慕雪嬌，劉曉玲，贠 晗，崔龍波

（煙臺(tái)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山東煙臺(tái) 264005）

FTZ-F1基因最初作為果蠅（Drosophila melanogaster）早期胚胎形成階段分化基因ftz的同源異形盒被發(fā)現(xiàn)［1］。在哺乳動(dòng)物中，根據(jù)其功能和表達(dá)模式分為兩個(gè)亞族，一個(gè)亞族主要在胰腺、肝臟、腸和卵巢中表達(dá)，參與膽固醇和膽汁酸代謝的調(diào)控［2］，稱為肝臟受體激素／甲胎蛋白轉(zhuǎn)錄因子（LRH-1／FTF）或NR5A2［3］，另一個(gè)亞族主要在腎上腺皮質(zhì)、卵巢、精巢、胎盤、脂肪和腦中表達(dá)，是下丘腦-垂體-性腺軸和腎上腺皮質(zhì)內(nèi)分泌功能的重要調(diào)節(jié)因子，在性腺分化中發(fā)揮重要作用［4-5］，稱為類固醇生成因子-1／腎上腺4結(jié)合蛋白（SF-1／Ad4BP）［6］，SF-1在性腺中的表達(dá)呈現(xiàn)二態(tài)性，以小鼠（Mus musculus）為例，當(dāng)兩性出現(xiàn)形態(tài)學(xué)差異時(shí)，在雌性中表達(dá)會(huì)降低［7］，因此認(rèn)為其可能與性別決定有關(guān)［8］。

隨著研究深入，越來越多低等生物的FTZF1基因也逐漸被發(fā)現(xiàn)，但在低等生物中，F(xiàn)TZ-F1基因的亞家族分類、命名和表達(dá)并不完全與哺乳動(dòng)物相同，相對(duì)于高等哺乳動(dòng)物可明確分為兩個(gè)亞族而言（根據(jù)其功能和表達(dá)模式），低等生物FTZ-F1基因的表達(dá)和功能可能更加復(fù)雜和多樣。例如，YOSHIURA和SENTHILKUMARAN［9］對(duì)尼羅羅非魚（Oreochromis niloticus）FTZ-F1基因的表達(dá)特征分析發(fā)現(xiàn)，相對(duì)于NR5A2亞家族，F(xiàn)TZ-F1基因表達(dá)模式更傾向于和SF-1聚為一類，認(rèn)為該FTZ-F1基因應(yīng)歸類到尼羅羅非魚SF-1亞家族；但郭變［10］對(duì)尼羅羅非魚的FTZ-F1基因進(jìn)行序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)，該基因與SF-1亞家族并不能聚為一類，而應(yīng)屬于NR5A4亞族。斑馬魚（Danio rerio）中發(fā)現(xiàn)4種FTZ-F1基因，對(duì)其序列進(jìn)行比對(duì)分析后發(fā)現(xiàn)，斑馬魚ff1a和ff1基因可被歸類于NR5A2亞家族，但這兩種基因的表達(dá)模式和功能卻與哺乳動(dòng)物NR5A2不相符［11］。郭變［10］對(duì)泥鰍（Misgurnus anguillicaudatus）和大鱗副泥鰍（Paramisgarnus dabryanus）FTZ-F1基因的研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)TZ-F1基因在序列上與NR5A2亞家族的同源性高于SF-1，但其表達(dá)特征卻與高等脊椎動(dòng)物的SF-1表達(dá)特征更相似，同時(shí)其又在肝臟中表達(dá)，說明也具有NR5A2的特性。上述研究表明，在低等生物中FTZ-F1基因的亞家族歸類要考慮該基因的序列分析和表達(dá)特征等多方面因素。

