毛坤明

(福建省福清市畜牧獸醫(yī)中心 ， 福建 福清 350300)

羊傳染性鼻腫瘤(Enzootic nasal tumor,ENT)是由羊傳染性鼻腫瘤病毒(Enzootic nasal tumor virus, ENTV)引起的一種慢性、進(jìn)行性、接觸性傳染病。羊傳染性鼻腫瘤潛伏期長(zhǎng)，一年四季均可發(fā)生，無(wú)有效阻斷措施和治療措施，病死率一般為 30%～50%，有的高達(dá) 80%～100%[1-2]。該病主要以半歲以上的青年羊及成年羊發(fā)病為主，通過(guò)其分泌物感染其他羊。因尚無(wú)有效方法進(jìn)行病毒分離體外培養(yǎng)，因此國(guó)際上對(duì)該病的研究較少，我國(guó)在20世紀(jì)90年代到21世紀(jì)初略有報(bào)道，本省幾乎沒(méi)有這方面的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。近年來(lái)，該病在本省各養(yǎng)羊相對(duì)較密集地區(qū)均有不同程度發(fā)生，且呈現(xiàn)感染上升、危害加大趨勢(shì)，初步了解，重點(diǎn)地區(qū)場(chǎng)群流行率可達(dá)20%～30%，病死率高，導(dǎo)致較多養(yǎng)羊場(chǎng)倒閉，危害嚴(yán)重?；诖?，在福清市規(guī)模化羊場(chǎng)開(kāi)展了該病流行率測(cè)量的橫斷面研究，為科學(xué)防控該病提供第一手?jǐn)?shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 目標(biāo)群 福清市內(nèi)存欄量50頭以上的規(guī)模羊場(chǎng)。

1.2 抽樣策略 按照兩階段抽樣策略，第1階段按估計(jì)流行率計(jì)算場(chǎng)群抽樣數(shù)：預(yù)期流行率為50%，可接受誤差8%，置信水平95%；第2階段按估計(jì)流行率計(jì)算場(chǎng)內(nèi)個(gè)體抽樣數(shù)：設(shè)定預(yù)期個(gè)體流行率為5%，可接受誤差4%，置信水平95%。對(duì)抽取的個(gè)體，采集鼻腔分泌物(棉簽拭子)，于保存液(Hank’s緩沖液，含丙三醇100～150 mL/L)中保存。

1.3 病例定義 羊傳染性鼻腫瘤陽(yáng)性個(gè)體：經(jīng)實(shí)驗(yàn)室PCR檢測(cè)為病原學(xué)陽(yáng)性的羊只；羊傳染性鼻腫瘤陽(yáng)性場(chǎng)群：檢測(cè)出1只及1只以上個(gè)體陽(yáng)性羊只的羊場(chǎng)。

1.4 檢測(cè)方法 使用RT-PCR方法進(jìn)行檢測(cè)[3]，雖無(wú)權(quán)威數(shù)據(jù)以評(píng)價(jià)該方法的敏感性和特異性，但參照RT-PCR的技術(shù)特點(diǎn)，經(jīng)咨詢(xún)專(zhuān)家，該方法的敏感性(Se)和特異性(Sp)應(yīng)不低于90%。為減少工作量，實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中5合1檢測(cè)。將5個(gè)樣品作為1個(gè)群體考慮，經(jīng)計(jì)算，合樣檢測(cè)會(huì)顯著降低個(gè)體診斷敏感性和特異性。

1.5 問(wèn)卷調(diào)查 設(shè)計(jì)針對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)/戶(hù)的結(jié)構(gòu)性問(wèn)卷，內(nèi)容包括羊場(chǎng)的生產(chǎn)管理、地理信息、歷史疫情、傳播相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)因素等。田間調(diào)查和問(wèn)卷填寫(xiě)由經(jīng)培訓(xùn)的獸醫(yī)人員統(tǒng)一進(jìn)行。

