孫盛,陳作國,俞赟霞,曲冬梅,余騰斐,李言郡,陳蘇

(杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司，杭州娃哈哈科技有限公司，浙江省食品生物工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,浙江 杭州,310018)

微生物產(chǎn)生的胞外多糖(extracellular polysaccharides,EPS)是其在生長代謝過程中分泌到細(xì)胞壁外的黏液多糖或夾膜多糖[1]。自然界中產(chǎn)生胞外多糖的微生物很多,傳統(tǒng)的發(fā)酵食品(如酸奶、泡菜、酸面團(tuán)等)中含有大量產(chǎn)胞外多糖的乳酸菌[2]。傳統(tǒng)發(fā)酵食品來源的微生物胞外多糖被公認(rèn)為是安全的,特別是乳酸菌產(chǎn)生的胞外多糖,可以直接作為發(fā)酵劑或添加物應(yīng)用于發(fā)酵食品中[3]。研究發(fā)現(xiàn),產(chǎn)胞外多糖的乳酸菌能夠改善乳制品的質(zhì)構(gòu)、黏度和風(fēng)味,使其發(fā)酵乳質(zhì)構(gòu)細(xì)膩黏稠、結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、口感潤滑[4]。乳酸菌胞外多糖還具有提高免疫力、降膽固醇、抗病毒、抗氧化、抗腫瘤等多種生理活性[5]。乳酸菌胞外多糖的免疫調(diào)節(jié)功能是研究最為廣泛的,也是被普遍認(rèn)同的,其作用機(jī)制主要是通過增強(qiáng)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)(如促進(jìn)T/B淋巴細(xì)胞增殖、激活NK細(xì)胞活性、增強(qiáng)單核細(xì)胞吞噬能力等)來加強(qiáng)機(jī)體的免疫防護(hù)作用,從而提高免疫力[6]。

乳酸菌被認(rèn)為是綠色安全的益生菌,因此產(chǎn)胞外多糖的乳酸菌可以直接應(yīng)用到發(fā)酵生產(chǎn)中[7]。同時(shí),乳酸菌胞外多糖還可作為益生元促進(jìn)腸道內(nèi)其他益生菌的生長,改善腸道微生態(tài)環(huán)境,促進(jìn)機(jī)體健康[8]。鼠李糖乳桿菌GG(LactobacillusrhamnosusGG,LGG)是研究最多的益生菌之一。研究發(fā)現(xiàn),LGG能夠在胃腸道內(nèi)存活并定植[9],具有產(chǎn)胞外多糖的特性[10],同時(shí)也可促進(jìn)有益菌在腸道定植,并激活腸道免疫反應(yīng),提高機(jī)體免疫力[11]。

本研究從傳統(tǒng)發(fā)酵食品中分離乳酸菌,以LGG菌株為對照,進(jìn)行產(chǎn)胞外多糖乳酸菌的篩選,并對高產(chǎn)胞外多糖乳酸菌特性進(jìn)行研究,同時(shí)探索了乳酸菌和其胞外多糖的免疫活性,及在發(fā)酵乳中的應(yīng)用。以期為開發(fā)具有一定生理活性的產(chǎn)胞外多糖的乳酸菌功能性發(fā)酵劑提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料與試劑

雄性SPF級昆明小鼠,浙江省中醫(yī)藥大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心。人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞HT-29,中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心。鼠李糖乳桿菌GG分離自市售產(chǎn)品康萃樂益生菌粉,杭州娃哈哈集團(tuán)菌種保藏中心。

MRS培養(yǎng)基,英國Oxoid生物試劑有限公司；細(xì)菌/細(xì)胞總DNA提取試劑盒,北京天根生化科技有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

DU800紫外分光光度計(jì),美國Beckman公司；Multiskan Sky酶標(biāo)儀,賽默飛世爾科技(中國)有限公司；OLYMPUS BX61光學(xué)顯微鏡,日本Olympus株式會社；DV2T黏度計(jì),美國BROOKFIELD公司；AFL-W15A乳品發(fā)酵監(jiān)控儀,法國AMS Alliance iCinac公司；905 Titrando電位滴定儀,瑞士Metrohm公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 菌株分離純化與鑒定

