白明月 孫高貴 張作鵬 趙仁玉 王小康 王方昆 常維山 庚承芳 張勁 梁瀟 米雪麗 王金紀(jì)

摘? 要：本文調(diào)查了部分山東省境內(nèi)種雞場、孵化場死亡雞胚中的細(xì)菌感染情況，結(jié)果表明，感染率孵化場死胚細(xì)菌分離率最高的達(dá)100%，最低的為20%。從種雞品種來看，817肉雜雞種蛋質(zhì)量最差，沙門氏菌感染率在0%～70%，三黃雞13%～20%，快速麻雞17%，平均死胚細(xì)菌感染率為50%左右。藥敏試驗表明，安普霉素和恩諾沙星敏感性較高，聯(lián)合藥敏實驗表明，痢菌凈與金霉素、強(qiáng)力霉素、安普霉素、阿莫西林都有良好的配伍效果，替米考星與金霉素、強(qiáng)力霉素、阿莫西林的聯(lián)合用藥也有較好的配伍效果。

關(guān)鍵詞：死雞胚;細(xì)菌感染;調(diào)查;藥敏試驗

中圖分類號：S858.511.31+3? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B? ? ? ? 文章編號：1673-1085（2021）6-0037-05

近年來，各種國產(chǎn)肉雜雞在山東省都有了快速發(fā)展。但是由于國產(chǎn)肉雜雞種雞場管理相對落后，種雞垂直傳播疾病凈化不夠徹底，影響了肉雜雞雛雞的質(zhì)量和養(yǎng)殖效益。為了調(diào)查山東省肉雜雞雛雞帶菌情況，我們調(diào)查了部分山東省境內(nèi)種雞場、孵化場死亡雞胚中的細(xì)菌感染情況，并對分離鑒定的細(xì)菌進(jìn)行了藥敏試驗和聯(lián)合藥敏試驗?，F(xiàn)將結(jié)果報告如下：

1 材料方法

1.1 胚胎來源

收集規(guī)?；?17種雞場、三黃雞種雞場、快速型麻種雞所屬孵化室中未能正常出殼的完整死雞胚種蛋20～30枚/場。

1.2 培養(yǎng)基

麥康凱培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、鮮血培養(yǎng)基，購自青島海博生物技術(shù)有限公司。

1.3 細(xì)菌分離培養(yǎng)

首先用消毒劑將雞胚洗凈，用酒精將雞胚氣室處進(jìn)行再次消毒。撥開氣室處雞蛋殼，撕開殼膜，用取菌環(huán)勾取雞胚內(nèi)容物，在上述三種培養(yǎng)基劃線分離，37 ℃過夜培養(yǎng)。

1.4 細(xì)菌鑒定

在麥康凱培養(yǎng)基上生長的紅色菌落可判定為大腸桿菌或腸桿菌;淡黃色半透明菌落為可疑沙門氏菌。在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上呈半透明的淡綠色菌落，且在獻(xiàn)血培養(yǎng)基呈α溶血的為綠膿桿菌。在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上呈不透明的白色菌落，且在鮮血培養(yǎng)基上無?溶血環(huán)的球菌為白色葡萄球菌;在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上呈不透明的淡黃色菌落，且在鮮血培養(yǎng)基上有?溶血環(huán)的球菌為金色葡萄球菌。可疑沙門氏菌利用質(zhì)譜微生物鑒定儀（Bruker）鑒定細(xì)菌種類[1]。

1.5 藥敏試紙

將分離培養(yǎng)的部分細(xì)菌采用紙片法（K-B法）進(jìn)行藥敏試驗（藥敏試紙購自杭州微生物試劑有限公司）。

1.6 藥敏試驗

按照參考文獻(xiàn)[2]，勾取少許分離鑒定的細(xì)菌培養(yǎng)物，溶解到到1 mL生理鹽水中，涂布營養(yǎng)瓊脂平板，粘貼相應(yīng)藥敏試紙后，37 ℃過夜培養(yǎng)。測量抑菌圈直徑。

1.7 聯(lián)合藥敏試驗

按照1.6粘貼藥敏試紙后，在藥敏試紙片上再疊加上一個配伍用藥的藥敏試紙片作為基礎(chǔ)配伍藥物（打底藥物）。本研究選擇金霉素、強(qiáng)力霉素、安普霉素和阿莫西林為打底藥物，與氟苯尼考、恩諾沙星、新霉素、痢菌凈和替米沙星兩兩組合，疊加在一起，37℃ 過夜培養(yǎng)。測量抑菌圈直徑。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)菌分離鑒定結(jié)果

在所有收集的雞場死雞胚中均或多或少地可以分離到不同種類的細(xì)菌，結(jié)果見表1。由表1可以看出，大腸桿菌的分離率最高，沙門氏菌其次，綠膿桿菌第三，平均感染率為50%左右。感染率最高的孵化場死胚細(xì)菌分離率達(dá)100%，最低的為10%。從種雞品種來看，817肉雜雞質(zhì)量變化很大，沙門氏菌感染率在0%～70%（平均23.4%），三黃雞沙門氏菌感染率在13%～20%（平均16%），快速麻雞約為17%。