1.6 數(shù)據(jù)處理和分析方法 應(yīng)用Excel進(jìn)行數(shù)據(jù)匯總，應(yīng)用Epi Info(Version 7.2.2.6)和SPSS(Version 22)進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。其中表觀流行率(Apparent prevalence，AP)為檢測(cè)的陽(yáng)性數(shù)占所有檢測(cè)數(shù)的比值，真實(shí)流行率(True prevalence，TP)根據(jù)公式TP=(AP+Sp-1)/(Se+Sp-1)計(jì)算，真實(shí)流行率的95%置信區(qū)間(Confidence interval，CI)根據(jù)公式CI=P±Z×[p×(1-p)/n]-1計(jì)算，其中P是真實(shí)流行率，Z為標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布概率p=0.05所對(duì)應(yīng)的值，n為抽樣數(shù)量。

2 結(jié)果

2.1 樣本量 排查福清市存欄量50頭以上的規(guī)模羊場(chǎng)，并于抽樣前2周電話確定抽樣框共129家，其中最小存欄50頭，最大存欄500頭左右。最終隨機(jī)抽樣70個(gè)場(chǎng)群，涉及20個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)，包含山區(qū)、平原、沿海等不同地形地貌，共采集3 526份樣品(其中部分羊場(chǎng)因行情不好，且受羊鼻腫瘤病影響，于采樣前縮減了存欄，見(jiàn)表1)。

表1 采樣情況及檢測(cè)結(jié)果匯總Table 1 Summary of sampling and test results

2.2 個(gè)體流行率 該病病程初期表現(xiàn)為鼻腔流出少量稀薄的漿液性鼻液，隨后出現(xiàn)呼吸困難和持續(xù)性的鼻漏，進(jìn)一步發(fā)展為腫瘤，侵及眼窩、擠壓眼球、視力減退和喪失，食欲減退、消瘦，易繼發(fā)細(xì)菌感染而死亡。5合1檢測(cè)樣本706份，陽(yáng)性樣本108份(圖1)，個(gè)體表觀流行率15.3%。根據(jù)個(gè)體診斷試驗(yàn)的敏感性和特異性，計(jì)算個(gè)體真實(shí)流行率為6.6%(95%CI:4.8%～8.5%)。

圖1 羊傳染性鼻腫瘤部分病例PCR擴(kuò)增Fig.1 Amplification of partial cases of ENT by PCR從左到右：DNA marker 2 000； 空白對(duì)照; 陽(yáng)性擴(kuò)增產(chǎn)物From left to right: DNA marker 2 000； Blank control; Positive amplification products

2.3 群體流行率 70個(gè)場(chǎng)群中檢出符合病例定義的陽(yáng)性場(chǎng)群25個(gè)，場(chǎng)群表觀流行率35.7%，場(chǎng)群真實(shí)流行率為35.7%(95%CI：24.4%～47.0%，群體敏感性和特異性均按100%計(jì)算)。

2.4 空間分布 因隨機(jī)抽樣且抽樣場(chǎng)點(diǎn)數(shù)不足，全市24個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)中，4個(gè)未涉及，抽樣的20個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)中，14個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)發(fā)現(xiàn)該病陽(yáng)性場(chǎng)點(diǎn)，另6個(gè)未發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性場(chǎng)點(diǎn)的鄉(xiāng)鎮(zhèn)也不能排除無(wú)陽(yáng)性場(chǎng)點(diǎn)存在(表2)。從空間分布看，相對(duì)陰性場(chǎng)點(diǎn)，25個(gè)陽(yáng)性場(chǎng)點(diǎn)的分布并無(wú)非常明顯的特征，半數(shù)以上離交通主干道較近。

表2 抽樣場(chǎng)群和陽(yáng)性場(chǎng)群的空間分布Table 2 Spatial distribution of sampling herds and positive herds