1.3.1.1 菌株分離純化

稱取1 mL(或1 g)樣品(采集西藏、新疆、貴州、青海和四川的泡菜、酸奶等)加入9 mL無菌生理鹽水中,充分混勻,10倍梯度稀釋,取適當(dāng)稀釋梯度稀釋液0.1 mL,涂布于固體MRS培養(yǎng)基上,于37 ℃厭氧培養(yǎng)48 h。根據(jù)菌落形態(tài)特征挑選典型單個(gè)菌落,劃線分離2～3次,獲得純菌株,編號,于杭州娃哈哈集團(tuán)菌種保藏中心保藏。

1.3.1.2 16S rDNA鑒定

用細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒提取菌株DNA,用引物27-F(5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′)和1 492-R(5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′)進(jìn)行16S rDNA片段擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物送蘇州金唯智生物科技有限公司測序,測序結(jié)果通過NCBI-BLAST數(shù)據(jù)庫比對[12]。根據(jù)菌株16S rRNA序列,通過MEGA5軟件,采用最大似然法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹。

1.3.2 產(chǎn)胞外多糖乳酸菌的篩選和胞外多糖的提取純化

1.3.2.1 胞外多糖乳酸菌的篩選

將分離純化得到的菌株,在固體MRS培養(yǎng)基上劃線,于30和37 ℃厭氧培養(yǎng)24 h。用無菌牙簽挑取單菌落,比較菌落拉絲的長度。

1.3.2.2 胞外多糖提取和純化

菌株種子液接種于MRS液體培養(yǎng)基中,在30和37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h,收集菌液。菌液煮沸10 min后,冷卻,7 000 r/min,4 ℃離心20 min收集上清液,加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80%的三氯乙酸溶液至質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%,4 ℃靜置過夜。7 000 r/min,4 ℃離心20 min收集上清液,加入2.5倍體積的體積分?jǐn)?shù)為95%冰乙醇4 ℃過夜,7 000 r/min,4 ℃離心20 min收集沉淀。沉淀用蒸餾水溶解,裝入透析袋(截留分子質(zhì)量14 kDa)中透析48 h,每8 h換一次蒸餾水,透析液冷凍干燥96 h[6,13]。LGG菌株為對照菌。

1.3.2.3 胞外多糖檢測

采用苯酚-硫酸法[14]測總糖含量,3,5-二硝基水楊酸(3,5-dinitrosalicylic acid,DNS)比色法測定還原糖含量,用總糖含量減去還原糖含量,差值即為胞外多糖含量。

1.3.3 菌株生物學(xué)特性研究

1.3.3.1 生長和產(chǎn)酸曲線

菌株種子液接種于MRS液體培養(yǎng)基中,在37 ℃下培養(yǎng)24 h,每隔2 h取樣1次,測定在600 nm波長的光密度(OD)值和pH值,繪制生長曲線和產(chǎn)酸曲線。

1.3.3.2 耐受性實(shí)驗(yàn)

菌株活化后,取對數(shù)生長末期菌液,4 000 r/min離心10 min,棄上清液,獲得菌泥。分別進(jìn)行如下操作：①加入等體積pH 2.5的MRS培養(yǎng)基,充分混勻,37 ℃培養(yǎng)4 h,用平板計(jì)數(shù)法測定0、1、2和4 h后活菌數(shù)。②加入等體積質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.3%膽鹽的MRS培養(yǎng)基,充分混勻,37 ℃培養(yǎng)8 h,用平板計(jì)數(shù)法測定0、4和8 h后活菌數(shù)[15]。LGG菌株為對照菌。按公式(1)計(jì)算菌株存活率：

(1)

式中：S為菌株存活率,%；N1為菌株培養(yǎng)后活菌數(shù)對數(shù)值,CFU/mL；N0為菌株培養(yǎng)0 h活菌數(shù)對數(shù)值,CFU/mL。

