耿娟娟

[摘要] 目的 探討腎臟腫瘤臨床特征與突變型p53以及CD44v6基因表達(dá)產(chǎn)物的關(guān)系。 方法 選擇79例腎臟腫瘤患者的臨床資料進(jìn)行回顧性分析，所有患者均手術(shù)治療，測(cè)定腫瘤組織突變型p53及CD44v6基因表達(dá)產(chǎn)物，并隨訪患者5年的生存率，分析突變型p53及CD44v6基因表達(dá)產(chǎn)物與患者臨床特征、生存率的關(guān)系。 結(jié)果 良性腫瘤與惡性腫瘤P53蛋白、CD44v6蛋白的陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），陰性及陽(yáng)性表達(dá)患者5年生存率比較存在顯著差異（P<0.05）。CD44v6蛋白在Ⅲ～Ⅳ期以及G3級(jí)的陽(yáng)性表達(dá)率顯著升高（P<0.01）。 結(jié)論 腎臟腫瘤中突變型p53和CD44v6基因產(chǎn)物的表達(dá)與患者的5年生存率具有相關(guān)性，而CD44v6蛋白與病理分期以及病理分級(jí)具有相關(guān)性。

[關(guān)鍵詞] 腎臟腫瘤；突變型；p53；CD44v6；基因產(chǎn)物

Analysis of mutant p53 and CD44v6 gene products expression in kidney cancer

GENG Juanjuan

Special Wards， Southern Medical University Affiliated People's Hospital of Zhengzhou， Zhengzhou 450000， China

[Abstract] Objective To discuss mutant p53 and CD44v6 gene products expression in kidney cancer. Methods Clinical data of 79 cases of kidney cancer patients were selected for retrospectively analysis. All cases were treated by operation. Mutant p53 and CD44v6 gene product expression were detected and 5-year survival rates of patients were followed up. Results The positive rates of P53 protein and CD44v6 protein in benign and malignant tumors showed significant difference （P<0.05）， and 5-year survival rates of negative and positive expression groups showed significant difference （P<0.05）. The positive rate of CD44v6 protein in Ⅲ to Ⅳ and G3 were significantly higher （P<0.01）. Conclusion Mutant p53 and CD44v6 gene products expressions in kidney tumors are relevant with the 5-year survival rates. The CD44v6 protein expressions is correlated with pathological stage and histological grade.

[Key words] Kidney cancer； Mutant； p53； CD44v6； Gene product

腎細(xì)胞癌在泌尿生殖系惡性腫瘤中居第二位，僅次于膀胱癌，屬于實(shí)性惡性腫瘤。是否發(fā)生轉(zhuǎn)移以及腫瘤細(xì)胞的分化程度與患者的預(yù)后具有密切的關(guān)系，而腫瘤細(xì)胞某些基因的突變與腫瘤細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)展、侵襲以及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[1]。p53基因?qū)儆谝职┗?，而CD44v6在多種癌癥細(xì)胞中呈高表達(dá)[2，3]。本研究通過(guò)對(duì)79例腎細(xì)胞癌患者癌細(xì)胞中突變型p53基因及CD44v6表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè)，分析其與腎細(xì)胞癌臨床特征及患者生存率的關(guān)系?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2000年1月～2005年12月在我院手術(shù)治療腎臟腫瘤患者79例的臨床資料，所有患者病理診斷支持腎臟腫瘤診斷，均經(jīng)手術(shù)治療，留有石蠟包埋的癌組織標(biāo)本，且隨訪5年以上，有完整的隨訪資料。其中男61例，女18例，年齡30～67歲，平均（52.1±10.5）歲。其中腎細(xì)胞癌72例，錯(cuò)構(gòu)瘤7例。其中72例腎細(xì)胞癌患者的病理分型：45例為透明細(xì)胞癌，15例為乳頭狀細(xì)胞癌，7例為嫌色細(xì)胞癌，5例集合管癌；Robson分期：7例為Ⅰ期，45例為Ⅱ期，20例為Ⅲ～Ⅳ期；WHO病理分級(jí)：G1級(jí)11例，G2級(jí)26例，G3級(jí)35例。