目前為止，F(xiàn)TZ-F1相關(guān)研究大都針對(duì)脊椎動(dòng)物開展，無脊椎動(dòng)物中研究相對(duì)較少。對(duì)刀額新對(duì)蝦（Metapenaeus ensis）FTZ-F1在成蝦卵巢、睪丸、眼柄、表皮和新孵化的無節(jié)幼體中的表達(dá)研究發(fā)現(xiàn)，其在以上組織中均有表達(dá)，認(rèn)為該基因在對(duì)蝦早期胚胎和幼體發(fā)育中發(fā)揮作用，在表皮中的表達(dá)表明該基因可能參與了蛻皮過程，但其他組織中的作用未進(jìn)行深入分析［12］。大型溞（Daphnia magna）中發(fā)現(xiàn)了兩種FTZ-F1亞型，收集雌雄胚胎進(jìn)行表達(dá)研究發(fā)現(xiàn)，在單細(xì)胞和原腸胚期，兩種亞型在雄性中的表達(dá)量都是雌性的兩倍，認(rèn)為該基因可能是大型溞環(huán)境性別決定機(jī)制中產(chǎn)生雄性個(gè)體所必需的［13］。在中華鱉（Pelodiscus sinensis）中發(fā)現(xiàn)該基因?qū)儆贜R5A2，在心臟、肝臟、脾臟、腦、胃、肌肉、精巢、卵巢中均有表達(dá)，在肝臟和卵巢中表達(dá)量較高，推測(cè)其可能在中華鱉生殖功能和肝功能調(diào)控中有重要作用，在性腺分化初期表達(dá)量最高，隨后顯著下降，表明該基因可能參與中華鱉的性別分化過程［14］。對(duì)埃及伊蚊（Aedes aegypti）［15］及三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）［16］中該基因的研究主要集中在蛻皮方面，認(rèn)為該基因在蛻皮過程中發(fā)揮調(diào)控作用。軟體動(dòng)物中僅見紫貽貝（Mytilus galloprovincialis）、虎斑烏賊（Sepia pharaonis）、太平洋牡蠣（Crassostrea gigas）、葡萄牙牡蠣（Crassostrea angulate）等多數(shù)來源于基因組測(cè)序獲得的FTZ-F1亞家族基因序列，但尚未見表達(dá)相關(guān)研究。

櫛孔扇貝是一種雌雄異體且性別穩(wěn)定的雙殼貝類，是我國(guó)北方沿海重要的經(jīng)濟(jì)貝類［17］。櫛孔扇貝的性別和性腺分化相關(guān)基因研究對(duì)于掌握其性別形成的機(jī)理具有理論意義。本研究通過對(duì)櫛孔扇貝FTZ-F1基因序列特征、組織表達(dá)特征、性腺發(fā)育周期表達(dá)特征的檢測(cè)和分析，一方面為研究FTZ-F1基因在櫛孔扇貝性腺分化和發(fā)育中發(fā)揮的作用提供基礎(chǔ)資料，另一方面為了解FTZ-F1基因在軟體動(dòng)物中的表達(dá)模式研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

櫛孔扇貝購(gòu)自煙臺(tái)大學(xué)附近海鮮市場(chǎng)，于實(shí)驗(yàn)室的過濾海水中暫養(yǎng)1 d，選取活力旺盛的扇貝進(jìn)行取樣。取各發(fā)育時(shí)期的性腺，一部分用Bouin’s液固定，后通過組織切片進(jìn)行發(fā)育時(shí)期鑒定［18］，另一部分存于－80℃冰箱，用于RNA提??；選取發(fā)育同步的雌雄個(gè)體各組織（含性腺、鰓、肝胰臟、腎臟、外套膜、閉殼?。┯谝旱兴賰龊蟠嬗冢?0℃冰箱，以備RNA提取。以上樣本取樣個(gè)體數(shù)各為3個(gè)。

1.2 總RNA提取與cDNA的合成

異硫氰酸胍法提取各組織RNA［19］，相關(guān)試劑購(gòu)自上海生工生物公司。提取的RNA經(jīng)NanoDrop ND-2000超微量分光光度計(jì)進(jìn)行濃度與OD值檢測(cè)，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)所提取RNA的完整性。檢驗(yàn)合格的RNA按Evo M-MLV試劑盒說明書反轉(zhuǎn)錄成cDNA，并保存于－20℃冰箱備用，實(shí)驗(yàn)所用反轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自北京寶日醫(yī)生物技術(shù)有限公司。