1.3.3.3 菌株的黏附特性

建立HT-29細(xì)胞培養(yǎng)體系,以1×106細(xì)胞/孔的密度接種于已放置細(xì)胞爬片的12孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,37 ℃ 5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2 d。菌株活化后,取對數(shù)生長末期菌液,4 000 r/min離心10 min,棄上清液,獲得菌泥,重懸于含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%胎牛血清的DMEM完全培養(yǎng)基中,取2×108CFU/mL的菌液1 mL接種于上述12孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,37 ℃ 5% CO2培養(yǎng)箱中孵育2 h。孵育結(jié)束后,吸去培養(yǎng)液,PBS溶液洗滌2次,甲醇固定8 min。取出細(xì)胞爬片靜置20 min,經(jīng)革蘭氏染色后,用中性樹脂封片[16]。于光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察,每個(gè)片子隨機(jī)選取10個(gè)視野計(jì)數(shù)。LGG菌株為對照菌。

1.3.4 菌株及其胞外多糖免疫活性

1.3.4.1 菌株免疫活性

昆明小鼠飼養(yǎng)溫度為(21±2)℃,濕度為 40%～70%,12 h光照交替,自由攝入小鼠維持飼料和飲水。昆明小鼠脫頸椎處死,無菌取小鼠脾臟,經(jīng)200目金屬篩網(wǎng)過濾后,加入ACK細(xì)胞裂解液(5倍于細(xì)胞體積)裂解5 min,加入無菌Hank’s液(9倍體積于裂解液)終止裂解,1 000 r/min,4 ℃離心5 min。沉淀重懸于5 mL 含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%胎牛血清的RPMI-1 640培養(yǎng)基[17-18]。用臺盼藍(lán)染色,血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),調(diào)整細(xì)胞濃度為5×106cells/mL。菌株活化后,菌液濃度調(diào)整至2×108CFU/mL。

將細(xì)胞懸液加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板,分為調(diào)零組、空白對照組、誘導(dǎo)劑組(10 μg/mL Con A或LPS)和菌處理組(10 μg/mL Con A或LPS+菌懸液),37 ℃ 5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h。培養(yǎng)結(jié)束后,每孔加入20 μL 2.5 g/L MTT溶液,37 ℃顯色4 h后,加入100 μL DMSO,用酶標(biāo)儀于490 nm下測定吸光值[19]。LGG菌株為對照菌。

1.3.4.2 菌株胞外多糖免疫活性

將昆明小鼠脾淋巴細(xì)胞細(xì)胞懸液(5×106cells/mL)加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板,分為調(diào)零組、空白對照組、誘導(dǎo)劑組(10 μg/mL Con A或LPS)和胞外多糖處理組(10 μg/mL Con A或LPS+不同質(zhì)量濃度胞外多糖,質(zhì)量濃度為0.001、0.005、0.01、0.025、0.050和0.100 g/L),37 ℃ 5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h。培養(yǎng)結(jié)束后,進(jìn)行MTT實(shí)驗(yàn)。

1.3.5 發(fā)酵乳中的應(yīng)用

稱取脫脂乳100 g,45～50 ℃的純水900 g,50 ℃溫水溶解,剪切30 min,50 ℃水化30 min,均質(zhì),95 ℃殺菌10 min,降溫備用。菌株以1×106CFU/mL接種于上述脫脂乳中,37 ℃發(fā)酵12 h,4 ℃后熟8～12 h。觀察凝乳狀態(tài),用打蛋器破乳后,檢測其拉絲長度、產(chǎn)酸曲線、黏度、酸度,并對其發(fā)酵風(fēng)味進(jìn)行評估。

2 統(tǒng)計(jì)分析

每個(gè)實(shí)驗(yàn)設(shè)置3次重復(fù),數(shù)據(jù)分析用SPSS 17.0軟件,作圖用Graph Pad Prism 6.01版本軟件,顯著性分析用Duncan’s多重比較檢驗(yàn)法進(jìn)行,測定指標(biāo)均表示為“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”,顯著水平設(shè)置為0.05和0.01。

