菌的細(xì)胞膜相互作用，引起敏感菌細(xì)胞膜的改變，使細(xì)菌發(fā)生崩解死亡[5]。革蘭氏陰性菌對于IIa類細(xì)菌素敏感性的調(diào)控機(jī)制與作用靶點(diǎn)目前研究尚未定論。

雙組分系統(tǒng)是存在于細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)、協(xié)助細(xì)菌感知適應(yīng)不同環(huán)境變化的最普遍機(jī)制之一[6]。一個(gè)典型的雙組分系統(tǒng)是由一個(gè)位于內(nèi)膜上的傳感器激酶(組氨酸激酶)和一個(gè)細(xì)胞質(zhì)中的反應(yīng)調(diào)節(jié)因子組成[7-9]。大腸桿菌BasS/BasR雙組分系統(tǒng)是大腸桿菌中的鋅鐵感應(yīng)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)劑，其中BasS(又稱PmrB)為傳感器激酶蛋白，BasR(又稱PmrA)為反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，在大腸桿菌外界環(huán)境改變時(shí)，通過磷酸化激活下游靶基因轉(zhuǎn)錄，改善細(xì)胞狀態(tài)，維持細(xì)胞穩(wěn)定[10-13]。已有研究表明，BasS/BasR雙組分系統(tǒng)通過修飾細(xì)胞膜來增加大腸桿菌的抗藥性，如對多粘菌素B的抗性[14]。BasS/BasR雙組分系統(tǒng)調(diào)控大腸桿菌對植物乳桿菌素抗性的研究較少。

在前期研究中，本課題組從傳統(tǒng)發(fā)酵肉制品中分離鑒定得到1株植物乳桿菌BM-1。植物乳桿菌BM-1能夠代謝產(chǎn)生一種IIa類乳酸菌細(xì)菌素即植物乳桿菌素BM-1。該細(xì)菌素對單增李斯特菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌和大腸桿菌等都有一定的抑菌作用[12]。

本研究旨在篩選大腸桿菌(Escherichiacoli)中與植物乳桿菌素BM-1直接作用的大腸桿菌細(xì)胞膜上的互作蛋白，并分析其影響大腸桿菌對植物乳桿菌素BM-1的敏感性作用。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

野生型大腸桿菌K12、突變型大腸桿菌JW4073、突變型大腸桿菌JW4074是2016年10月購于大腸桿菌突變體庫KEIO collection，詳情見表1。

表1 菌株特性及來源Tab.1 Strain features and source

植物乳桿菌BM-1產(chǎn)植物乳桿菌素BM-1，由北京農(nóng)學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品有害微生物及農(nóng)殘安全檢測與控制北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室保藏。

MRS肉湯，MRS瓊脂培養(yǎng)基，LB培養(yǎng)基[13]，制備培養(yǎng)基使用的試劑均為國產(chǎn)分析純級；硫酸銨、氯化鈉、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、EDTA、尿素和脫氧膽酸鈉，購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；瓊脂，購于北京奧博星生物技術(shù)有限公司；3500Da透析袋，購于北京瑞達(dá)恒輝科技發(fā)展有限公司；Bacteria RNA Extraction Kit、HiScript II One Step qRT-PCR SYBR Green Kit，購于南京諾唯贊生物科技股份有限公司。

1.2 試驗(yàn)儀器

DL-CJ-1NDII超凈臺，北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司；LHS-100CH恒溫恒濕箱，上海一恒科技有限公司；DYY-6DCP-32B型恒流電泳儀，北京六一儀器廠；GL-21M臺式冷凍離心機(jī)，上海滬湘儀離心機(jī)儀器有限公司。

