馬瑞欣 周凡 李雪萍 王曉靜 張鵬燕

摘要：建立了液相色譜-串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜法（LC-MS/MS）同步檢測(cè)海參中的甲氰菊酯和撲草凈。樣品用乙腈提取，中性氧化鋁柱凈化，LC-MS/MS分析，基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)定量。結(jié)果表明，甲氰菊酯和撲草凈在0～50ng/mL范圍內(nèi)呈良好線(xiàn)性，相關(guān)系數(shù)均在0.999以上，方法檢出限為1.0μg/kg，定量限為5.0μg/kg。在5.0μg·kg-1、10μg·kg-1、50μg·kg-1添加水平下，甲氰菊酯平均回收率在71%～88%之間，撲草凈平均回收率在86%～92%之間，RSD均小于10%。該方法操作簡(jiǎn)單，分析速度快，可適用于海參中的甲氰菊酯和撲草凈同時(shí)測(cè)定。

關(guān)鍵詞：液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）;海參;甲氰菊酯;撲草凈

甲氰菊酯別名滅掃利，是一種廣譜擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)殺螨殺蟲(chóng)劑，中等毒性，廣泛用于棉花、水果、蔬菜和茶葉等多種經(jīng)濟(jì)作物;撲草凈主要作用于大豆、花生、棉花、水稻、甘蔗等作物，防除禾本科雜草和闊葉雜草，中等毒性。兩種農(nóng)藥均不得在水產(chǎn)養(yǎng)殖中使用。海參池塘養(yǎng)殖過(guò)程中易受到病蟲(chóng)和大型藻類(lèi)的危害[1-2]，有些養(yǎng)殖戶(hù)非法使用甲氰菊酯和撲草凈殺蟲(chóng)滅藻。目前食品中的甲氰菊酯和撲草凈檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)為氣相色譜-質(zhì)譜法[3-5]，氣相色譜-質(zhì)譜法前處理繁瑣，分析時(shí)間長(zhǎng)，且單四極桿受試劑空白干擾大，對(duì)低濃度的樣品定性定量造成困擾。

本方法建立了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法分析海參中的甲氰菊酯和撲草凈，前處理簡(jiǎn)單，分析速度快，抗干擾能力強(qiáng)，可以對(duì)兩種農(nóng)藥同時(shí)進(jìn)行定性和定量，極大提高了檢測(cè)速度，減少了檢測(cè)差錯(cuò)率。

1實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器、試劑與材料

LC-20AD液相色譜儀（日本島津）、QTRAP4500三重四極桿質(zhì)譜儀（美國(guó)ABSCIEX）、百分之一電子天平（賽多利斯）、平行蒸發(fā)儀（瑞士BUQI）、TDZ5-WS離心機(jī)（湖南湘儀）、MS3渦旋混合器（IKA）、JYS-A8000絞肉機(jī)（九陽(yáng)）。

甲氰菊酯：1000μg/mL（正己烷）;撲草凈：1000μg/mL（丙酮），均為北京北方偉業(yè)計(jì)量技術(shù)研究院生產(chǎn)。

乙腈和甲醇（HPLCGrade，Merck）、中性氧化鋁柱：1000mg/6mL（DIKMA）、甲酸（HPLCGrade，DIKMA）、0.2μm濾膜（PALL），實(shí)驗(yàn)所用水為超純水。

1.2試樣制備

海參去內(nèi)臟后切成小塊后混勻，絞肉機(jī)絞碎，裝入潔凈容器中，密封，-20℃保存。

1.3樣品前處理

稱(chēng)取5.00g樣品（精確到0.01g）于50mL離心管中，加入10mL乙腈，3000r/min渦旋混勻2min，4000r/min離心5min，上清液移入25mL比色管中;殘?jiān)性偌尤?0mL乙腈，3000r/min渦旋混勻2min，超聲5min，4000r/min離心5min，上清液合并至25mL比色管中，乙腈定容至25.0mL，混勻備用。

中性氧化鋁柱5mL乙腈活化后，準(zhǔn)確移取5.00mL提取液至中性氧化鋁柱上，流出液接入蒸發(fā)管中，5mL乙腈洗滌中性氧化鋁柱，收集全部流出液。45℃蒸發(fā)至干。準(zhǔn)確加入2.00mL乙腈+水（1+1）洗滌蒸發(fā)管內(nèi)壁，經(jīng)0.2μm濾膜過(guò)濾后供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析。

