張敏，李陽春，雷蓉，呂湛

急性心肌梗死（AMI）是指各種原因?qū)е碌墓跔顒用}（冠脈）血管堵塞，引發(fā)局部心肌缺血、缺氧、壞死，導致心臟泵血功能急劇下降，嚴重威脅患者生命。隨著社會生活模式的轉(zhuǎn)變，AMI的發(fā)病率、死亡率逐年上升且呈年輕化趨勢，及早診治和預防是現(xiàn)階段臨床工作的重點[1]。目前，AMI評估采用肌鈣蛋白、肌酸激酶等心肌損傷標志物，但此類指標在胸痛發(fā)作數(shù)小時后才可被檢測，且特異性較差。近年來，基因組學發(fā)展迅速，越來越多微小RNA家族成員被用于心血管疾病的研究，其中微小RNA-133a（miR-133a）是學者們的重點關(guān)注對象，其在心肌細胞中特異性表達，可能參與了心力衰竭、心肌纖維化、心肌重塑及梗死心肌新生血管形成等病理過程[2]。已有學者證實miR-133a對心肌梗死早期診斷具有一定應(yīng)用價值[3]，但具體機制不清。本研究通過分析AMI患者血清miR-133a的表達及臨床意義，以期為AMI的診治及預防提供幫助。

1 對象與方法

1.1 研究對象選取2018年1月至2019年12月于川北醫(yī)學院附屬醫(yī)院隨診的AMI患者321例為研究對象（AMI組）。入組標準：發(fā)病至入院時間不超過6 h；AMI的診斷符合美國心臟病學院及心臟病學會頒布的AMI相關(guān)診斷標準[4]；臨床資料完整；自愿進入本研究。排除標準：既往心血管疾病或心血管疾病治療史；感染性疾??；惡性腫瘤；肝、腎等重要器官功能障礙；血液系統(tǒng)及免疫性疾病。另選取同期門診體檢的健康者100例為對照組（CON組）?；颊呔炇鹬橥鈺狙芯恳勋@我院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料收集患者一般資料，包括年齡、性別、吸煙、飲酒、高血壓、糖尿病、冠心病家族史、腦卒中、體質(zhì)指數(shù)（BMI）、血壓、左室射血分數(shù)（LVEF）等。

1.2.2 生化指標采集入組對象空腹靜脈血10ml，靜置5 min，經(jīng)3000轉(zhuǎn)/min離心15 min（離心半徑14 cm），置于-20℃冰箱中備用。使用SYSMEXBX-5000全自動生化檢測儀（日本，希森美公司）檢測生化指標：心肌肌鈣蛋白（cTnI）、肌酐（Scr）、腦鈉肽（BNP）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、空腹血糖（FBG）。

1.2.3 miR-133a檢測采集患者靜脈血10 ml，2 h內(nèi)分離血清，使用定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測血清miR-133a水平，步驟包括：總RNA提取-逆轉(zhuǎn)錄-PCR擴增。逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購于Takara公司（日本），引物由生工生物工程有限公司提供（上海），引物序列：上游（5'-CGCCGGTTACTGA GACACATTC-3'）、下游（5'-TGCAGATCGAAT ATTCCAGCATAC-3'）。miR-133a的PCR判讀：ΔCt=樣品Ct均值-內(nèi)參Ct均值，以2-ΔCt表示基因的相對表達量。

1.2.4 冠脈鈣化評分患者行冠脈造影后，使用Gensini評分系統(tǒng)[5,6]對冠脈病變狹窄程度進行定量評分：以最狹窄處為標準，狹窄直徑1%～25%記1分，26%～50%記2分，51%～75%記4分，76%～90%記8分，91%～99%記16分，完全閉塞記32分。病變血管權(quán)重：左主干為5，前降支：近段為2.5，中段為1.5；對角支：D1為1，D2為0.5；回旋支：近段為2.5，遠段及后降支均為1，后側(cè)支為0.5；右冠：近、中、遠段和后降支均為1。各病變血管積分為評分與權(quán)重之積，總積分為各病變血管積分之和，積分越高病變越重。

1.3 統(tǒng)計學方法本研究數(shù)據(jù)使用SPSS 23.0進行分析。計量資料符合正態(tài)分布使用均值±標準差表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗；計數(shù)資料使用例（構(gòu)成比）表示，組間差異使用χ2進行分析。使用Pearson相關(guān)分析miR-133a與AMI相關(guān)指標的相關(guān)性，應(yīng)用Logistic回歸分析AMI的危險因素，采用受試者工作特征曲線（ROC）檢測miR-133a對AMI的診斷效能。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清miR-133a及一般資料比較AMI組患者血清miR-133a、TC、BNP、cTnI、CKMB、Gensini評分、年齡、高血壓及冠心病比例明顯高于CON組，而LVEF明顯低于CON組（均P＜0.05）；兩組患者在性別、吸煙、飲酒、糖尿病、腦卒中、BMI、收縮壓、舒張壓、FBG、TG、LDL、HDL、Scr等方面比較，無明顯差異（P＜0.05），表1。

表1 兩組miR-133a水平及一般資料比較

2.2 血清miR-133a水平與AMI指標的相關(guān)性Pearson相關(guān)分析顯示AMI患者血清miR-133a水平與cTnI（r=0.673，P＜0.001）、CK-MB（r=0.768，P＜0.001）、Gensini評分（r=0.772，P＜0.001）均呈明顯正相關(guān)，與LVEF（r=-0.667，P＜0.001）呈明顯負相關(guān)，相關(guān)性趨勢圖見圖1。