1.3 FTZ-F1基因序列獲得與分析

根據(jù)實(shí)驗(yàn)室已有的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)①本實(shí)驗(yàn)室未發(fā)表數(shù)據(jù)設(shè)計(jì)FTZF1基因擴(kuò)增引物（表1）。以櫛孔扇貝性腺cDNA為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)，PCR程序如下：94℃5 min、（94℃50 s，48℃45 s，72℃1 min 50 s）×38個(gè)循環(huán)；72℃10 min，獲得的產(chǎn)物送華大基因測(cè)序。對(duì)測(cè)得序列進(jìn)行分析：利用Clustal X和DNAman軟件進(jìn)行同源序列比對(duì)；利用Clustal X和MEGA4軟件，采用鄰接法（neighbor-joining，NJ）構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。利用Swiss-Model同源建模服務(wù)器，預(yù)測(cè)FTZ-F1蛋白三維結(jié)構(gòu)。

1.4 各組織的RT-PCR

每個(gè)組織分別取3個(gè)不同個(gè)體的對(duì)應(yīng)RNA樣，按比例混合后用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。FTZ-F1的RTPCR引物為P3／P4，β-actin作為內(nèi)參基因，其引物為A3／A4。不同組織中cDNA作為模板，以A3／A4為引物進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增程序如下：94℃2 min、（94℃30 s，56℃30 s，72℃30 s）×23個(gè)循環(huán)。PCR產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳檢測(cè)，根據(jù)各組織條帶亮度重新調(diào)整模板量，直到檢測(cè)出各組織模板擴(kuò)增出的內(nèi)參基因PCR條帶亮度相似，以上述確定的模板量進(jìn)行FTZ-F1片段擴(kuò)增，獲得產(chǎn)物后電泳檢測(cè)拍照。

1.5 性腺周期的qRT-PCR

分別取增殖期、生長(zhǎng)期、成熟期的雌雄性腺，提取RNA后分別反轉(zhuǎn)錄成cDNA，qRT-PCR特異引物為P3／P4（表1），內(nèi)參基因β-actin引物為A3／A4。每個(gè)發(fā)育時(shí)期性腺設(shè)置3個(gè)樣品重復(fù)，每個(gè)樣本設(shè)置2個(gè)技術(shù)重復(fù)，使用ABI7500型熒光定量PCR儀檢測(cè)，程序如下95℃10 min、（95℃15 s，60℃1 min，72℃30 s）×40個(gè)循環(huán)。設(shè)生長(zhǎng)期精巢目的基因表達(dá)量為1，采用2－ΔΔCt法計(jì)算目的基因相對(duì)表達(dá)量。以SPSS軟件包中one-way ANOVA進(jìn)行顯著性分析，最小顯著差法（least significant difference，LSD）多重檢驗(yàn)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析（P＜0.05為顯著水平），用Origin85軟件進(jìn)行做圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 櫛孔扇貝的性腺發(fā)育周期組織切片

組織切片結(jié)果如圖1所示，在圖1-a和圖1-d中可以觀察到精巢和卵巢的濾泡壁上僅形成了一層或者兩層生殖細(xì)胞，表明此時(shí)扇貝的性腺已進(jìn)入增殖期；在圖1-b和圖1-e中已經(jīng)能夠觀察到明顯的濾泡腔，并且在濾泡壁上已經(jīng)形成多層生殖細(xì)胞，表明此時(shí)扇貝的性腺已經(jīng)進(jìn)入生長(zhǎng)期；在圖1-c和圖1-f中精巢和卵巢的濾泡腔內(nèi)已經(jīng)充滿生殖細(xì)胞，精巢出現(xiàn)大量精子，卵巢中成熟卵被擠壓，呈不規(guī)則形狀，表明此時(shí)扇貝性腺已經(jīng)進(jìn)入成熟期［18］。

圖1 櫛孔扇貝不同發(fā)育時(shí)期的性腺組織學(xué)觀察Fig.1 Histological observation on gonads of Chlamys farreri in different developmental phases