1.2檢測(cè)指標(biāo)

檢測(cè)癌細(xì)胞中突變型p53以及CD44v6基因產(chǎn)物的表達(dá)，采用免疫組化SP法進(jìn)行檢測(cè)。一抗鼠抗人P53單克隆抗體、鼠抗人CD44v6單克隆抗體。癌旁正常組織為陰性對(duì)照，PBS代替一抗為空白對(duì)照。突變型P53蛋白陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞：細(xì)胞核呈棕黃色，或者核內(nèi)有棕黃色顆粒；CD44v6蛋白陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞：細(xì)胞膜呈棕黃色。

1.3研究方法

回顧性分析患者的臨床資料，統(tǒng)計(jì)患者分級(jí)、分期、5年生存率等情況。分析p53以及CD44v6基因產(chǎn)物的表達(dá)與患者分級(jí)、分期以及5年生存率的關(guān)系。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1突變型p53基因表達(dá)產(chǎn)物P53蛋白與患者腫瘤分期、分級(jí)以及5年生存率的關(guān)系

P53蛋白陽(yáng)性表達(dá)：腎錯(cuò)構(gòu)瘤無(wú)陽(yáng)性表達(dá)，腎細(xì)胞癌患者72例中29例為陽(yáng)性，占40.3%，腎良性腫瘤與惡性腫瘤P53蛋白的陽(yáng)性率比較，差異顯著（P<0.05）。不同分期的陽(yáng)性表達(dá)：Ⅰ期2例（28.6%，2/7），Ⅱ期17例（37.8%，17/45），Ⅲ～Ⅳ期10例（50.0%，10/20）。不同病理分級(jí)陽(yáng)性表達(dá)：G1級(jí) 4例（36.4%，4/11），G2 級(jí)8例（30.8%，8/26），G3級(jí)17例（48.6%，17/35）。72例腎癌患者中，P53蛋白陽(yáng)性表達(dá)患者29例，5年生存率為31.03%（9/29），陰性表達(dá)患者43例，5年生存率為67.44%（29/43）。陰性及陽(yáng)性表達(dá)患者5年生存率比較存在顯著差異（P<0.05）。見(jiàn)表1、圖1。

表1 P53蛋白陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤分期、分級(jí)以及5年生存率的關(guān)系

圖1 突變型P53蛋白陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞，細(xì)胞核呈棕黃色，或者核內(nèi)有棕黃色顆粒（×400）

2.2 CD44v6蛋白表達(dá)與分期、分級(jí)及5年生存率的關(guān)系

CD44v6蛋白陽(yáng)性表達(dá)：腎錯(cuò)構(gòu)瘤無(wú)陽(yáng)性表達(dá)，腎惡性腫瘤患者72例中28例為陽(yáng)性，占38.9%，腎良性腫瘤與惡性腫瘤CD44v6蛋白的陽(yáng)性率比較，差異顯著（P<0.05）。不同分期的陽(yáng)性表達(dá)：Ⅰ期1例（14.3%，1/7），Ⅱ期12例（26.7%，12/45），Ⅲ～Ⅳ期15例（75.0%，15/20）。不同病理分級(jí)陽(yáng)性表達(dá)：G1級(jí) 1例（9.1%，1/11），G2 級(jí)7例（26.9%，7/26），G3級(jí)20例（48.6%，17/35）。72例腎癌患者中，CD44v6蛋白陽(yáng)性表達(dá)患者28例，5年生存率為25.00%（7/28），陰性表達(dá)患者44例，5年生存率為70.45%（31/44）。陰性及陽(yáng)性表達(dá)患者5年生存率比較存在顯著差異（P<0.05）。見(jiàn)表2、圖2。

表2 CD44v6蛋白表達(dá)與分期、分級(jí)以及5年生存率的關(guān)系

圖2 CD44v6蛋白陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞，細(xì)胞膜呈棕黃色（×400）

