彭 凡， 易善萍， 趙 鋮， 于文雅， 尹婉瑩， 謝慧颕

(安徽農業(yè)大學林學與園林學院， 安徽 合肥 230036)

‘海螺’望春花(Yulaniadenudata‘Hailuo’)為安徽省懷寧縣石鏡鄉(xiāng)海螺山特有的藥用植物品種。雖然海螺山的‘海螺’望春花古樹樹齡已經超過百年，但是依然能生產大量花蕾，且香氣濃郁。近幾年，由‘海螺’望春花古樹種子播種獲得的幼樹已大量開花。已有研究表明：不同栽培模式下‘海螺’望春花的花蕾產量存在差異[1]，其不同家系間花蕾的揮發(fā)油含量及化合物組成也存在差異[2]，但關于其實生苗培育的幼樹和古樹花苞揮發(fā)性成分的含量和組成差異尚不清楚，不利于對‘海螺’望春花資源進行有效開發(fā)和利用。

鑒于此，筆者采用同時蒸餾萃取和GC-MS聯(lián)用法(SDE-GC-MS)對‘海螺’望春花幼樹和古樹花苞揮發(fā)性成分的組成和含量差異進行比較，以期為合理保護和多元化開發(fā)利用‘海螺’望春花優(yōu)良種質資源提供參考。

1 材料和方法

1.1 材料

供試‘海螺’望春花幼樹(由古樹種子播種獲得，株齡7～8 a)和古樹(株齡約100 a)均生長在安徽省懷寧縣石鏡鄉(xiāng)海螺山(東經116°51′12″、北緯30°35′48″)。隨機選擇4株無病蟲害的古樹及20株無病蟲害的幼樹，于2019年3月15日沿著樣株樹冠周邊采集花苞，幼樹和古樹花苞的總質量各約2 kg。將采集的幼樹和古樹花苞按照未綻放花苞(花苞口閉合)和初綻放花苞(花苞口張開)分開并混勻。先將花苞于35 ℃干燥3 h；再升溫至45 ℃，干燥5 h；然后升溫至50 ℃，干燥10 h；最后，將干燥花苞粉碎，裝入密閉容器，置于-20 ℃冰箱中保存、備用。

1.2 方法

1.2.1 揮發(fā)性成分提取 取花苞粉末3 g，參考相關文獻[3]、采用同時蒸餾萃取法提取揮發(fā)性成分，經無水硫酸鈉脫水處理，氮吹濃縮至5 mL，得到提取液，置于4 ℃保存、備用。

1.2.2 GC-MS分析 使用7890B/5975C氣相色譜-質譜聯(lián)用儀(美國Agilent公司)對提取液進行GC-MS分析，重復進樣3次。色譜條件：DB-5ms毛細管柱(30 m×25 mm×0.25 μm)；載氣為高純氦氣，流速1.0 mL·min-1；升溫程序為起始溫度60 ℃，保持2 min后，以10 ℃·min-1速率升至250 ℃，保持10 min；進樣口溫度250 ℃，分流比10∶1，進樣量5 μL。質譜條件：EI源；電子能量70 eV；離子源溫度225 ℃；全掃描模式，掃描范圍35～550 amu；掃描周期0.6 s，溶劑延遲3 min。

1.3 數據分析

將GC-MS分析得到的質譜圖在NIST05標準質譜數據庫中檢索，并與相關文獻[4-6]進行比對，確定各揮發(fā)性成分；采用峰面積歸一化法計算各揮發(fā)性成分的相對含量。