2.2 系統(tǒng)進(jìn)化分析

如圖2所示，無脊椎動(dòng)物的FTZ-F1蛋白聚為一類、脊椎動(dòng)物的FTZ-F1蛋白聚為一類；櫛孔扇貝FTZ-F1蛋白首先與紫貽貝的NR5A2聚類，再與太平洋牡蠣的SF-1及葡萄牙牡蠣的FTZ-F1聚類，之后與虎斑烏賊NR5A2聚類，所顯示的系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系與物種的分類地位基本一致。但低等生物中關(guān)于FTZ-F1基因的研究較少，不能通過聚類分析明確櫛孔扇貝在同源性上與SF-1還是NR5A2更為接近。

圖2 不同物種SF-1、NR5A2、FTZ-F1蛋白系統(tǒng)進(jìn)化分析Fig.2 Phylogenetic tree of SF-1，NR5A2，F(xiàn)TZ-F1 protein from different species

2.3 目的基因序列特征分析

如圖3所示，櫛孔扇貝FTZ-F1基因CDS長(zhǎng)1 668 bp，編碼555個(gè)氨基酸，含有DBD和LBD（LBD區(qū)域里含有一個(gè)激活功能域AF-2），F(xiàn)TZF1蛋白三維結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)也顯示了這兩個(gè)保守區(qū)（圖4）。不同物種多序列比對(duì)結(jié)果如圖5所示，在櫛孔扇貝中該蛋白的保守區(qū)與其他物種的保守區(qū)較為一致，并也含有FTZ-F1家族特有的FTZ-F1盒。

圖3 櫛孔扇貝FTZ-F1基因CDS序列及推導(dǎo)的氨基酸序列Fig.3 CDSsequence and deduced amino acid sequence of FTZ-F1 gene of Chlamys farreri

圖5 不同物種的FTZ-F1同源蛋白序列對(duì)比Fig.5 Sequence comparison of FTZ-F1 homologous proteins from different species

2.4 FTZ-F1基因的組織表達(dá)結(jié)果

RT-PCR結(jié)果顯示（圖6，圖7），F(xiàn)TZ-F1基因在櫛孔扇貝的多個(gè)組織中廣泛表達(dá)，在雌性個(gè)體中，該基因在閉殼肌、腎、鰓中表達(dá)比較明顯，在外套膜、肝胰腺和卵巢中表達(dá)相對(duì)較弱；在雄性個(gè)體中，該基因在精巢、閉殼肌、肝臟和腎中表達(dá)較強(qiáng)，在外套膜和鰓中表達(dá)相對(duì)較弱。

圖6 FTZ-F1的mRNA在雌性櫛孔扇貝組織中的半定量表達(dá)Fig.6 Semi-quantitative expression of FTZ-F1 mRNA in the tissues of female Chlamys farreri

圖7 FTZ-F1的mRNA在雄性櫛孔扇貝組織中的半定量表達(dá)Fig 7 Semi-quantitative expression of FTZ-F1 mRNA in the tissues of male Chlamys farreri

2.5 FTZ-F1基因性腺周期qRT-PCR結(jié)果

如圖8所示，F(xiàn)TZ-F1基因在卵巢的整個(gè)性腺發(fā)育時(shí)期表達(dá)量并沒有顯著變化，維持在一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的水平；而在精巢的性腺發(fā)育時(shí)期，F(xiàn)TZF1基因在增殖期和生長(zhǎng)期的表達(dá)量沒有顯著差異（P＞0.05），但成熟期的表達(dá)量顯著增高（P＜0.05），不僅明顯高于其他時(shí)期的精巢，也高于整個(gè)性腺發(fā)育時(shí)期的卵巢。

圖8 FTZ-F1基因在櫛孔扇貝不同性腺發(fā)育周期中的定量表達(dá)Fig.8 Expression of FTZ-F1 mRNA detected by qRT-PCR in Chlamys farreri gonads during reproductive cycle