2.2 藥敏試驗

對分離鑒定的部分細(xì)菌進(jìn)行了藥敏試驗。結(jié)果表明，所有分離鑒定的細(xì)菌都有耐藥性，具體試驗結(jié)果見表2。由表2可以看出，耐藥性最強(qiáng)的細(xì)菌可耐受9種藥物，最少的也可耐受3種。敏感性最高的藥物為安普霉素和恩諾沙星，最低的是痢菌凈。

2.3 聯(lián)合藥敏試驗

2.3.1 強(qiáng)力霉素為基礎(chǔ)藥物的聯(lián)合藥敏試驗 結(jié)果見表3。由表3可以看出，強(qiáng)力霉素與新霉素、替米考星和痢菌凈配伍，均有較好結(jié)果。

2.3.2 金霉素聯(lián)合藥敏實驗 金霉素與恩諾沙星等藥物的聯(lián)合藥敏試驗結(jié)果見表3。由表3可以看出，金霉素與替米考星和痢菌凈等藥物有較好的聯(lián)合用藥結(jié)果。

2.3.3 安普霉素聯(lián)合藥敏試驗 安普霉素與恩諾沙星等藥物的聯(lián)合藥敏試驗結(jié)果見表4。由表4可以看出，安普霉素與替米考星和痢菌凈等藥物有較好的聯(lián)合用藥效果。

2.3.4 阿莫西林聯(lián)合藥敏試驗 阿莫西林與恩諾沙星等藥物的聯(lián)合藥敏試驗結(jié)果見表5。由表5可以看出，阿莫西林與替米考星和痢菌凈等藥物有較好的聯(lián)合用藥結(jié)果。

2.4 多種藥物組合敏感細(xì)菌統(tǒng)計 9種藥物兩兩組合藥敏試驗結(jié)果見表6。由表6可以看出，痢菌凈的聯(lián)合用藥敏感率最高，可達(dá)85.7%;替米考星第二，82.1%;強(qiáng)力霉素和新霉素都是71.4%。

3 討論

種雞感染沙門氏菌后，可通過種蛋垂直傳染給雛雞，嚴(yán)重者可造成死胚。種蛋上孵前如果未進(jìn)行消毒或消毒不嚴(yán)格，附著在種蛋表面的細(xì)菌可通過蛋殼的氣孔感染雞胚，造成雛雞帶菌或死胚。本研究表明，所有孵化場的死胚中都或多或少攜帶有不同種類的細(xì)菌，其中大腸桿菌感染率最高。大多數(shù)孵化場的死胚中攜帶沙門氏菌，但是感染率差別較大，說明山東省肉雜雞種雞質(zhì)量參差不齊、良莠不一。經(jīng)追蹤調(diào)查，污染最嚴(yán)重的是孵化室，經(jīng)加強(qiáng)種蛋消毒后，孵化率已有明顯提高。本試驗結(jié)果還表明，死胚中攜帶的大腸桿菌、沙門氏菌都具有多重耐藥性，敏感性較高的藥物是安普霉素和恩諾沙星，但是達(dá)不到100%敏感。聯(lián)合用藥具有更確切的防治效果，本研究表明痢菌凈與強(qiáng)力霉素、阿莫西林等藥物有協(xié)同作用;替米考星與強(qiáng)力霉素、阿莫西林等藥物聯(lián)合，能提高對所試細(xì)菌的抑菌效果。肖建光[3]等的研究結(jié)果表明，痢菌凈與阿莫西林聯(lián)合用藥對禽源沙門氏菌具有協(xié)同作用;吳群[4]的研究結(jié)果表明，替米考星與強(qiáng)力霉素具有協(xié)同作用，與本研究結(jié)果一致。強(qiáng)力霉素和新霉素仍然不失為良好的基礎(chǔ)配伍藥物，但是有效率不及替米考星和痢菌凈，氟苯尼考已降到最差。雛雞到達(dá)飼養(yǎng)現(xiàn)場，可考慮使用這些藥物作為開口藥。

參考文獻(xiàn)：

[1] 王衛(wèi)萍，奚海燕，黃梅，等.基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜在臨床病原菌鑒定中的應(yīng)用[J].臨床檢驗雜志，2015，33（5）：337-340.

[2] 邱令法，裴碧娜.產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的檢測和耐藥性分析[J].檢驗醫(yī)學(xué)，2012，27（5）：421-423.

[3] 肖建光，常維山.聯(lián)合用藥對禽源沙門氏菌的體外抑菌試驗[J].家禽科學(xué)，2009（11）：33-36.

[4] 吳群，黃楠，劉貝欣，等.六種抗菌藥單用與聯(lián)合應(yīng)用對大腸桿菌的體外抑菌效果觀察[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2018（10）：88-91.