2 結果和分析

分析結果(表1)表明：‘海螺’望春花幼樹和古樹的未綻放和初綻放花苞的揮發(fā)性成分共53個，主要為單萜類、倍半萜類及其氧化物和烷烴類成分。其中，幼樹和古樹未綻放花苞的揮發(fā)性成分(分別為31和36個)明顯多于初綻放花苞(分別為23和22個)。檜烯、β-蒎烯、桉樹腦、γ-松油烯、4-萜烯醇、α-松油醇、β-石竹烯、大根香葉烯D、α-葎草烯、2，4-二叔丁基酚、δ-杜松烯、(1r，3s，4s)-4-乙烯基-α，α，4-三甲基-3-(1-甲基乙烯基) 環(huán)己甲醇、β-桉葉醇和鄰苯二甲酸二丁酯為共有成分，并且，這些共有成分在幼樹未綻放和初綻放花苞中的總相對含量分別為81.95%和75.51%，在古樹未綻放花苞和初綻放花苞中的總相對含量分別為87.20%和83.72%，表明‘海螺’望春花幼樹花苞的主要揮發(fā)性成分組成與古樹相似，但總相對含量明顯低于古樹。不同揮發(fā)性成分的相對含量在幼樹和古樹間存在差異，其中，古樹未綻放和初綻放花苞中檜烯、β-蒎烯和桉樹腦的相對含量均高于幼樹；幼樹未綻放和初綻放花苞中α-松油醇、β-石竹烯、大根香葉烯D、α-律草烯、2，4-二叔丁基酚、δ-杜松烯、(1r，3s，4s)-4-乙烯基-α，α，4-三甲基-3-(1-甲基乙烯基) 環(huán)己甲醇、β-桉葉醇和鄰苯二甲酸二丁酯的相對含量卻高于古樹；而γ-松油烯和4-萜烯醇的相對含量則表現(xiàn)為在古樹未綻放花苞中高于幼樹，但在古樹初綻放花苞中卻低于幼樹。

統(tǒng)計結果(表1)顯示：幼樹未綻放花苞中特有成分有α-水芹烯、反式水合檜烯、異佛爾酮、5-乙基-2-甲基辛烷、α-蓽澄茄油烯、畢澄茄烯、1，2，3，5，6，7，8，8a-八氫-1-甲基-6-亞甲基-4-(1-甲基乙基)-萘、(-)-異長葉烯、γ-芹子烯和α-桉葉醇，古樹未綻放花苞中特有成分有(+)-4-蒈烯、松油烯、葑烯、芳樟醇、1-碘-十二烷、左旋乙酸冰片酯、2-甲基萘、反式β-金合歡烯、白菖烯、(-)-α-摩勒烯、橙花叔醇和二十七烷，而幼樹和古樹初綻放花苞中的特有成分均較少，分別只有2和4種。

表1 ‘海螺’望春花幼樹和古樹花苞揮發(fā)性成分組成及相對含量

3 討論和結論

本研究結果表明：‘海螺’望春花幼樹和古樹花苞的揮發(fā)性成分有53個，包含14個共有成分，總相對含量在75%以上。幼樹和古樹未綻放花苞的特有成分較多，而初綻放花苞的特有成分卻較少，且這些特有成分可能伴隨花苞綻放而逐漸揮發(fā)，因此，若想利用這些特有成分，應采摘幼樹和古樹的未綻放花苞。不同揮發(fā)性成分的相對含量在‘海螺’望春花的幼樹和古樹間存在差異。研究表明：除遺傳因子外，植物的揮發(fā)性成分還受到氣候條件、地理位置、栽培條件等環(huán)境因子[7-8]以及樹齡[9-10]的影響。本研究中‘海螺’望春花幼樹和古樹生長在同一區(qū)域，故可排除環(huán)境因子的影響，據此推測‘海螺’望春花幼樹和古樹花苞揮發(fā)性成分相對含量差異可能與樹齡有關。綜上所述，‘海螺’望春花幼樹花苞的主要揮發(fā)性成分與古樹相似，可替代古樹花苞。

致謝：安徽農業(yè)大學張龍娃教授和懷寧望春花綠化工程有限公司董玉銀總經理對本研究給予了幫助，在此表示感謝！