2.5 風(fēng)險(xiǎn)因素分析 抽樣檢測(cè)時(shí)設(shè)計(jì)調(diào)查問(wèn)卷，除了解養(yǎng)殖基本信息外，從動(dòng)物防疫角度加入了一些可能的風(fēng)險(xiǎn)因素。經(jīng)Epi Info分析，近3年是否引種(OR=10.3，95%CI:3.3～32，P<0.05)、是否交叉放牧(OR=6.9，95%CI:2.3～20.5，P<0.05)和3 km內(nèi)是否有別的羊場(chǎng)(OR=5.4，95%CI:1.13～26，P<0.05)為可能的風(fēng)險(xiǎn)因素(表3)。因福建省特有的飲食習(xí)慣，以山羊消費(fèi)為主，與北方活羊和羊肉差價(jià)懸殊，造成引種頻繁，引種成為該病傳播的最大風(fēng)險(xiǎn)因素。

表3 風(fēng)險(xiǎn)因素2×2分析Table 3 2× 2 analysis of risk factors

2.6 風(fēng)險(xiǎn)因素回歸分析 應(yīng)用SPSS對(duì)3個(gè)可能的風(fēng)險(xiǎn)因素進(jìn)行分析，見(jiàn)表4。在相關(guān)性分析中，“3 km內(nèi)有羊場(chǎng)”“交叉放牧”“引種”的相關(guān)系數(shù)分別為0.281(P=0.02)、0.457(P<0.05)和0.527(P<0.05)，均具有顯著相關(guān)性。單因素回歸分析中，“周?chē)? km有羊場(chǎng)”“交叉放牧”“引種”分別為P=0.01、P<0.05和P<0.05。將這3個(gè)參數(shù)納入邏輯回歸模型，公式為：

p為養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)生羊鼻腫瘤的概率，X1為“引種”，X2為“交叉放牧”，X3為“周?chē)? km有羊場(chǎng)”。Hosmer-Lemeshow 擬合優(yōu)度檢驗(yàn)卡方值χ2=15.680(df=4，P=0.003)。針對(duì)建立的Logistic回歸模型繪制了ROC曲線，曲線下方面積為0.841(95%CI：0.718～0.963)(圖2)。模型擬合不理想(P<0.05)，預(yù)示找到的3個(gè)風(fēng)險(xiǎn)因素雖然對(duì)羊鼻腫瘤病的發(fā)生具有較強(qiáng)相關(guān)性，但建立的二元邏輯回歸模型還不足以高效預(yù)測(cè)羊鼻腫瘤病的感染。

表4 風(fēng)險(xiǎn)因素Logistical回歸分析Table 4 Logistical regression analysis of risk factors

圖2 風(fēng)險(xiǎn)因素Logistical回歸方程ROC曲線Fig.2 ROC curve for logistical regression analysis of risk factors

3 討論

近年來(lái)，該病在福建省內(nèi)呈現(xiàn)逐漸增多的趨勢(shì)，場(chǎng)群表觀流行率35.7%，場(chǎng)群真實(shí)流行率為35.7%(95%CI：24.4%～47.0%)，發(fā)病品種均為山羊，品種間無(wú)差異(OR=0.5，P=0.07)，3月齡至4歲均可發(fā)病，其中以1～2歲居多。羊群多呈零星發(fā)病，個(gè)體表觀流行率15.3%，個(gè)體真實(shí)流行率為6.6%(95%CI：4.8%～8.5%)，致死率達(dá)100%。在羊群里具有明顯的傳染性，但傳播速度較慢，病程大多數(shù)持續(xù)1～4個(gè)月，個(gè)別的長(zhǎng)達(dá)1年。該病的主要風(fēng)險(xiǎn)因素為引種(OR=10.3，95%CI：3.3～32)、交叉放牧(OR=6.9，95%CI：2.3～20.5)和周?chē)? km有羊場(chǎng)(OR=5.4，95%CI:1.13～26)。建議該病的防控主要從引種和交叉放牧方面進(jìn)行控制。

調(diào)查時(shí)，風(fēng)險(xiǎn)因素設(shè)置的比較少，可能有的風(fēng)險(xiǎn)因素被忽略或遺漏。計(jì)算個(gè)體流行率時(shí)使用的是合樣檢測(cè)結(jié)果，可能和真實(shí)個(gè)體流行率有出入。因該病種為慢性傳染病，調(diào)查顯示的暴露因素和發(fā)病之間的相關(guān)性存在不確定性，這可能是邏輯回歸曲線擬合效果不佳的原因之一。