3 討論

系統(tǒng)進(jìn)化分析結(jié)果表明，櫛孔扇貝FTZ-F1蛋白先與紫貽貝的NR5A2聚類，再與太平洋牡蠣的SF-1蛋白及葡萄牙牡蠣的FTZ-F1蛋白聚類，之后與虎斑烏賊的NR5A2聚類。在物種分類中，櫛孔扇貝和紫貽貝、牡蠣都屬于雙殼綱，而與虎斑烏賊同屬于軟體動(dòng)物門，這一結(jié)果與其分類地位吻合。但進(jìn)化樹中幾種軟體動(dòng)物的FTZF1基因亞家族歸類并不統(tǒng)一，紫貽貝NR5A2（其基因組序列號(hào)為：PRJEB24883）、太平洋牡蠣SF-1（其基因組序列號(hào)為：NC＿047565.1）、虎斑烏賊的NR5A2（其基因組序列號(hào)為：PRJEB33343）均是通過基因組測(cè)序獲得，對(duì)應(yīng)的基因從功能和表達(dá)上究竟接近于SF1還是NR5A2尚無報(bào)道，葡萄牙牡蠣FTZ-F1也僅見基因序列，無相關(guān)深入研究，無法結(jié)合功能及表達(dá)特征進(jìn)行準(zhǔn)確歸類。

較之于高等哺乳動(dòng)物而言，低等動(dòng)物FTZF1基因的歸類可能更具有多樣性，斜帶石斑魚（Epinephelus coioides）FTZ-F1基因的研究發(fā)現(xiàn)，其同時(shí)具有NR5A2亞族和SF-1亞族的組織表達(dá)特征，但氨基酸比對(duì)結(jié)果卻不能歸類于兩個(gè)亞族中的任何一個(gè)［20］，郭變［10］對(duì)兩種不同泥鰍FTZF1基因的研究發(fā)現(xiàn)，其序列分析與NR5A2同源性較近，但表達(dá)上卻同時(shí)具有NR5A2和SF-1兩個(gè)亞族的特征，無法簡(jiǎn)單將其歸類為NR5A2或SF-1亞家族，印證了對(duì)于這類家族基因的亞家族歸類不能僅簡(jiǎn)單地通過序列分析進(jìn)行，需要結(jié)合表達(dá)特征進(jìn)行。本研究認(rèn)同上述研究結(jié)論，對(duì)櫛孔扇貝中該基因的命名結(jié)合序列分析及表達(dá)特征發(fā)現(xiàn)，不能將其簡(jiǎn)單地歸為SF-1或NR5A2，而應(yīng)統(tǒng)稱為FTZ-F1基因。

分析櫛孔扇貝FTZ-F1基因序列，發(fā)現(xiàn)其長(zhǎng)1 668 bp，含DBD和LBD保守區(qū)（LBD保守區(qū)內(nèi)存在激活功能域AF-2，主要作用為維持LBD的激活狀態(tài)）。這些保守區(qū)是典型的核受體功能結(jié)構(gòu)域，與脊椎動(dòng)物中該基因的保守結(jié)構(gòu)域是一致的［21］，其中DBD保守區(qū)是整個(gè)蛋白結(jié)構(gòu)中保守性最強(qiáng)的，具有調(diào)節(jié)核受體與激素應(yīng)答元件之間相互作用的功能；而LBD保守區(qū)是一個(gè)參與配體結(jié)合、介導(dǎo)二聚化作用、結(jié)合熱擊蛋白、核定位以及反式激活的多功能結(jié)構(gòu)域［8，22］。