3討論

惡性腫瘤的發(fā)生與基因突變具有密切的關(guān)系，主要是抑癌基因發(fā)生失活或癌基因被激活。抑癌基因?qū)?xì)胞增殖、分化具有重要的調(diào)控作用。p53基因是人體的抑癌基因，其編碼分子量為53kDa的蛋白質(zhì)，因此被命名為p53基因。p53失活對(duì)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展具有重要的作用。p53作為抗癌基因，其導(dǎo)致癌細(xì)胞自殺，從而防止癌變的發(fā)生，同時(shí)還幫助細(xì)胞基因修復(fù)缺陷[4]。但是這種功能也會(huì)幫助受到化療藥物損傷的癌細(xì)胞發(fā)揮修復(fù)作用，使被修復(fù)的癌細(xì)胞形成新腫瘤。50%的惡性腫瘤存在p53基因突變。p53基因編碼的蛋白質(zhì)是轉(zhuǎn)錄因子，控制細(xì)胞周期啟動(dòng)，發(fā)送許多關(guān)于細(xì)胞健康的信號(hào)，決定是否開(kāi)始細(xì)胞分裂。當(dāng)細(xì)胞受損后，又不能得以修復(fù)，則P53蛋白參與啟動(dòng)，促使細(xì)胞凋亡。p53基因突變的細(xì)胞失去這種控制，甚至?xí)诓焕臈l件下發(fā)生繼續(xù)分裂。在正常情況下p53基因可延緩或監(jiān)視細(xì)胞分裂，可判斷DNA變異的程度，對(duì)變異較小者可促使細(xì)胞自我修復(fù)，對(duì)變異較大者，可誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡。p53基因發(fā)生突變后，其空間構(gòu)象改變，失去調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡以及修復(fù)DNA的作用，突變后的p53基因轉(zhuǎn)變?yōu)榱税┗騕5，6]。在本次研究中，通過(guò)對(duì)突變后p53基因表達(dá)的P53蛋白進(jìn)行檢測(cè)，判斷腎臟腫瘤組織中p53基因的突變情況，結(jié)果顯示，惡性腫瘤P53陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于良性腫瘤，這提示p53基因的突變參與了腎臟惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程。在對(duì)5年生存率的隨訪中，P53蛋白陽(yáng)性表達(dá)的患者其5年生存率顯著低于陰性表達(dá)的患者，提示p53基因突變與患者5年生存率具有相關(guān)性。

