池志珍 黃鎔章 王煒辰 鄭時(shí)楨 郭曉芳 吳學(xué)輝

【摘 要】 目的：探討五節(jié)芒對(duì)阿霉素致小鼠腎損傷的保護(hù)作用。方法：建立阿霉素誘導(dǎo)小鼠的腎病模型，連續(xù)灌服五節(jié)芒水煎液4周后，檢測(cè)小鼠血清中的尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）含量;計(jì)算腎臟指數(shù);ELISA 法檢測(cè)腎組織中炎癥因子白介素-8（IL-8）的含量。結(jié)果：五節(jié)芒治療后小鼠血清中的BUN和Cr的含量、腎臟指數(shù)及腎組織中炎癥因子IL-8含量均較模型組小鼠明顯減少（P<0.05）。結(jié)論：五節(jié)芒對(duì)阿霉素所致小鼠腎損傷具有一定的保護(hù)作用。

【關(guān)鍵詞】 五節(jié)芒;阿霉素;腎損傷

【中圖分類(lèi)號(hào)】R285.5 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2021）13-0029-04

Abstract：Objective To investigate the protective effects of Miscanthus floridulus on adriamycin-induced kidney injury in mice. Methods Adriamycin-induced kidney injury model mice were established by a single intravenous injection of Adriamycin. They were given corresponding medicine or saline for 4 weeks. The effects of Miscanthus floridulus on kidney index，urea nitrogen （BUN） and creatinine （Cr） in the serum of mice were observed. ELISA was used to measure the expressions of IL-8 in renal tissue.Results After Miscanthus floridulus treatment，kidney index，the content of BUN and Cr，the expression of IL-8 were decreased markedly compared with model group （P<0.05）. Conclusion Miscanthus floridulus might protect mice kidney from injury induced by ADR.

Keywords：Miscanthus floridulus; Adriamycin; Kidney Injury

急性腎損傷是臨床最常見(jiàn)的急危重癥之一，其發(fā)病率約為30%，并且與患者的預(yù)后不良有關(guān)，全球每年約有400萬(wàn)例死于急性腎損傷，且發(fā)病率和死亡率不斷攀升，造成嚴(yán)重的健康和經(jīng)濟(jì)問(wèn)題[1]。目前，臨床上對(duì)于急性腎損傷提倡早發(fā)現(xiàn)、早治療，國(guó)內(nèi)外對(duì)其干預(yù)研究還處于探索階段，還沒(méi)有治療效果良好的藥物[2]。急性腎損傷所涉及的發(fā)病機(jī)制包括炎癥、氧化應(yīng)激和凋亡等，其中炎癥反應(yīng)被認(rèn)為是細(xì)胞病理?yè)p傷的關(guān)鍵致病因素，其導(dǎo)致的病理?yè)p傷貫穿于多種腎臟病發(fā)生、發(fā)展的過(guò)程中。

五節(jié)芒為禾本科多年生草本植物五節(jié)芒Miscanthus floridulus （Lab.） Warb. ex Schum. et Laut.的莖，其性平，味甘、淡，具有清熱通淋、祛風(fēng)除濕的功效[3]。臨床上常用于治療熱淋、白濁、白帶、急性腎孟腎炎、泌尿道結(jié)石等[4]。五節(jié)芒主要含有木脂素類(lèi)、甾醇類(lèi)、苷類(lèi)等成分[5]，近年來(lái)有研究發(fā)現(xiàn)，五節(jié)芒的苷類(lèi)成分可明顯抑制脂多糖LPS引起的NF-κB激活，具有一定的抗炎活性[4]，但目前有關(guān)它的藥理作用研究未見(jiàn)系統(tǒng)的研究和報(bào)導(dǎo)。本研究采用阿霉素致BLAB/C小鼠腎損傷，建立急性腎損傷小鼠模型，研究五節(jié)芒水煎液對(duì)小鼠腎組織的保護(hù)作用，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 BLAB/C 小鼠，清潔級(jí)，雄性，18～21 g，50只，上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，合格證號(hào) SCXK（滬）：2017-0005。