BT2202S電子天平(Starorius)，StepOnePlus Real-Time PCR System(ABI)，磁力架(蘇州海貍生物科技有限公司)，MiniBeadBeater-16(BioSpec)，翻轉(zhuǎn)架(北京大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)，電導(dǎo)儀(Mettler)，紫外分光光度計(jì)(上海佑科儀器有限公司)。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 植物乳桿菌素BM-1的制備 采用pH介導(dǎo)細(xì)胞吸附-解吸技術(shù)與陽離子交換色譜法純化植物乳桿菌素BM-1[12]。將植物乳桿菌素BM-1培養(yǎng)液加熱后調(diào)節(jié)pH至pH值6.0，于室溫條件下攪拌30 min，使植物乳桿菌素BM-1吸附到細(xì)胞表面；離心收集細(xì)胞，洗滌沉淀后，使用100 mmol/L NaCl重懸，調(diào)節(jié)pH至pH值2.0，4 ℃條件下攪拌12 h，離心后上清4 ℃條件下使用ddH2O透析24 h，冷凍干燥后得到第一步純化后的植物乳桿菌素BM-1。使用檸檬酸鈉緩沖液重懸第一步純化后的植物乳桿菌素BM-1；使用SP-Sepharose快速流動(dòng)陽離子交換色譜柱(長度200 mm，內(nèi)徑10 mm)將重懸后的植物乳桿菌素BM-1上樣，使用pH值3.1的檸檬酸鈉緩沖液進(jìn)行洗脫，直到檢測不到280 nm處吸光值；使用0.1～0.5 mol/L NaCl線性梯度洗脫植物乳桿菌素BM-1，收集活性成分，使用ddH2O透析后得到純化的植物乳桿菌素BM-1，用牛津杯測定此時(shí)細(xì)菌素效價(jià)[12]。

1.3.2 大腸桿菌與植物乳桿菌素BM-1互作蛋白的篩選 以1×102CFU/mL接種量將野生型大腸桿菌K12接種到5 mL LB培養(yǎng)基中，37 ℃培養(yǎng)至菌液OD值為0.5。菌液中加入植物乳桿菌素BM-1至最終效價(jià)為512 AU/mL，37 ℃培養(yǎng)2 h；以不添加植物乳桿菌素BM-1的大腸桿菌為對照。12 000 r/min將培養(yǎng)好的菌液離心10 min，棄上清，用1 mL PBS(pH值7.4)復(fù)溶離心后的菌液沉淀，加入0.3 g玻璃珠(100 mm)，使用Beadbeater破碎菌體2次。靜置破碎后的菌液，小心吸取上清，12 000 r/min離心上清10 min，向沉淀中加入9倍體積包涵體裂解液，室溫下靜置30 min，12 000 r/min離心5 min，使用包涵體溶解液溶解沉淀，得到菌體蛋白。取490 μL菌體蛋白溶液，加入10 μL偶聯(lián)植物乳桿菌素BM-1單克隆抗體的磁珠[15]，4 ℃旋轉(zhuǎn)反應(yīng)過夜。反應(yīng)后磁珠用1×PBS緩沖液和0.1%脫氧膽酸鈉洗滌2次，蛋白電泳檢測洗脫液。

蛋白洗脫液使用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行蛋白鑒定：首先使用Orbitrap Fusion Lumos與Easy-nLC 1000液相色譜系統(tǒng)(Thermo Fisher Scientific)，用0.1%甲酸水溶液溶解標(biāo)記樣品，將溶解后肽段裝載至C18反相柱(預(yù)柱填料粒徑3 μm，孔徑120?，2 cm×100 μm ID；分析柱填料粒徑1.9 μm，孔徑120?，15 cm×150 μm ID)進(jìn)行預(yù)分離，流速600 nL/min，洗脫60 min；使用Lumos3質(zhì)譜儀(Thermo Fisher Scientific)，采用DDA模式(data-dependent acquisition mode)進(jìn)行分析。一級質(zhì)譜使用Orbitrap進(jìn)行全掃描，掃描范圍350～1 550 m/z，掃描分辨率120 000，AGC targets為4e5 ions，Max injection time為50 ms；二級質(zhì)譜采集通過32%的高能碰撞解離(HCD)對母離子進(jìn)行碎裂，碎片離子在Orbitrap中進(jìn)行檢測，F(xiàn)irst Mass為100，分辨率15 000，AGC targets為5e4 ions，Max injection time為22 ms，動(dòng)態(tài)排除30 s；最后采用Proteome Discoverer2.1軟件對質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，得到蛋白定性和定量信息。

1.3.3 BasS/BasR雙組分系統(tǒng)缺失大腸桿菌對植物乳桿菌素BM-1的敏感性分析 取生長至對數(shù)期的野生型大腸桿菌K12、突變型大腸桿菌JW4073和突變型大腸桿菌JW4074，將這3種菌液分別接種至5 mL的LB培養(yǎng)基中，使其終濃度為1×102CFU/mL，加入植物乳桿菌素BM-1，使其效價(jià)為512 AU/mL；以不添加植物乳桿菌素BM-1的野生型大腸桿菌K12、突變型大腸桿菌JW4073和突變型大腸桿菌JW4074為對照。37 ℃培養(yǎng)24 h，每隔2 h進(jìn)行1次菌落計(jì)數(shù)，最終繪制出植物乳桿菌素BM-1作用下3株大腸桿菌的活菌數(shù)曲線[16]。