FTZ-F1中，NR5A2最初從小鼠肝臟中被鑒定出來，稱為肝受體類似物［10］，在哺乳動(dòng)物成體中主要在肝臟、腸道及卵巢等組織中表達(dá)，特別是在卵巢中高表達(dá)［23］，NR5A2在低等生物中的表達(dá)研究較少，已有的文獻(xiàn)顯示，其在魚類、中華鱉等物種的各組織中廣泛表達(dá)［5，14］；SF-1最初來源于鼠腎上腺皮質(zhì)瘤Y1細(xì)胞cDNA文庫(kù)和牛腎上腺蛋白提取物［24－25］，小鼠中，主要在腎上腺和性腺表達(dá)［26］。SF-1可調(diào)節(jié)小鼠雄性表型發(fā)育所需的睪酮分泌量［27］，雌雄胚胎分化后呈性別二態(tài)性表達(dá)，在睪丸中表達(dá)相對(duì)較高［26］；低等生物如紅點(diǎn)鮭（Salvelinus alpinus）、斑馬魚中，SF-1在腦、下丘腦、頭腎、肝臟和精卵巢等組織中廣泛表達(dá)［28－29］；尼羅羅非魚中，該基因在XY個(gè)體中的表達(dá)高于XX［30］。本研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)TZ-F1在櫛孔扇貝的性腺和肝臟中都有表達(dá)，表明該基因組織表達(dá)既有SF-1亞族特征也有NR5A2亞族特征，該基因在櫛孔扇貝的精巢中表達(dá)較強(qiáng)，認(rèn)為其表達(dá)特征更偏向于SF-1亞族，除了性腺和肝臟組織，其他組織中也存在該基因的表達(dá)，推測(cè)其在櫛孔扇貝中的作用較為廣泛。本研究發(fā)現(xiàn)，雌雄個(gè)體的組織表達(dá)特征存在差異，F(xiàn)TZ-F1在雌性扇貝的閉殼肌、腎、鰓組織中表達(dá)量較高；在雄性的精巢、閉殼肌、肝臟和腎組織中表達(dá)較為明顯。趙若男［31］利用熒光定量PCR檢測(cè)了多疣壁虎（Gekko japonicus）SF-1在雌雄成體不同組織的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)在雌雄個(gè)體組織中表達(dá)也存在差異，且精巢中表達(dá)量顯著高于卵巢；雄性個(gè)體中，SF-1精巢中表達(dá)量最高，其次是心肌、骨骼肌和腦，肝臟和腎臟中的表達(dá)量較低，雌性個(gè)體中，SF-1在心肌中的表達(dá)量最高，其他各組織中有一定表達(dá)。黃河鯉（Cyprinus carpio）SF-1的表達(dá)研究也發(fā)現(xiàn)，該基因在雌雄個(gè)體的組織表達(dá)特征不同［32］。郭變對(duì)于兩種泥鰍中FTZ-F1的研究也發(fā)現(xiàn)，各組織中的表達(dá)有雌雄差異［10］。本研究中，F(xiàn)TZ-F1的組織表達(dá)也存在著雌雄差異，但目前為止造成雌雄組織差別表達(dá)的原因尚不明確，還有待于進(jìn)一步探究。

櫛孔扇貝的性腺發(fā)育周期主要包括增殖期、生長(zhǎng)期和成熟期（圖1），通過對(duì)性腺發(fā)育周期中FTZ-F1表達(dá)分析發(fā)現(xiàn)，該基因在成熟期精巢中的表達(dá)量最高，顯著高于其他時(shí)期的性腺，這種在雄性性腺中的表達(dá)特征偏向于SF-1亞族。對(duì)雄性金魚（Carassius auratus）中SF-1的表達(dá)研究發(fā)現(xiàn)［33］，該基因在成熟雄性金魚睪丸中的表達(dá)水平高于未成熟金魚的。有研究者通過共轉(zhuǎn)染方法研究發(fā)現(xiàn)，人FTZ-F1中的SF-1亞族能與佛波酯協(xié)同激活3β-HSD的表達(dá)，進(jìn)而影響睪酮合成［34］，提示SF-1與睪丸的內(nèi)分泌功能間接相關(guān)［27］，可能在睪丸發(fā)育過程中發(fā)揮作用［35］。祝輝等［27］利用反義轉(zhuǎn)染的方法，體外抑制了SF-1蛋白在小鼠睪丸支持細(xì)胞中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)睪酮合成關(guān)鍵酶P450膽固醇側(cè)鏈裂解酶（P450scc）的mRNA水平及睪酮的分泌量顯著下降，認(rèn)為SF-1可以調(diào)節(jié)睪酮的分泌。有研究顯示［17］，在櫛孔扇貝性腺發(fā)育周期中，睪酮的含量隨著配子發(fā)生而升高，在成熟期達(dá)到高峰。FTZ-F1在櫛孔扇貝成熟期精巢的較高表達(dá)，或許與成熟期精巢中睪酮含量顯著升高有一定的關(guān)系，推測(cè)FTZ-F1或通過參與睪酮生成影響了櫛孔扇貝的精巢發(fā)育，其具體的作用機(jī)制還需要深入研究。