3 結(jié)果與分析

3.1 產(chǎn)胞外多糖菌株篩選與胞外多糖含量測定

36個(gè)樣品共計(jì)分離得到224株乳酸菌。經(jīng)菌落拉絲初篩,獲得4株有明顯單菌落拉絲的菌株,編號為WHH483、WHH589、WHH647和WHH997。其中WHH589拉絲長度最長,依次是WHH483、WHH647和WHH997。提取胞外多糖后,產(chǎn)量最高的菌株為WHH589(圖1),達(dá)0.58 g/L,顯著高于對照菌LGG和其他3株乳酸菌,胞外多糖產(chǎn)量是LGG(0.28 g/L)的2.07倍。

圖1 胞外多糖產(chǎn)量

3.2 WHH589菌株鑒定與保藏

WHH589分離自四川泡菜樣品,WHH589的16S rRNA基因序列測序結(jié)果于NCBI的GenBank數(shù)據(jù)庫進(jìn)行同源性比對分析,并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹。結(jié)果顯示W(wǎng)HH589為植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum),命名為植物乳桿菌WHH589(圖2)。植物乳桿菌WHH589于2018年5月25日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物菌種保藏中心保藏,微生物保藏編號為CGMCC No.15811。

圖2 植物乳桿菌WHH589 16S rRNA序列系統(tǒng)發(fā)育樹

3.3 植物乳桿菌WHH589基礎(chǔ)特性

3.3.1 植物乳桿菌WHH589生長和產(chǎn)酸曲線

生長曲線和產(chǎn)酸速率是反應(yīng)乳酸菌活力的重要特征。由圖3可知,植物乳桿菌WHH589顯示出較好的生長和產(chǎn)酸能力。植物乳桿菌WHH589在經(jīng)過0～2 h的遲緩期后,從2 h開始快速生長,進(jìn)入對數(shù)生長期,14 h結(jié)束對數(shù)期后進(jìn)入穩(wěn)定期；植物乳桿菌WHH589在接種后10 h產(chǎn)酸趨于平穩(wěn),pH達(dá)3.80～4.00。

a-生長曲線；b-產(chǎn)酸曲線

3.3.2 植物乳桿菌WHH589耐受性

胃腸道環(huán)境極其復(fù)雜和嚴(yán)苛,乳酸菌能否順利通過胃腸道,并保持活性,對發(fā)揮其益生功能至關(guān)重要。由表1可知,植物乳桿菌WHH589具有良好的耐酸和耐膽鹽的特性。在酸環(huán)境下孵育4 h后,存活率高達(dá)97.77%,達(dá)到5.91×108CFU/mL,優(yōu)于對照菌LGG,其存活率僅為92.22%。在膽鹽環(huán)境下孵育8 h后,存活率高達(dá)94.81%,雖然低于對照菌LGG,但也達(dá)到4.71×107CFU/mL,表現(xiàn)出較好的膽鹽耐受性。

表1 植物乳桿菌WHH589的耐受性

3.3.3 植物乳桿菌WHH589黏附性

乳酸菌黏附性是評價(jià)其能否在腸道定植,發(fā)揮益生功能的重要標(biāo)準(zhǔn)。由圖4可知,植物乳桿菌WHH589具有良好的黏附特性。黏附率為(1.96±0.15)菌數(shù)/細(xì)胞,與對照菌LGG相當(dāng),LGG黏附率為(1.75±0.30)菌數(shù)/細(xì)胞。

圖4 植物乳桿菌WHH589的黏附性

3.4 植物乳桿菌WHH589及其胞外多糖免疫活性

3.4.1 植物乳桿菌WHH589免疫活性

由圖5可知,植物乳桿菌WHH589能夠顯著促進(jìn)脾臟中T、B淋巴細(xì)胞的增殖,具有免疫調(diào)節(jié)活性,且優(yōu)于LGG菌株。在沒有誘導(dǎo)劑的條件下,促脾淋巴細(xì)胞增殖提高79.79%,與LGG相當(dāng)；在LPS誘導(dǎo)的條件下,促脾淋巴細(xì)胞增殖提高110.36%,是LGG的1.20倍；在Con A誘導(dǎo)的條件下,促脾淋巴細(xì)胞增殖提高127.55%,是LGG的1.13倍。

