喬雙梅

青海省大通縣景陽(yáng)鎮(zhèn)崗沖畜牧獸醫(yī)站，青海大通810105

羊乳房炎是一種多發(fā)性疾病，主要表現(xiàn)為患病母羊乳房潮紅、發(fā)熱、腫硬和疼痛，嚴(yán)重影響母羊的泌乳性能。臨床上，最常見(jiàn)致病原因是多種病原菌侵入母羊乳房?jī)?nèi)部引起乳房炎，而在羊乳房炎病原菌總數(shù)中，鏈球菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌這3種病原菌所占比例最高。本試驗(yàn)對(duì)1 株羊乳房炎源大腸桿菌進(jìn)行分離鑒定，同時(shí)采用紙片法對(duì)該菌株進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)，以期為該地區(qū)羊臨床型乳房炎的預(yù)防和治療提供有益參考和依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

1）病料來(lái)源。采自青海省大通縣景陽(yáng)鎮(zhèn)某羊場(chǎng)的臨床型乳房炎患羊乳樣。采集時(shí)先消毒乳頭，將前5～10 mL 羊乳棄掉后無(wú)菌操作取乳樣。

2）主要試劑、儀器設(shè)備和試驗(yàn)動(dòng)物。鮮血瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、伊紅美蘭、細(xì)菌微量生化反應(yīng)管、革蘭氏染液；12 種抗菌藥物紙片；恒溫培養(yǎng)箱、光學(xué)顯微鏡、游標(biāo)卡尺；SPF 小白鼠6 只，雌雄各3 只，18～20 g/只。

1.2 試驗(yàn)方法

1）菌株的分離培養(yǎng)。將采集的乳樣接種在鮮血瓊脂培養(yǎng)基（50 mL/L）上，37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h 后察看細(xì)菌生長(zhǎng)情況，將菌落接種于麥康凱培養(yǎng)基上繼續(xù)純化培養(yǎng)，選擇典型單菌落涂片、革蘭氏染色和鏡檢，觀(guān)察菌體形態(tài)、染色特性，再將單菌落接種在伊紅美蘭培養(yǎng)基培養(yǎng)和鑒定，同時(shí)接種到鮮血瓊脂平板，察看其溶血現(xiàn)象。

2）生化鑒定。采用細(xì)菌微量生化反應(yīng)管并參照《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)》，實(shí)施生化鑒定和生化培養(yǎng)，將疑似大腸桿菌的菌株接種到各細(xì)菌微量生化反應(yīng)管中，在37 ℃條件下培養(yǎng)48 h 后觀(guān)察試驗(yàn)結(jié)果。

3）小鼠致病性試驗(yàn)。6 只小白鼠分為試驗(yàn)組和對(duì)照組，每組3 只，將分離純化并鑒定的大腸桿菌純培養(yǎng)物接種到營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)24 h 后，試驗(yàn)組、對(duì)照組小白鼠分別注射菌懸液（0.5 mL/只）和生理鹽水，注射后的兩組小白鼠隔離飼養(yǎng)，并觀(guān)察其存活情況，及時(shí)解剖死亡小白鼠，觀(guān)察剖檢病理變化，無(wú)菌采集死亡小白鼠脾和肝等組織進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定。

4）耐藥性試驗(yàn)。通過(guò)K-B 紙片擴(kuò)散法對(duì)已鑒定過(guò)的菌株進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)，試驗(yàn)方法參照《獸醫(yī)微生物學(xué)》[1]，參考美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（NCCLS）推薦的紙片擴(kuò)散標(biāo)準(zhǔn)，用游標(biāo)卡尺測(cè)量藥敏紙片的抑菌圈直徑，并根據(jù)抑菌圈的大小判定其對(duì)抗菌藥的耐受程度。

2 結(jié)果與分析

2.1 分離菌株形態(tài)特征及染色特性

分離菌株在麥康凱培養(yǎng)基和伊紅美蘭培養(yǎng)基上分別形成粉紅色和墨綠色（帶有金屬光澤）菌落，菌落均隆起、光滑呈圓形；分離菌株不溶血；對(duì)分離菌株染色鏡檢可見(jiàn)兩端鈍圓的革蘭氏陰性、紅色短桿菌，無(wú)芽孢，疑似大腸桿菌的菌株。

