紀(jì)琳瑩 郭川 林潔敏

（汕頭市疾病預(yù)防控制中心 廣東汕頭 515041）

1 前言

臨床中借助實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)可以從橫斷面樣本當(dāng)中直接實(shí)現(xiàn)艾滋病病毒（HIV）的感染樣本，并實(shí)現(xiàn)對(duì)新發(fā)感染率的實(shí)驗(yàn)室估算，操作成本較低且快速、便捷，可以及時(shí)獲得檢測(cè)結(jié)果數(shù)據(jù)，相對(duì)于隊(duì)列研究與數(shù)學(xué)模型方式具備更加突出的應(yīng)用價(jià)值[1]。在各種實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法當(dāng)中，近些年親和力檢測(cè)方法具備比較突出的關(guān)注度，其原理主要是基于抗原親和力的情況對(duì)已分期感染、新近感染情況進(jìn)行判斷。因?yàn)橛H和力的高低屬于抗原本身的特性，所以這一種方式的影響因素并不多[2-3]。為了進(jìn)一步提高HIV-1新發(fā)感染的判斷能力，本文基于部分樣本探討檢測(cè)HIV-1新發(fā)感染的限制性抗原親和力方法的重復(fù)性與穩(wěn)定性評(píng)價(jià)。

2 資料與方法

2.1 一般資料

在2017年4月—2019年6月開(kāi)展研究，以我市213例HIV-1相關(guān)樣本進(jìn)行研究。

本次研究試劑盒使用美國(guó)SEDIA公司的LAg-Avidity限制性抗原親和力酶聯(lián)免疫試驗(yàn)試劑盒，親和力試劑盒通過(guò)冷藏與冷凍2種包裝構(gòu)成?？己吮P(pán)：（1）KH-LAg-25A，應(yīng)用于考核試劑盒的重復(fù)性、穩(wěn)定性以及批間差，由金豪制藥股份有限公司生產(chǎn)；（2）BOCA101。應(yīng)用考核試劑盒新近感染樣本的能力。樣本總共213份。其中吸光度≤1.0的樣本40份，吸光度＞1.0樣本173份。

重復(fù)性：主要是檢測(cè)精密度。實(shí)驗(yàn)室結(jié)果相關(guān)性、不同實(shí)驗(yàn)員結(jié)果相關(guān)性。

穩(wěn)定性：借助熱穩(wěn)定實(shí)驗(yàn)的方式將酶結(jié)合物與酶聯(lián)板放置在37℃環(huán)境下7 d，并和4℃儲(chǔ)存的酶結(jié)合物與酶聯(lián)板進(jìn)行對(duì)比，雙孔檢測(cè)KH-LAg-25A當(dāng)中樣本，OD值以均數(shù)（ODn值）進(jìn)行對(duì)比。

準(zhǔn)確度：基于初篩后確認(rèn)的實(shí)驗(yàn)方式，檢測(cè)BOCA101。

2.2 觀察指標(biāo)

統(tǒng)計(jì)限制性抗原親和力方法重復(fù)性、穩(wěn)定性、準(zhǔn)確度。

3 結(jié)果

所有樣本的標(biāo)化吸光度值與變異系數(shù)＜15%，實(shí)驗(yàn)員與實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)結(jié)果的相關(guān)系數(shù)在0.99以上，孔間精密度最小值為3.85%，不同批次試劑批間差結(jié)果中只有3份樣本CV值超過(guò)15%。37℃下放置7 d與4℃下儲(chǔ)存的酶結(jié)合物與酶聯(lián)板方面的ODn值差異不明顯，國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)盤(pán)評(píng)價(jià)結(jié)果和預(yù)期值相當(dāng)。試劑盒的質(zhì)控品和校準(zhǔn)品的重復(fù)性結(jié)果比對(duì)見(jiàn)表1、2。實(shí)驗(yàn)室結(jié)果與不同實(shí)驗(yàn)員結(jié)果見(jiàn)圖1。

表1 質(zhì)控品和校準(zhǔn)品的OD值檢驗(yàn)結(jié)果對(duì)比

表2 質(zhì)控品和校準(zhǔn)品的ODn值檢驗(yàn)結(jié)果對(duì)比

圖1 實(shí)驗(yàn)室結(jié)果與不同實(shí)驗(yàn)員結(jié)果對(duì)比

4 討論

限制性抗原親和力酶聯(lián)免疫試驗(yàn)屬于BED之后可能被廣泛應(yīng)用于HIV-1新發(fā)感染檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室方式，這一種方式本身的特征非常明顯，整體應(yīng)用效果較好?；谕茝V后的應(yīng)用情況，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員開(kāi)展針對(duì)性、系統(tǒng)化的培訓(xùn)教育[4]。另外，雖然限制性抗原親和力酶聯(lián)免疫試驗(yàn)具備較好的重復(fù)性，但是檢測(cè)原理本身決定了這一種方式對(duì)于反應(yīng)條件具備比較高的敏感性，同時(shí)孵育的時(shí)間、溫度的控制要求也比較高。和BED方式相比，對(duì)于實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的步驟要求相對(duì)較高，尤其是對(duì)于溫度與時(shí)間的精準(zhǔn)性要求較高，隨意在具體操作期間需要嚴(yán)格根據(jù)說(shuō)明書(shū)中的內(nèi)容進(jìn)行操作[5]。所以在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始之前，需要先做好約5次的預(yù)實(shí)驗(yàn)判斷方式，必須熟練掌握整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作的過(guò)程。在檢測(cè)開(kāi)始之前除了需要實(shí)行常規(guī)酶聯(lián)免疫試驗(yàn)所需要的設(shè)備配備，還需要配備定時(shí)器與孵育箱。在預(yù)實(shí)驗(yàn)期間做好儀器設(shè)備的調(diào)整，保障預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果中CV值在15%內(nèi)可以開(kāi)展大量樣本的檢測(cè)。另外，在試劑盒投入大批量生產(chǎn)之后，需要嚴(yán)格落實(shí)質(zhì)量控制措施，構(gòu)建血清學(xué)樣陽(yáng)樣本構(gòu)成的新發(fā)感染血清盤(pán)，針對(duì)試劑的靈敏度以及特異性進(jìn)行針對(duì)性的控制，從而確保群體監(jiān)測(cè)中方法的可行性。

國(guó)外研究顯示，LAg受疾病狀態(tài)的影響小，對(duì)艾滋病患者誤判率低，不同人群窗口期差異性不大，對(duì)既往感染的誤判率較BED低[6]。本次研究結(jié)果充分證明限制性抗原親和力酶聯(lián)免疫試驗(yàn)對(duì)于HIV-1新發(fā)感染患者具備較高的檢測(cè)效果，并且這一種方式具備理想的重復(fù)性，在技術(shù)培訓(xùn)之后實(shí)驗(yàn)人員可以準(zhǔn)確掌握試驗(yàn)檢測(cè)方式，在不同實(shí)驗(yàn)室當(dāng)中均可以得到可信的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，穩(wěn)定性好、準(zhǔn)確度高，可以作為HIV新發(fā)感染的檢測(cè)方式。

綜上所述，HIV-1新發(fā)感染限制性抗原親和力方法具備顯著的穩(wěn)定性、重復(fù)性以及準(zhǔn)確性，適合推廣普及。