1.2 試驗(yàn)藥品 五節(jié)芒莖，采自閩侯縣鴻尾鄉(xiāng)里頭村，由池志珍等鑒定為禾本科芒屬植物五節(jié)芒Miscanthus floridulus （Lab.） Warb.ex Schum.et Laut.。鹽酸貝那普利片，北京諾華制藥有限公司，批號(hào)：X2893;阿霉素，瀚暉制藥有限公司，批號(hào)：19019833。

1.3 五節(jié)芒水煎液的制備 取干燥的五節(jié)芒100 g切成小段，置于容器內(nèi)，加12倍量的水浸泡30 min，加熱至沸騰（需時(shí)時(shí)攪拌）后保持60 min，濾出藥液，再加12倍量水加熱至沸騰（需時(shí)時(shí)攪拌）后保持30 min，濾出藥液，合并兩次的藥液，蒸發(fā)濃縮成0.5 g·mL-1生藥量的水煎劑。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 小鼠腎損傷模型的建立、分組與給藥 雄性BLAB/C小鼠50只，按體重隨機(jī)分為5組，即：正常對(duì)照組、模型組、五節(jié)芒低、高劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組，每組10只。除正常對(duì)照組外，其它4組小鼠均尾靜脈一次性注射11 mg·kg-1體重的阿霉素溶液[5]。從造模第2天開(kāi)始各組分別按劑量灌胃給藥，五節(jié)芒高劑量組給予10.0 g·kg-1五節(jié)芒水煎劑，五節(jié)芒低劑量組給予5.0 g·kg-1五節(jié)芒水煎劑，陽(yáng)性對(duì)照組給予2 mg·kg-1貝那普利混懸液，給藥體積按20 mL· Kg-1體重灌胃，正常對(duì)照組與模型組給予等體積的蒸餾水，每天1次，連續(xù)灌胃給藥4周。

1.4.2 小鼠血清中尿素氮和肌酐的含量測(cè)定 末次給藥24 h后，摘眼球取血，離心（3000 rpm，10 min），取血清，采用全自動(dòng)生化分析儀分別檢測(cè)血清中尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）的含量。

1.4.3 小鼠腎臟指數(shù) 采血后，處死小鼠，打開(kāi)小鼠腹腔，摘取右側(cè)腎臟稱(chēng)量，并計(jì)算腎臟指數(shù)。計(jì)算公式如下：小鼠腎臟指數(shù)=小鼠腎臟的質(zhì)量/小鼠體質(zhì)量× 100% 。

1.4.4 小鼠腎組織中炎癥因子IL-8的含量測(cè)定 取右側(cè)腎臟，稱(chēng)重，加PBS液，用電動(dòng)勻漿器勻漿，離心取上清液，按照ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，用酶標(biāo)儀在450 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算腎組織勻漿上清液中小鼠IL-8含量。

1.4.5 腎組織病理學(xué)觀察 采血后，處死小鼠，打開(kāi)小鼠腹腔，摘取左腎，福爾馬林固定左腎組織，經(jīng)石蠟包埋、切片、HE染色后，光鏡下觀察腎組織病理變化。

1.4.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS14.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 五節(jié)芒水煎液對(duì)腎損傷小鼠體重的影響 用阿霉素造模后，模型組小鼠體重與正常對(duì)照組比較，明顯減輕（P<0.05），給藥組在給藥1周后，給藥組體重較模型組明顯增加（P<0.05），隨著時(shí)間延長(zhǎng)，給藥組與模型組的體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 五節(jié)芒水煎液對(duì)腎損傷小鼠血清中BUN和Cr含量的檢測(cè) 與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠血清中BUN和Cr的含量明顯升高（P<0.01）;與模型組相比，五節(jié)芒低、高劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組小鼠血清中的 BUN和 Cr的含量均明顯降低（P<0.05或0.01）。見(jiàn)表2。

2.3 五節(jié)芒水煎液對(duì)小鼠腎臟指數(shù)的影響 與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠腎臟指數(shù)明顯增大（P<0.01）;與模型組相比，五節(jié)芒低、高劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腎臟指數(shù)均明顯降低（P<0.05）。見(jiàn)表3。

2.4 五節(jié)芒水煎液對(duì)腎組織中炎癥因子IL-8含量的影響 與正常對(duì)照組比，模型組腎組織中 IL-8的含量明顯增加（P<0.01）;與模型組相比，五節(jié)芒低、高劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腎組織中的炎癥因子IL-8含量均明顯減少（P<0.05或0.01）。見(jiàn)表4。

