李志強(qiáng) 呂先萍 劉鐵梅 劉冰 張冬霞 宮濟(jì)武 馬曙軒 劉瑩 陳劍 黃吉娥 呂孟興 羅冰 文軍柳美秀 李興龍 李麗瑋 于建

ABO血型鑒定實(shí)施正反定型是為了驗(yàn)證檢測(cè)結(jié)果的正確性。由于1周歲內(nèi)嬰幼兒機(jī)體免疫系統(tǒng)發(fā)育不夠健全，易導(dǎo)致ABO血型鑒定反定型結(jié)果出現(xiàn)異常。國內(nèi)諸多醫(yī)院對(duì)1周歲尤其是6個(gè)月內(nèi)嬰幼兒進(jìn)行ABO血型鑒定時(shí)往往只做正定型，何時(shí)應(yīng)同時(shí)進(jìn)行反定型檢測(cè)在我國臨床輸血界沒有明確規(guī)定。為了確保1周歲內(nèi)嬰幼患兒的輸血安全性，著者在全國范圍內(nèi)進(jìn)行1周歲內(nèi)嬰幼兒紅細(xì)胞ABO血型抗體凝集強(qiáng)度與月齡消長相關(guān)性多中心前瞻性研究，其宗旨是為了明確國內(nèi)1周歲內(nèi)嬰幼兒紅細(xì)胞ABO血型反定型檢測(cè)時(shí)間與結(jié)果強(qiáng)度判斷界定值，為制定我國嬰幼兒臨床輸血血型血清學(xué)檢測(cè)規(guī)范提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

對(duì)象與方法

1 研究對(duì)象 收集2019年5～10月來自于全國范圍內(nèi)1周歲內(nèi)嬰幼兒1 564例血標(biāo)本，其中男922名、女642名，血型分布：A型516名、B型515例、O型533例。民族分布：漢族、回族、朝鮮族、壯族、彝族、藏族、白族、布依族、土家族、傣族、滿族、侗族、苗族、維吾爾族、蒙古族等；漢族與少數(shù)民族例數(shù)比為13.6∶1。入組嬰幼兒標(biāo)準(zhǔn)：無輸血史，無血液系統(tǒng)疾病、無良惡性腫瘤、無免疫系統(tǒng)疾病與嚴(yán)重感染性疾病史，未使用抗生素、免疫抑制劑和抗腫瘤藥物等藥物史。按月齡分成12組。

2 研究試劑與儀器 人ABO血型反定型用紅細(xì)胞試劑盒（上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司，批號(hào)20195320），ABO、Rh血型定型檢測(cè)卡（長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司，批號(hào)20190504）等。細(xì)胞洗滌離心機(jī)（KA-2200日本久保田株式會(huì)社）、醫(yī)用離心機(jī)（TD-A 長春博研科學(xué)儀器有限責(zé)任公司）。

3 檢測(cè)方法 留取靜脈血標(biāo)本分別應(yīng)用三種方法進(jìn)行ABO血型反定型檢測(cè)：常溫試管法、4℃試管法、微柱凝集法檢測(cè)。4℃試管法ABO血型反定型：在試管加樣后置入4℃冰箱內(nèi)放置30 min后離心，其他檢測(cè)步驟與常溫試管法ABO血型反定型一致。常溫試管法與微柱凝集法檢測(cè)步驟嚴(yán)格按照《輸血技術(shù)操作規(guī)程（輸血科部分）》人民衛(wèi)生出版社，2016年第1版實(shí)施。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以凝集強(qiáng)度評(píng)分記錄，判定原則見表1、2。

表1 試管法實(shí)驗(yàn)結(jié)果判讀原則

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS20.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)做統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以采用中位數(shù)（四分位間距）的方式進(jìn)行表示，即M（P25，P75）。各血型間采用方差分析，每血型不同方法學(xué)采用配對(duì)樣本秩和檢驗(yàn)；性別、民族和地域采用方差分析；P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表2 微柱凝集法實(shí)驗(yàn)結(jié)果判讀原則

結(jié) 果

1 各血型反定型細(xì)胞凝集強(qiáng)度變化

1.1 A型嬰幼兒：A型嬰幼兒1～12月各月齡段反定型與B細(xì)胞反應(yīng)，微柱凝集法與常溫試管法比較，各月齡凝集強(qiáng)度分值均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與4℃試管法比較，除10～12月齡段外，其余各月齡段間兩兩比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。4℃試管法與常溫試管法比較，各月齡段的凝集強(qiáng)度分值均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見表3。