圖5 植物乳桿菌WHH589的促脾淋巴細(xì)胞增殖

3.4.2 植物乳桿菌WHH589胞外多糖免疫活性

由表2可知,植物乳桿菌WHH589分泌的胞外多糖能夠顯著促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞增殖。在沒有誘導(dǎo)劑的條件下可提高93.27%～164.42%；在LPS誘導(dǎo)的條件下可提高80.15%～125.95%；在Con A誘導(dǎo)的條件下可提高81.58%～149.12%。說明植物乳桿菌WHH589分泌的胞外多糖不同濃度作用效果不同,但都能夠顯著促進(jìn)脾臟中T、B淋巴細(xì)胞的增殖,具有免疫調(diào)節(jié)活性,質(zhì)量濃度在1～100 μg/mL都有顯著效果,且10～25 μg/mL效果最佳。

表2 植物乳桿菌WHH589的胞外多糖促脾淋巴細(xì)胞增殖結(jié)果

3.5 植物乳桿菌WHH589在發(fā)酵乳中的應(yīng)用

由表3和圖6可知,植物乳桿菌WHH589發(fā)酵乳凝乳狀態(tài)緊實(shí),表面光滑,無乳清析出,破乳后絲滑黏稠,拉絲長度(25.57±0.57)cm,活菌數(shù)達(dá)4.97×108CFU/g,感官和風(fēng)味良好,奶香明顯,口感細(xì)膩絲滑。植物乳桿菌WHH589可以作為發(fā)酵劑應(yīng)用于發(fā)酵乳制品中。

表3 發(fā)酵乳特性

圖6 發(fā)酵產(chǎn)酸速率曲線

4 討論

胞外多糖產(chǎn)量除受到菌株本身遺傳特性的影響外,培養(yǎng)基組成、培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)溫度、pH等也是影響胞外多糖產(chǎn)量的重要因素[20]。同時(shí),胞外多糖的提取、純化方法也很關(guān)鍵,如提取的方法(甲醇、乙醇、異丙醇和丙酮)、除蛋白的方法(Sevage法、三氟三氯乙烷法和三氯乙酸法)、除去雜質(zhì)的方法(透析法、離子交換樹脂法和凝膠過濾法),對獲得高純度的胞外多糖十分重要[21]。研究發(fā)現(xiàn),LGG是1株產(chǎn)胞外多糖的乳酸菌,不同文獻(xiàn)報(bào)道其胞外多糖產(chǎn)量不同,CLAS等研究發(fā)現(xiàn)LGG菌株在牛奶中培養(yǎng)胞外多糖產(chǎn)量為0.08 g/L[11],張娟等[22]研究了不同培養(yǎng)條件和提取方法對LGG菌株胞外多糖產(chǎn)量的影響,發(fā)現(xiàn)其產(chǎn)量在0.025～0.296 g/L,這與菌株的培養(yǎng)條件、胞外多糖的提取方法有關(guān)。本研究以LGG菌株為對照菌,在同一條件下,與篩選到4株產(chǎn)胞外多糖的乳酸菌進(jìn)行比較,經(jīng)過除蛋白、醇沉和透析獲得胞外多糖,發(fā)現(xiàn)其中一株植物乳桿菌WHH589胞外多糖產(chǎn)量顯著高于LGG菌株(P<0.01),達(dá)到0.58 g/L,LGG胞外多糖產(chǎn)量為0.28 g/L,其他3株乳酸菌胞外多糖產(chǎn)量與LGG相當(dāng),說明植物乳桿菌WHH589是一株高產(chǎn)胞外多糖的乳酸菌。