2.5 腎組織病理學(xué)觀察 高倍鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，正常對(duì)照組小鼠腎組織形態(tài)學(xué)正常，造模組小鼠腎小體毛細(xì)血管球體積增大，腎小球內(nèi)細(xì)胞數(shù)量上升，包含大量紅細(xì)胞，腎小囊層結(jié)構(gòu)被破壞，毛細(xì)血管球被擠壓并伴炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，腎小管管腔可見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸（如圖紅色箭頭）潤(rùn)。五節(jié)芒低、高劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腎組織上述損傷程度均較模型組小。如圖1所示。

3 討論

阿霉素是一種抗腫瘤的抗生素，它對(duì)RNA和DNA的合成具有抑制作用，其誘導(dǎo)的急性腎損傷是一個(gè)成熟的和高重復(fù)性的腎病模型[6-7]。本實(shí)驗(yàn)采用一次性尾靜脈注射阿霉素11 mg·kg-1致BLAB/C小鼠腎損傷模型，腎組織病理學(xué)觀察結(jié)果顯示造模組小鼠腎小體毛細(xì)血管球體積增大，腎小球內(nèi)細(xì)胞數(shù)量上升，包含大量紅細(xì)胞，腎小囊層結(jié)構(gòu)被破壞，毛細(xì)血管球被擠壓并伴炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，腎小管管腔可見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，符合急性腎損傷表現(xiàn)，與文獻(xiàn)[6]研究相一致。

本研究利用阿霉素誘導(dǎo)小鼠腎損傷模型探討五節(jié)芒水煎液對(duì)小鼠腎損傷的保護(hù)作用，研究結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠腎臟指數(shù)及血清BUN、Cr 水平升高，同時(shí)模型組腎病粒結(jié)構(gòu)嚴(yán)重?fù)p傷，腎小管上皮細(xì)胞空泡及顆粒變性，腎小囊層結(jié)構(gòu)被破壞，毛細(xì)血管球被擠壓并伴炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，腎小管管腔可見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸，符合急性腎損傷炎癥反應(yīng)等表現(xiàn)[6]。與模型組相比，五節(jié)芒水煎液低、高劑量組血清中BUN、Cr水平明顯下降，腎組織病理?yè)p傷變化部分得到恢復(fù)，這些結(jié)果提示五節(jié)芒水煎液能夠改善腎功能和腎組織的損傷。同時(shí)結(jié)果發(fā)現(xiàn)與模型組相比，五節(jié)芒水煎液低、高劑量組腎組織中的炎癥因子IL-8含量明顯減少，提示五節(jié)芒水煎液可改善炎癥反應(yīng)，這與文獻(xiàn)[5]中報(bào)道的一致。綜上所述，五節(jié)芒水煎液對(duì)阿霉素誘導(dǎo)的小鼠腎損傷具有保護(hù)作用，為其在治療急性腎損傷方面提供了理論依據(jù)，但其作用機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

[1]SRISAWAT N，SILEANU F E，MURUGAN R，et al.Variation in risk and mortality of acute kidney injury in critically ill patients： a multicenter study [J]. Am J Nephrol，2015（41）：81-88.

[2]SUTHERLAND S M，KWIATKOWSKI D M. Acute kidney injury in children [J]. Adv Chronic Kidney Dis，2017，24（6）： 380-387.

[3]泉州市泉港區(qū)中醫(yī)藥學(xué)會(huì).泉港本草（第五輯）[M].福州：海峽出版發(fā)行集團(tuán)/福建科學(xué)技術(shù)出版社，2017.

[4]福建省中醫(yī)藥研究所編.福建藥物志（第二冊(cè)）[M].福州：福建科學(xué)技術(shù)出版社，1982：412-413.

[5]熊禮燕.五節(jié)芒化學(xué)成分及其生物活性的研究[D].上海：第二軍醫(yī)大學(xué)，2011：40.

[6]舒適，張瑞義，徐中菊，等. 真武湯對(duì)阿霉素所致小鼠腎損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究 [J].中國(guó)中醫(yī)藥科技，2016，23（5）：526-529.

[7]張悅，魏民，王謙，等.阿霉素復(fù)制大鼠微小病變腎病模型的研究[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，25（2）：16-18.

（收稿日期：2020-12-02 編輯：劉斌）