隨著A型嬰幼兒月齡的增加，微柱凝集法和4℃試管法的凝集強(qiáng)度分值≥4分（凝集≥1+W）和≥7分（凝集≥2+W）的月齡分別出現(xiàn)在第6個(gè)月、第8～9個(gè)月；而常溫試管法則分別出現(xiàn)在第8個(gè)月、第10個(gè)月，見表4。

1.2 B型嬰幼兒：B型嬰幼兒1～12月各月齡段反定型與A細(xì)胞反應(yīng)，微柱凝集法與常溫試管法比較，各月齡凝集強(qiáng)度分值均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與4℃試管法比較，除10～12月齡段外，其余各月齡段間兩兩比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。4℃試管法與常溫試管法比較，各月齡段的凝集強(qiáng)度分值均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

隨著B型嬰幼兒月齡的增加，微柱凝集法和4℃試管法的凝集強(qiáng)度分值≥4分（凝集≥1+W）和≥7分（凝集≥2+W）的月齡分別出現(xiàn)在第1個(gè)月、第3-4個(gè)月；而常溫試管法則分別出現(xiàn)在第1個(gè)月、第7個(gè)月，見表4。

1.3 O型嬰幼兒：O型嬰幼兒1～12月各月齡段反定型與A細(xì)胞和B細(xì)胞反應(yīng)，微柱凝集法與常溫試管法比較，各月齡凝集強(qiáng)度分值均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與4℃試管法比較，除11～12月齡外，其余各月齡段間兩兩比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。4℃試管法與常溫試管法比較，除B細(xì)胞9外，其余各月齡段的凝集強(qiáng)度分值均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表3 各血型嬰幼兒月齡與反定型細(xì)胞凝集強(qiáng)度 分值：[M（P25，P75）]

O型嬰幼兒月齡第1個(gè)月時(shí)，微柱凝集法、4℃試管法反定型A、B細(xì)胞凝集強(qiáng)度分值均≥7分（凝集≥2+W）；常溫試管法反定型分值均≥4分（凝集≥1+W），分值≥7分（凝集≥2+W）分別出現(xiàn)在第1、2～9個(gè)月，見表4。值得一提的是，O型嬰幼兒出生時(shí)反定型A、B細(xì)胞凝集強(qiáng)度分值相對(duì)與其他血型均偏高（均≥7分），但隨著月齡逐漸增加，其凝集強(qiáng)度分值均出現(xiàn)下降趨勢(shì)，平均降低1～3分不等，隨后凝集強(qiáng)度分值重新逐漸恢復(fù)至原水平甚至更高值。

表4 各血型嬰幼兒月齡與反定型細(xì)胞凝集強(qiáng)度評(píng)分（單位：月齡）

2 各血型反定型細(xì)胞凝集強(qiáng)度比較 微柱凝集法、4℃試管法和常溫試管法1～3月齡時(shí)O型嬰幼兒反定型凝集強(qiáng)度分值分別比A型和B型反定型凝集強(qiáng)度分值高，兩兩比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。隨著月齡至4～6月齡時(shí)O型反定型凝集強(qiáng)度分值降到最低，7～12月齡又逐漸增高，與A型和B型反定型凝集強(qiáng)度分值兩兩比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

另外，微柱凝集法、4℃試管法和常溫試管法1～8月齡A型嬰幼兒反定型凝集強(qiáng)度分值均比B型和O型反定型凝集強(qiáng)度分值低，兩兩比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；隨著月齡增加至12月齡，分值差異明顯減少，兩兩比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），表4。

3 各血型反定型細(xì)胞凝集強(qiáng)度與性別、民族和地域相關(guān)性 微柱凝集法、常溫試管法和4℃試管法A、B、O型嬰幼兒反定型細(xì)胞凝集強(qiáng)度在男女性別間、漢族與少數(shù)民族間分別相互比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；而在南方與北方區(qū)域分布（以秦嶺-淮河為界）分別相互比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表5。

表5 各血型反定型細(xì)胞凝集強(qiáng)度與性別、民族和地域相關(guān)性 分值：[M（P25，P75）]