1.4液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件

液相色譜條件：色譜柱AccucoreTMaQ（100mm×2.1mm，2.6μm），柱溫40℃，流速0.5mL/min，進(jìn)樣量5μL，流動(dòng)相A為0.005mol/L乙酸銨溶液（含0.3%甲酸），B為甲醇;梯度洗脫程序：0～1min，10%B;1～3min，10%B～90%B;3～5min，90%B;5～5.1min，90%B～10%B;5.1～7min，10%B。

質(zhì)譜條件：電噴霧離子源（ESI），多反應(yīng)掃描（MRM）正離子模式，噴霧電壓5500V，氣簾氣30PSi，碰撞氣Medium;溫度550℃;霧化氣：55PSi;輔助加熱氣：55PSi。質(zhì)譜條件及參數(shù)見(jiàn)表1。

1.5標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)配制

取甲氰菊酯和撲草凈的標(biāo)準(zhǔn)溶液各100μL于同一進(jìn)樣小瓶中，氮?dú)獯蹈扇軇┖?，?zhǔn)確加入1mL乙腈，混勻，為100μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，用空白基質(zhì)逐級(jí)稀釋成0.1，0.5，1.0，2.0，5.0，10，25，50ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列。

2結(jié)果與討論

2.1質(zhì)譜條件的確定

分別取1μg/mL的甲氰菊酯和撲草凈溶液通過(guò)蠕動(dòng)泵注入質(zhì)譜中，尋找母離子、子離子和碰撞能，并優(yōu)化去簇電壓和碰撞池出口電壓。甲氰菊酯的一級(jí)質(zhì)譜圖顯示其加NH+4離子m/z367.1信號(hào)比其本身母離子m/z350信號(hào)強(qiáng)，并由實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了證實(shí)。因此本文選用m/z367.1作為甲氰菊酯的母離子進(jìn)行分析。

2.2基質(zhì)效應(yīng)

以基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)與溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的斜率比值來(lái)評(píng)定基質(zhì)效應(yīng)，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)見(jiàn)表2;甲氰菊酯的基質(zhì)效應(yīng)為59.6%，撲草凈的基質(zhì)效應(yīng)為74.5%，二者均表現(xiàn)為基質(zhì)抑制，其中甲氰菊酯基質(zhì)抑制更明顯。因此選用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)進(jìn)行定量。

2.3線(xiàn)性范圍

以濃度為橫坐標(biāo)，定量離子峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，甲氰菊酯和撲草凈基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)在0～50ng/mL范圍內(nèi)均呈現(xiàn)良好線(xiàn)性關(guān)系，線(xiàn)性系數(shù)r>0.999。甲氰菊酯和撲草凈基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的多反應(yīng)掃描質(zhì)量色譜圖見(jiàn)圖1。

2.4回收率和精密度

通過(guò)空白樣品添加標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的方式進(jìn)行回收率和精密度測(cè)試，添加梯度為1.0、5.0、10、50μg·kg-1，回收率和精密度見(jiàn)表3和表4。由表中數(shù)據(jù)可知，在5.0～50μg·kg-1添加范圍內(nèi)，甲氰菊酯平均回收率在71%～88%之間，RSD在5.1%～9.0%之間;撲草凈平均回收率在86.6%～92.4%之間，RSD在3.5%～6.9%之間。

2.5檢出限和定量限

通過(guò)分析表3和表4中的回收率和RSD值，甲氰菊酯和撲草凈的檢出限可定為1.0μg·kg-1，定量限可定為5.0μg·kg-1。

2.6實(shí)際樣品檢測(cè)

檢測(cè)實(shí)際樣品38份，檢測(cè)結(jié)果與氣相色譜-質(zhì)譜法一致。

3結(jié)論

本方法建立了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)檢測(cè)海參中的甲氰菊酯和撲草凈。前處理操作簡(jiǎn)單，可操作性強(qiáng)，分析速度快，準(zhǔn)確度和精密度滿(mǎn)足檢測(cè)方法學(xué)的要求，可作為海參中甲氰菊酯和撲草凈的定性、定量檢測(cè)方法。

參考文獻(xiàn)：

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（收稿日期：2021-05-07）