圖1 血清miR-133a水平與AMI相關(guān)指標的相關(guān)性

2.3 AMI發(fā)病的危險因素分析Logistic回歸分析顯示miR-133a（OR=1.924）、年齡（OR=1.874）、高血壓（OR=3.696）、冠心病家族史（OR=2.758）及Gensini評分（OR=1.674）均為AMI發(fā)病的危險因素（P＜0.05），表2。

表2 AMI發(fā)病的危險因素分析

2.4 血清miR-133a對AMI的診斷價值分析miR-133a診斷AMI的ROC曲線下面積為0.872（95%CI：0.796～0.896，P＜0.001），約登指數(shù)、敏感度、特異度分別為0.722、88.16%和84.00%。ROC曲線見圖2。

圖2 血清miR-133a診斷AMI的ROC曲線

3 討論

AMI是常見的心血管急重癥之一，是冠心病的嚴重類型，臨床表現(xiàn)為急性胸痛、胸悶，甚至致死性心律失常、心力衰竭而導致猝死。AMI早期行缺血心肌再灌注，可明顯改善患者預后，這對AMI診斷的及時、準確性提出了更高的要求[7]。心肌細胞缺氧壞死后，CK-MB、cTnI、BNP等心肌損傷標志物釋放入血，與既往研究相符[8]，此類指標對AMI的早期診斷做出了較大貢獻，但在疾病早期其敏感度欠佳，峰值出現(xiàn)多在患者發(fā)病數(shù)小時后，對于時間就是生命的AMI患者來說極為不利[8]。

miRNA是一系列高度保守、長度在18～23個核苷酸間的非編碼核糖核酸，通過與目標mRNA中的特異性序列結(jié)合，對靶基因轉(zhuǎn)錄后的翻譯和修飾進行調(diào)控，可維持靶基因的穩(wěn)定性，在細胞分化、生長及程序性調(diào)亡等過程中起到重要作用[9]。不同狀態(tài)下的miRNA具有組織和細胞特異性，釋放入血后可保持穩(wěn)態(tài)，這為AMI早期診斷提供了新思路。miR-133a是一種具有橫紋肌組織表達特異性的miRNA，在心肌和骨骼肌中廣泛表達，參與了心臟發(fā)育、心律失常、心肌肥厚及心肌調(diào)亡等病理生理過程，研究發(fā)現(xiàn)miR-133a可能是調(diào)節(jié)心肌缺血應(yīng)激損傷后心臟適應(yīng)性的重要因子[10,11]。Gacoń等[12]研究發(fā)現(xiàn)，病變冠脈閉塞的心肌梗死患者血清miR-133a水平是病變冠脈未閉塞患者的7倍，但CTnI的表達無明顯差異，提示miR-133a可較好反應(yīng)患者的病情程度。唐冬娟等[13]研究顯示，AMI患者血清miR-133a水平顯著升高，與CK-MB、cTnI、Gensini評分呈正相關(guān)，且對AMI和30 d內(nèi)不良心血管事件的發(fā)生均有較好的診斷價值，說明miR-133a與冠脈病變程度及預后具有一定相關(guān)性。馮俊等[14]報道證實，丹參酮Ⅱ可激活MAPK ERK1/2通路上調(diào)miR-133a的表達，增強心肌細胞的抗低氧損害、較少低氧導致的心肌細胞調(diào)亡。Xu等[15]研究顯示，miR-133a在蛋白和基因水平抑制Caspase-9的表達，Caspase-9是一種蛋白質(zhì)切割酶，可造成細胞凋亡，增加miR-133a水平有利于細胞的生存。還有研究[16]顯示，TAGLN2是miR-133a的潛在目的基因之一，TAGLN是一種肌動蛋白結(jié)合蛋白，可與肌動蛋白纖維結(jié)合參與其聚合和降解，具有穩(wěn)定和調(diào)節(jié)細胞骨架、維持細胞正常運動等作用，上調(diào)miR-133a可能促進TAGLN2的分泌，間接保護心肌。上述研究均提示miR-133a的上調(diào)可能發(fā)揮增強心肌細胞抗損傷、抑制調(diào)亡等重要生理作用。

理想生物學標志物，不僅可準確判斷病情嚴重程度，且對疾病預測具有較高敏感性和特異性。本研究分析發(fā)現(xiàn)，AMI患者血清miR-133a與心肌損傷標志物、冠脈鈣化評分、心功能均具有較好的相關(guān)性，miR-133a可作為AMI的獨立危險預測因素。進一步分析發(fā)現(xiàn)其診斷AMI的敏感性、特異性及準確度較高，證實了miR-133a與AMI患者心肌損傷、病變嚴重程度具有較好的量化關(guān)系，可作為預防和早期干預AMI的標志物之一，與既往研究相符[12-15]。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)年齡、高血壓、冠心病家族史及Gensini評分均是AMI的危險因素，AMI的發(fā)生與個體差異、遺傳等因素相關(guān)，上述因素也是較為明確的AMI危險因素，臨床中對于此類患者應(yīng)及早制定相關(guān)措施，以減少不良心血管事件的發(fā)生。

綜上所述，AMI患者血清miR-133a的表達水平明顯升高，且對AMI的預測和診斷價值較高，可為AMI的早期診治提供新思路。