討 論

由于1周歲內(nèi)嬰幼兒造血器官和免疫系統(tǒng)發(fā)育均不夠完善，極易出現(xiàn)各種疾病，在疾病的治療過程中常依賴輸血治療；又由于機(jī)體免疫系統(tǒng)發(fā)育不健全也可影響ABO血型抗體產(chǎn)生，極易引起ABO血型鑒定反定型結(jié)果出現(xiàn)異常，從而導(dǎo)致ABO血型鑒定正反定型不符。因此，通常1周歲內(nèi)嬰幼兒輸血前紅細(xì)胞ABO血型鑒定僅依賴正定型結(jié)果，因而存在一定輸血風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于1周歲內(nèi)嬰幼兒來說，何時(shí)進(jìn)行紅細(xì)胞ABO血型正反定型同時(shí)檢測(cè)國外文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果不一，美國血庫學(xué)會(huì)規(guī)定＞6個(gè)月嬰幼兒應(yīng)進(jìn)行ABO血型正反定型檢測(cè)；英國血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)則規(guī)定＞4個(gè)月內(nèi)嬰幼兒應(yīng)進(jìn)行ABO血型正反定型檢測(cè)。而國內(nèi)對(duì)其沒有統(tǒng)一明確規(guī)定，由各醫(yī)院自行決定。為了確保1周歲內(nèi)嬰幼患兒的輸血安全性，必須明確國內(nèi)1周歲內(nèi)嬰幼兒紅細(xì)胞ABO血型反定型檢測(cè)時(shí)間與結(jié)果強(qiáng)度判斷界定值。另外，由于我國仍處于發(fā)展中國家之列，地域遼闊，醫(yī)療資源的分配還不夠平衡，宜有適合我國各地進(jìn)行ABO血型反定型檢測(cè)的方法學(xué)和其相適應(yīng)的判讀規(guī)則。

本文研究表明應(yīng)用微柱凝集法和4℃試管法進(jìn)行ABO血型反定型檢測(cè)時(shí)，其凝集強(qiáng)度評(píng)分≥4分（凝集≥1+W），月齡不小于6個(gè)月；其凝集強(qiáng)度評(píng)分≥7分（凝集≥2+W），月齡不小于9個(gè)月。應(yīng)用常溫試管法進(jìn)行ABO血型反定型檢測(cè)時(shí)，其凝集強(qiáng)度評(píng)分≥4分（凝集≥1+W），月齡不小于8個(gè)月；其凝集強(qiáng)度評(píng)分≥7分（凝集≥2+W），月齡不小于10個(gè)月。著者認(rèn)為醫(yī)療條件較差與民眾生活欠富裕地區(qū)，可應(yīng)用試劑成本較低的4℃試管法進(jìn)行ABO血型反定型檢測(cè)，其結(jié)果判讀效果與微柱凝集法基本一致。

本文研究表明嬰幼兒隨著月齡增加，各型反定型細(xì)胞凝集強(qiáng)度變化曲線均呈“湯勺式圖形”。另外，1月齡時(shí)O型嬰幼兒反定型凝集強(qiáng)度分值分別比B型和A型分值高，隨著月齡增加至4～6月齡時(shí)分值降到最低，至后逐漸增高。著者認(rèn)為可能是1月齡O型嬰幼兒機(jī)體產(chǎn)生的血型相關(guān)抗A和抗B抗體受母親的影響比A型、B型嬰幼兒要強(qiáng)。值得一提的是A、B、O型嬰幼兒反定型細(xì)胞凝集強(qiáng)度在南方與北方區(qū)域分布（以秦嶺-淮河為界）存在一定差異，其原因有待于進(jìn)一步研究。

總之，明確國內(nèi)1周歲內(nèi)嬰幼兒紅細(xì)胞ABO血型反定型檢測(cè)時(shí)間與結(jié)果強(qiáng)度判斷界定值，可確保1周歲內(nèi)嬰幼兒的輸血安全性；也可為制定我國嬰幼兒臨床輸血血型血清學(xué)檢測(cè)規(guī)范提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

致謝：長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司馮立崗、馮俊奎，上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司顧桂玲、王玲玲，奧森多醫(yī)療器械貿(mào)易（中國）有限公司陳凱、韓莎莎等支持。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突