人胃內(nèi)的pH值空腹到餐后范圍在1～4.5變化,食物在胃內(nèi)停留在3 h左右；膽鹽濃度在0.03%～0.3%,但也會隨著飲食的變化而改變,食物在小腸內(nèi)停留在4 h左右[23]。乳酸菌能否在胃腸道低pH、高膽鹽濃度的環(huán)境下存活,并黏附于腸道上皮細(xì)胞,對其在腸道內(nèi)定植和功能發(fā)揮至關(guān)重要。本研究分析了植物乳桿菌WHH589菌株在pH 2.5和0.3%膽鹽條件下的存活情況,以及在HT-29細(xì)胞表面的黏附性,發(fā)現(xiàn)植物乳桿菌WHH589菌株在pH 2.5條件下可存活4 h以上,存活率高達(dá)97.77%；在0.3%膽鹽環(huán)境下可存活8 h以上,存活率高達(dá)94.81%；在HT-29細(xì)胞表面的黏附率為(1.96±0.15)菌數(shù)/細(xì)胞,表現(xiàn)出良好的耐受性和黏附特性。

脾臟是T/B淋巴細(xì)胞定居的主要場所,也是初次免疫應(yīng)答產(chǎn)生抗體的主要器官。T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞是兩類重要的免疫激活細(xì)胞,T淋巴細(xì)胞主要參與細(xì)胞免疫,而B淋巴細(xì)胞則是產(chǎn)生抗體。Con A作為T淋巴細(xì)胞的有絲分裂原,僅對T淋巴細(xì)胞的增殖起促進(jìn)作用,對B淋巴細(xì)胞不起作用；反之LPS僅能誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞增殖[6]。當(dāng)有病原體入侵時(shí),T、B淋巴細(xì)胞被激活,參與免疫應(yīng)答,清除病原體,保護(hù)機(jī)體健康。KIM等[24]研究發(fā)現(xiàn)LGG能夠促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞增值,具有免疫調(diào)節(jié)功能。胞外多糖具有免疫活性,一方面它能夠通過激活非特異性免疫中巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞活性,提高機(jī)體分泌免疫分子的能力；另一方面又能通過激活T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞活性,作用于特異性免疫系統(tǒng),增強(qiáng)機(jī)體免疫力[25]。本研究分析了植物乳桿菌WHH589菌株對小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖效果,以LGG菌株為陽性對照,發(fā)現(xiàn)菌濃度在1×107CFU/mL時(shí),植物乳桿菌WHH589能顯著促進(jìn)T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞增殖(P<0.01),與LGG相當(dāng)。同時(shí),植物乳桿菌WHH589胞外多糖質(zhì)量濃度在1～100 μg/mL時(shí),也能顯著促進(jìn)T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞增殖(P<0.01),提高機(jī)體免疫力。

乳酸菌胞外多糖可作為增稠劑、穩(wěn)定劑和保鮮劑等應(yīng)用于食品領(lǐng)域。產(chǎn)胞外多糖的乳酸菌作為發(fā)酵劑可以改善乳制品的質(zhì)地、穩(wěn)定性和口感,同時(shí)乳酸菌胞外多糖能夠解決發(fā)酵乳凝膠易破裂和易脫水收縮等問題,使得發(fā)酵乳結(jié)構(gòu)更加穩(wěn)定,延長保質(zhì)期[26]。本研究對植物乳桿菌WHH589在發(fā)酵乳中的應(yīng)用進(jìn)行探究,發(fā)現(xiàn)植物乳桿菌WHH589發(fā)酵乳質(zhì)構(gòu)黏稠,拉絲明顯,長度達(dá)25.57 cm,口感細(xì)膩絲滑,活菌數(shù)達(dá)4.97×108CFU/g,同時(shí)植物乳桿菌WHH589及其胞外多糖又具有免疫活性,可以作為功能性發(fā)酵劑用于發(fā)酵食品中,提高產(chǎn)品附加屬性。

5 結(jié)論

綜上所述,本研究從四川泡菜樣品中分離得到1株植物乳桿菌,命名為WHH589,微生物保藏編號為CGMCC No.15 811。研究發(fā)現(xiàn)植物乳桿菌WHH589具有良好的耐受性和黏附性,能夠產(chǎn)生大量胞外多糖,菌株及其胞外多糖能夠顯著促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞增值,且發(fā)酵特性優(yōu)良,可作為功能性發(fā)酵劑應(yīng)用于發(fā)酵乳中。