CD44是廣泛分布在細(xì)胞表面的一種跨膜糖蛋白，屬于細(xì)胞黏附分子，基因在11號(hào)染色體的短臂上，根據(jù)外顯子選擇性剪接結(jié)果分為標(biāo)準(zhǔn)型CD44（CD44S）和變異型（CD44v）。1991年在大鼠轉(zhuǎn)移性胰腺癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了一種CD44的變異體，其在大鼠CD44S蛋白第223～247位氨基酸殘基間插入了含162個(gè)氨基酸的片段，該片段中含有4個(gè)O-糖基化位點(diǎn)以及3個(gè)N-糖基化位點(diǎn)，后來(lái)證實(shí)該片段含v6外顯子編碼。CD44具有介導(dǎo)細(xì)胞間的黏附作用，其作為淋巴細(xì)胞的“歸巢”受體參與了淋巴細(xì)胞歸位到淋巴組織的過(guò)程，其還具有活化T細(xì)胞的作用，并參與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳遞過(guò)程，調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞的再循環(huán)，介導(dǎo)淋巴細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞黏附，參與免疫調(diào)節(jié)及腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、轉(zhuǎn)移[7]。在惡性腫瘤中，CD44v6的表達(dá)情況并不一致，對(duì)于陽(yáng)性表達(dá)的腫瘤組織，更容易發(fā)生浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，并且陽(yáng)性表達(dá)的患者5年生存率較低，預(yù)后較差。在正常組織中，CD44v6不表達(dá)或呈低表達(dá)，該基因處于失活或者休眠的狀態(tài)，但是在惡性腫瘤中，其由標(biāo)準(zhǔn)型經(jīng)過(guò)一系列的修飾，從而發(fā)揮改變腫瘤細(xì)胞粘附的作用，增加其黏附能力而促使腫瘤細(xì)胞局部侵襲浸潤(rùn)[8]。CD44v6蛋白是透明質(zhì)酸酶的跨膜糖蛋白受體，可以連接基質(zhì)中的多種相關(guān)蛋白，使其結(jié)合透明質(zhì)酸，形成癌細(xì)胞的偽足，使腫瘤細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，為癌細(xì)胞的游走、遷徙提供條件，促使腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)以及轉(zhuǎn)移。CD44v6是淋巴細(xì)胞的歸巢受體，能夠激活淋巴細(xì)胞，促使淋巴細(xì)胞發(fā)育，導(dǎo)致細(xì)胞極性發(fā)生改變，加強(qiáng)惡性腫瘤的生物活性，具有淋巴細(xì)胞相似的活動(dòng)性，使其更容易進(jìn)入淋巴系統(tǒng)而發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。另外，血管中的配體也可結(jié)合發(fā)生了改變的癌細(xì)胞，促使轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞在此處寄宿生長(zhǎng)。在本次研究中，CD44v6蛋白在腎臟惡性腫瘤中的陽(yáng)性表達(dá)率顯高于良性腫瘤組織，進(jìn)一步分析顯示，腫瘤病例分期及分級(jí)越高，CD44v6蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率也越高，這也證實(shí)了以上結(jié)論，CD44v6蛋白參與了腫瘤細(xì)胞的局部浸潤(rùn)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。對(duì)患者5年生存率進(jìn)行隨訪，結(jié)果顯示CD44v6蛋白陽(yáng)性表達(dá)的患者其5年生存率顯著較低。這可能是因?yàn)镃D44v6蛋白促使了腫瘤細(xì)胞的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，患者病例分級(jí)和分期均較高，預(yù)后也往往較差。

綜上所述，突變型p53和CD44v6基因產(chǎn)物在惡性腎臟腫瘤組織中呈高表達(dá)，并且與患者5年生存率具有相關(guān)性，而CD44v6基因蛋白與惡性腫瘤的病理分級(jí)和病理分期均具有相關(guān)性，分期和分級(jí)越高，其陽(yáng)性表達(dá)率也越高。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 張寧，龔侃，果宏峰，等. von Hipple-Lindau基因突變與散發(fā)性腎透明細(xì)胞癌患者預(yù)后的關(guān)系[J]. 中華泌尿外科雜志，2008，29（11）： 740-743.

[2] 王冰濤，尚宏清，李偉，等. ER，PR，Ki67，p53表達(dá)與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)性研究和臨床意義[J]. 中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)刊，2014，25（2）：231-232，234.

[3] 祁秀敏，張熔熔，呂慧. 大腸癌組織CD44V6與多藥耐藥相關(guān)基因表達(dá)的相關(guān)性及其預(yù)后意義[J]. 廣東醫(yī)學(xué)，2014，35（6）：867-870.

[4] Levine A J，Oren M. The first 30 years of p53： Growing ever more complex[J]. Nat Rev Cancer，2009，9（10）：749-758.

[5] 孫連桃，勾宏娜，馬淑一. p53異構(gòu)體在腎癌中表達(dá)的研究[J]. 現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2013，40（17）：3325-3326，3331.

[6] Ebrahimi M，Boldrup L，Coates P，et al. Expression of novel p53 isoforms in oral lichen planus[J]. Oral Oncol，2008，44（2）：156-161.

[7] 蔣悅. E-Cadherin、CD44v6在腎臟惡性腫瘤中的表達(dá)及意義[J]. 中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生，2013，51（8）：14-16.

[8] 張儉. 腎癌組織中E-鈣黏素和CD44v6的表達(dá)及意義[J].山東醫(yī)藥，2011，51（10）：81-82.