1.3.4 植物乳桿菌素BM-1對缺失BasS/BasR雙組分系統(tǒng)大腸桿菌電導(dǎo)率的檢測 將接種量是1×102CFU/mL的野生型大腸桿菌K12、突變型大腸桿菌JW4073、突變型大腸桿菌JW4074分別接種到5 mL培養(yǎng)基中，并加入植物乳桿菌素BM-1使其最終效價(jià)為512 AU/mL，37 ℃培養(yǎng)14 h，每隔2 h測1次電導(dǎo)率；以不加植物乳桿菌素BM-1的野生型大腸桿菌K12、突變型大腸桿菌JW4073、突變型大腸桿菌JW4074為對照。

1.3.5 BasS/BasR雙組分系統(tǒng)缺失對大腸桿菌基因表達(dá)的檢測 將接種量是1×102CFU/mL的野生型大腸桿菌K12、突變型大腸桿菌JW4073、突變型大腸桿菌JW4074分別接種到5 mL培養(yǎng)基中，37 ℃培養(yǎng)12 h。提取細(xì)菌總RNA進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)。反應(yīng)條件為50 ℃ 15 min，95 ℃ 30 s，95 ℃ 10 s，60 ℃ 30 s，40次循環(huán)，使用引物如表2所示。將野生型大腸桿菌K12作為內(nèi)參因子，使用2-△△Ct法計(jì)算突變型大腸桿菌JW4073與突變型大腸桿菌JW4074中各個(gè)基因的相對表達(dá)量。

表2 引物序列Tab.2 Sequence of primers

1.3.6 數(shù)據(jù)處理與分析 試驗(yàn)至少重復(fù)3次，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，并對數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析(ANOVA)。使用Origin 2019程序繪制圖表。P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 大腸桿菌與植物乳桿菌素BM-1互作蛋白的篩選

植物乳桿菌素BM-1單克隆抗體進(jìn)行免疫共沉淀后洗脫蛋白電泳如圖1所示。第1泳道內(nèi)經(jīng)植物乳桿菌素BM-1處理后的大腸桿菌在20 kD處出現(xiàn)明顯條帶，第2泳道的大腸桿菌同樣在20 kD處出現(xiàn)較暗的背景蛋白條帶。經(jīng)蛋白質(zhì)譜對比去除大腸桿菌的背景蛋白后，篩選得到一個(gè)豐度指標(biāo)0.233，分子量為25.015 kD，含有222個(gè)氨基酸且可信度高的大腸桿菌菌體蛋白，質(zhì)譜鑒定其為大腸桿菌DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄雙調(diào)節(jié)因子BasR(P30843)。

2.2 BasS/BasR雙組分系統(tǒng)缺失大腸桿菌對植物乳桿菌素BM-1的敏感性影響

使用活菌計(jì)數(shù)法進(jìn)一步分析BasR蛋白所在BasS/BasR雙組分蛋白基因突變對大腸桿菌植物乳桿菌素BM-1敏感性的影響，結(jié)果如圖2所示。野生型大腸桿菌K12、突變型大腸桿菌JW4073與突變型大腸桿菌JW4074這3株大腸桿菌在不添加植物乳桿菌素BM-1單獨(dú)培養(yǎng)時(shí)，均呈現(xiàn)典型的生長規(guī)律。野生型大腸桿菌K12在單獨(dú)培養(yǎng)6 h時(shí)，活菌數(shù)呈現(xiàn)上升趨勢，進(jìn)入指數(shù)增長期，并在12 h達(dá)到穩(wěn)定期，此時(shí)活菌數(shù)為9.38 lgCFU/mL，此后24 h內(nèi)活菌數(shù)呈現(xiàn)穩(wěn)定狀態(tài)。突變型大腸桿菌JW4073與突變型大腸桿菌JW4074在不添加植物乳桿菌素BM-1時(shí)，生長趨勢總體與野生型大腸桿菌K12相似，但進(jìn)入指數(shù)期較野生型大腸桿菌K12更為提前，4 h活菌數(shù)呈現(xiàn)上升趨勢，進(jìn)入指數(shù)增長期，且在指數(shù)增長期增長速度更快。在此之后的8 h和10 h處突變型大腸桿菌JW4073與突變型大腸桿菌JW4074的活菌數(shù)達(dá)到穩(wěn)定期，最終活菌數(shù)分別為7.24 lgCFU/mL和7.27 lgCFU/mL。