2.2 分離菌株的生化特性

分離菌株的生化鑒定結(jié)果見(jiàn)表1。分離菌株發(fā)酵麥芽糖、葡萄糖、甘露醇和乳糖，能產(chǎn)酸又產(chǎn)氣（“⊕”表示產(chǎn)酸產(chǎn)氣）；吲哚試驗(yàn)、MR 試驗(yàn)為陽(yáng)性（“+”表示陽(yáng)性反應(yīng)），枸櫞酸鹽試驗(yàn)、V-P 試驗(yàn)為陰性（“-”表示陰性反應(yīng)），該試驗(yàn)結(jié)果與大腸桿菌的生化鑒定相符合，判定分離菌株為大腸桿菌。

表1 分離菌株的生化鑒定結(jié)果

2.3 小鼠致死試驗(yàn)結(jié)果

注射菌懸液的3 只試驗(yàn)組小鼠于24 h 內(nèi)全部死亡，注射生理鹽水的3 只對(duì)照組小鼠無(wú)死亡，剖檢死亡小鼠可見(jiàn)腸內(nèi)充盈水樣內(nèi)容物呈黃色，腸壁變薄，十二指腸膨脹呈半透明狀，內(nèi)臟器官無(wú)顯著病變；從死亡小鼠臟器中分離得到與接種菌株一致的大腸桿菌，可知本試驗(yàn)分離出的大腸桿菌致病性極強(qiáng)。

2.4 耐藥性試驗(yàn)結(jié)果

大腸桿菌對(duì)抗菌藥物耐藥性試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示，本次臨床型乳房炎患羊的乳樣中分離鑒定得到的該株大腸桿菌對(duì)頭孢唑林、新霉素、慶大霉素和卡那霉素高度敏感（“S”表示高度敏感），對(duì)諾氟沙星、頭孢氨芐、四環(huán)素中度敏感（“I”表示中度敏感），對(duì)阿莫西林、羅紅霉素、萬(wàn)古霉素、青霉素G、鏈霉素表現(xiàn)出耐藥性（“R”表示耐藥）。

表2 分離菌株藥敏試驗(yàn)結(jié)果

3 小 結(jié)

1）本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)青海省大通縣景陽(yáng)鎮(zhèn)某羊場(chǎng)的臨床型乳房炎患羊的乳樣進(jìn)行分離培養(yǎng)、生化鑒定得到1 株大腸桿菌，通過(guò)對(duì)分離鑒定的大腸桿菌進(jìn)行小鼠致病性試驗(yàn)，可知該株大腸桿菌致病性極強(qiáng)，并且大腸桿菌是導(dǎo)致當(dāng)?shù)匮蚺R床型乳房炎的優(yōu)勢(shì)病原菌。

2）對(duì)分離鑒定得到的大腸桿菌進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)，結(jié)果顯示大腸桿菌對(duì)多種常用抗生素產(chǎn)生耐藥性，這與當(dāng)?shù)啬撩耖L(zhǎng)期頻繁濫用、亂用以及大劑量使用抗菌藥密切相關(guān)，加大了羊乳房炎臨床治療難度，為此相關(guān)部門(mén)應(yīng)采取有效措施，加強(qiáng)抗菌藥物的規(guī)范使用和管理。

3）在養(yǎng)羊生產(chǎn)中，應(yīng)堅(jiān)持防重于治的原則，加強(qiáng)對(duì)牧民群眾科學(xué)養(yǎng)殖知識(shí)的普及和用藥指導(dǎo)，改善飼養(yǎng)條件，提高羊群免疫力，同時(shí)要定期檢測(cè)隱性乳房炎，做到早發(fā)現(xiàn)早治療，目前針對(duì)羊乳房炎可運(yùn)用中醫(yī)藥治療[2]，不僅成本低，方法多樣，而且能夠避免乳內(nèi)抗生素殘留，達(dá)到良好的治療效果。