添加植物乳桿菌素BM-1培養(yǎng)后，野生型大腸桿菌K12、突變型大腸桿菌JW4073與突變型大腸桿菌JW4074這3株大腸桿菌活菌數(shù)在24 h內(nèi)的變化趨勢與單獨(dú)培養(yǎng)相比產(chǎn)生明顯變化。添加植物乳桿菌素BM-1后，野生型大腸桿菌K12在前14 h培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)活菌數(shù)增加明顯被抑制，未出現(xiàn)變化，第16小時(shí)活菌數(shù)呈現(xiàn)上升趨勢，進(jìn)入指數(shù)期，第24小時(shí)活菌數(shù)達(dá)到6.33 lgCFU/mL。相比之下，添加植物乳桿菌素BM-1培養(yǎng)后，突變型大腸桿菌JW4073與突變型大腸桿菌JW4074的生長在前14 h被抑制，第16小時(shí)活菌數(shù)進(jìn)入指數(shù)增長期，但增長速度較同時(shí)期相同培養(yǎng)條件的野生型大腸桿菌K12更為緩慢，且相對于單獨(dú)培養(yǎng)時(shí)，添加植物乳桿菌素BM-1后突變型大腸桿菌JW4073與突變型大腸桿菌JW4074這2株突變型大腸桿菌的指數(shù)增長期被延后，到達(dá)指數(shù)期的時(shí)間與添加植物乳桿菌BM-1培養(yǎng)的野生型大腸桿菌K12相同。第24小時(shí)突變型大腸桿菌JW4073與突變型大腸桿菌JW4074的活菌數(shù)分別為4.67 lgCFU/mL與4.91 lgCFU/mL，顯著低于野生型大腸桿菌K12第24小時(shí)的活菌數(shù)。說明植物乳桿菌素BM-1對突變型大腸桿菌JW4073與突變型大腸桿菌JW4074的生長造成的影響更大，即相對于野生型大腸桿菌K12，BasS/BasR雙組分系統(tǒng)缺失的突變型大腸桿菌JW4073與突變型大腸桿菌JW4074對植物乳桿菌素BM-1更敏感。

2.3 植物乳桿菌素BM-1對缺失BasS/BasR雙組分系統(tǒng)大腸桿菌電導(dǎo)率的影響

野生型大腸桿菌K12、突變型大腸桿菌JW4073與突變型大腸桿菌JW4074這3株大腸桿菌在添加與不添加植物乳桿菌素BM-1條件下培養(yǎng)的電導(dǎo)率在14 h內(nèi)均呈現(xiàn)緩慢上升趨勢，但添加植物乳桿菌素BM-1培養(yǎng)的大腸桿菌與單獨(dú)培養(yǎng)的大腸桿菌的電導(dǎo)率變化趨勢相似，差異均不顯著，未產(chǎn)生明顯對比(P>0.05)，見圖3。雖然這3株大腸桿菌均對植物乳桿菌素BM-1表現(xiàn)出不同程度的敏感性，但植物乳桿菌素BM-1的添加并未造成大腸桿菌細(xì)胞膜的破裂和內(nèi)容物外泄。

2.4 BasS/BasR雙組分系統(tǒng)缺失對大腸桿菌基因表達(dá)的影響

提取野生型大腸桿菌K12、突變型大腸桿菌JW4073、突變型大腸桿菌JW4074的總RNA(圖4)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測結(jié)果如圖5所示。突變型大腸桿菌JW4073的dgka基因與野生型大腸桿菌K12相比顯著下調(diào)了71%，mlaf基因下調(diào)了37%。突變型大腸桿菌JW4074與野生型大腸桿菌K12相比，dgka基因顯著下調(diào)了93%，mlaf基因顯著下調(diào)了71%，eco基因顯著下調(diào)了95%。在不表達(dá)BasS/BasR雙組分系統(tǒng)后，突變型大腸桿菌中細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)與功能相關(guān)蛋白表達(dá)被降低。

3 討 論

細(xì)菌素來源廣泛，種類繁多，且低毒性與不易產(chǎn)生耐藥性的特點(diǎn)引起人們廣泛關(guān)注，但目前針對IIa類細(xì)菌素對革蘭氏陰性菌的抑菌機(jī)理以及作用靶點(diǎn)研究還不夠深入[17-18]。本試驗(yàn)通過免疫共沉淀篩選得到與IIa類細(xì)菌素植物乳桿菌素BM-1產(chǎn)生作用的大腸桿菌菌體蛋白BasR，其屬于BasS/BasR雙組分系統(tǒng)，該雙組分系統(tǒng)的基因突變導(dǎo)致大腸桿菌對植物乳桿菌素BM-1敏感性加強(qiáng)，證明BasS/BasR雙組分系統(tǒng)能夠調(diào)控大腸桿菌對植物乳桿菌素BM-1的敏感性。

以往的研究表明，對于革蘭氏陰性菌，IIa類細(xì)菌素對其作用方式是通過與菌體細(xì)胞表面產(chǎn)生靜電作用從而使細(xì)菌素吸附在細(xì)胞膜表面，穿過脂多糖，進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)膜，造成孔洞，從而破碎菌體細(xì)胞，使內(nèi)容物外泄，達(dá)到殺菌作用[19-20]。本研究中電導(dǎo)率結(jié)果顯示大腸桿菌細(xì)胞膜并未破裂，說明植物乳桿菌素BM-1對大腸桿菌的作用方式與已有的IIa類細(xì)菌素對革蘭氏陰性菌的作用方式不同，即添加植物乳桿菌素BM-1后，大腸桿菌細(xì)胞膜并未破裂。結(jié)合大腸桿菌生長曲線結(jié)果，推斷植物乳桿菌素BM-1對大腸桿菌的作用方式為抑制細(xì)菌生長而不是通過破碎細(xì)胞導(dǎo)致菌體死亡。

本研究中發(fā)現(xiàn)BasS/BasR雙組分系統(tǒng)參與大腸桿菌對植物乳桿菌素BM-1敏感性調(diào)控。BasS/BasR雙組分系統(tǒng)感應(yīng)到外界環(huán)境變化被激活后，參與細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)、膜轉(zhuǎn)運(yùn)與結(jié)合的基因會被該雙組分系統(tǒng)明顯上調(diào)，使菌體在不利環(huán)境下依然保持穩(wěn)定[21]。大腸桿菌BasS/BasR雙組分系統(tǒng)的調(diào)控機(jī)制與沙門氏菌中PmrA/PmrB雙組分系統(tǒng)相類似[22]，組氨酸蛋白激酶BasS感知到細(xì)菌外界環(huán)境變化后，由HATPase結(jié)構(gòu)域供能，BasS蛋白hisKA結(jié)構(gòu)域的組氨酸被磷酸化，將信號傳遞給反應(yīng)調(diào)節(jié)因子BasR蛋白，從而激活下游靶基因轉(zhuǎn)錄[23-24]。相關(guān)研究表明，腸桿菌科細(xì)菌BasS/BasR雙組分系統(tǒng)可通過誘導(dǎo)下游靶基因轉(zhuǎn)錄的方式，修飾脂質(zhì)A，參與細(xì)胞膜磷脂雙分子層的修飾，來達(dá)到抵抗多粘菌素B的作用[25]。BasS/BasR雙組分系統(tǒng)調(diào)控下游靶基因，包括參與膜結(jié)構(gòu)形成與修飾的dgka、調(diào)節(jié)膜功能的mlaf、參與細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)功能的eco等，這些基因的表達(dá)均可以穩(wěn)定細(xì)胞膜形態(tài)[24]。相關(guān)試驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)在添加植物乳桿菌素BM-1的條件下，野生型大腸桿菌K12可通過加速肽聚糖合成，調(diào)節(jié)細(xì)胞膜表達(dá)，維持細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的方式來抵御來自細(xì)菌素的傷害[26]。本試驗(yàn)結(jié)合已有研究結(jié)果，將大腸桿菌BasS/BasR雙組分系統(tǒng)與大腸桿菌對植物乳桿菌素BM-1抗性相關(guān)聯(lián)，通過RT-qPCR驗(yàn)證大腸桿菌中BasS/BasR雙組分系統(tǒng)蛋白基因突變，Dgka、MlaF、Eco這3個(gè)蛋白編碼基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平顯著變化，證明該雙組分系統(tǒng)的缺失確實(shí)降低大腸桿菌中dgka，mlaf和eco等基因轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)，從而弱化大腸桿菌細(xì)胞膜強(qiáng)度，降低大腸桿菌細(xì)胞膜剛性，提高大腸桿菌對植物乳桿菌素BM-1的敏感性。

植物乳桿菌素BM-1針對野生型大腸桿菌K12的作用體現(xiàn)在抑制細(xì)菌生長，并非導(dǎo)致菌體破裂死亡，而大腸桿菌BasS/BasR雙組分系統(tǒng)的缺失會導(dǎo)致大腸桿菌對植物乳桿菌素BM-1敏感性提高，從而有效增強(qiáng)植物乳桿菌素BM-1對大腸桿菌的抑制效果。