游殷媛 李玉蘭 陳桂紅

1.深圳市寶安區(qū)中心醫(yī)院藥劑科，廣東深圳 518102；2.深圳市寶安區(qū)衛(wèi)生與健康局，廣東深圳 518101

復(fù)方地克軟膏的主要成分包括氯霉素、克霉唑和醋酸地塞米松三種藥物，將以上三種藥物均勻混合后再加入其他物質(zhì)，包括硬脂酸、十八醇、尼泊金、液體石蠟[1-2]，隨后將其加熱，另加入蠟、三乙醇胺、樟腦、薄荷醇和純凈水，最后制成軟膏。復(fù)方地克軟膏臨床使用相對較多，能發(fā)揮消炎、抗菌等作用，廣泛用于過敏性皮炎、接觸性皮炎等疾病中[3-4]。既往研究表明，復(fù)方地克軟膏藥物組成相對復(fù)雜，有效藥物多以氯霉素，克霉唑、醋酸地塞米松為主。醋酸地塞米松屬腎上腺皮質(zhì)激素類的藥物，克霉唑?qū)儆趶V譜抗真菌藥，氯霉素屬于酰胺醇類的抗菌藥物[5-6]。為了解復(fù)方地克軟膏中3組成分含量的情況，控制復(fù)方地克軟膏的質(zhì)量，保證藥物安全及有效性，具有重要意義[7-8]。但是高效液相色譜法同時測定復(fù)方地克軟膏中3組分的含量研究較少，因此本研究采用高效液相色譜法測定復(fù)方地克軟膏中3組分的含量，探討高效液相色譜法同時測定復(fù)方地克軟膏中3組分含量的情況，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器試劑

除氣裝置、自動進樣器、二極管陣列檢測器及四通泵均購自于美國安捷倫公司，Agilent 1100 HPLC系統(tǒng)，生產(chǎn)批號分別為20160085、20160072、20170164、20170732，同時，還包括分別由美國惠普公司提供和德國 Sartorius 公司提供的HP化學(xué)工作站和 CP225D 電子天平（量程：40、80、220 g，生產(chǎn)批號：20160572）。

1.2 試藥

復(fù)方地克軟膏由本院提供，批號為190301、194831；氯霉素API由安徽艾珂爾制藥有限公司提供，國藥準字：H34022991，規(guī)格：0.25 g，批次號：CH180101、CH180107；克霉唑原料藥由江蘇云陽集團藥業(yè)有限公司提供，國藥準字：H32020325，規(guī)格：0.25 g×100 s，批號：190107，195836；醋酸地塞米松API由西安瑞豐制藥有限公司提供，國藥準字：H20053752，規(guī)格：0.75 mg，批次編號 20170602、20184376；氯霉素對照品和克霉唑?qū)φ掌芳按姿岬厝姿蓞⒖计返呐尉幪柗謩e為130555-201704、100037-201407、100122-200805，均由中國食品藥品監(jiān)督管理局提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Thermo Hypersil BDS C18，數(shù)據(jù)設(shè)置為250 mm×4.6 mm，5 μm；流動相：甲醇（a）-0.05 mol/L，磷酸二氫鉀，其pH值為5.7，梯度洗脫時間：0～5 min時間內(nèi)采用40%甲醇；5～15 min時間內(nèi)采用40%→80%甲醇，15～19 min時間內(nèi)采用80%甲醇；19～20 min時間內(nèi)采用80%→40%甲醇；20～25 min時間內(nèi)采用40%甲醇。流速為1.0 ml/min，設(shè)定檢測波長235 nm、溫度35℃，設(shè)定進樣量10 μl。完成氯霉素峰、克霉唑峰及醋酸地塞米松峰的理論塔板數(shù)，均為＞10000且分離度＞15。

2.2 溶液制備

2.2.1 混合對照品溶液制備 準確稱取定量氯霉素、克霉唑、地塞米松乙酸酯，用甲醇溶解，并將其放入同一10 ml量瓶中，充分搖勻，制成每毫升溶液分別包含2.0、1.0和0.6 mg三種成分的混合液，濾膜孔徑25 μm，得混合對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液制備 準確稱量0.6 g樣品并將其放入25 ml量杯中，取20 ml甲醇，將其加入其中并塞緊，在50℃水浴中加熱2 min，使底物完全融化，冷卻，隨后用甲醇固定體積并充分混合均勻放入冰水浴中，時間為2 h，快速過濾且將留取連續(xù)濾液。并選用適量的空白基質(zhì)按照上訴方式進行制備空白基質(zhì)溶液，濾膜孔徑25 μm，得供試品溶液。

2.3 線性關(guān)系

分別精密稱取2.2項下氯霉素、克霉唑和醋酸地塞米松不同質(zhì)量溶度的系列混合對照品溶液，根據(jù)2.1項下色譜條件進樣，記錄峰面積。以待測成分色譜峰面積設(shè)定為縱坐標（y），測定藥物濃度為橫坐標（x），完成線性分析，見表1。

表1 待測成分線性范圍及回歸方程

2.4 穩(wěn)定性試驗

取2.2.2項下方法指標的供試品溶液，放置在0、2、4、6、8、18、24 h 時按 2.1 項下，完成峰面積的記錄，并繪制相關(guān)曲線。結(jié)果表明，三種藥物RSD均小于1%，提示溶液24 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.5 重復(fù)性試驗

取上述同一批號藥物6份，根據(jù)2.2.2供試品溶液，按2.1項下色譜條件進樣，計算RSD值。結(jié)果表明，三種藥物RSD為0.49%、0.79%、1.36%，可重復(fù)性較好。

2.6 精密度試驗

分別精密量取2.2.1下氯霉素、克霉唑和醋酸地塞米松混合對照品溶液 0.5、0.7、1.0、2.0 mg 于量瓶中，向量瓶中加入適量的甲醇，獲得不同質(zhì)量濃度的系列混合對照品溶液，按2.1項下色譜條件進樣，記錄峰面積，計算RSD值，分別為0.73%、0.45%、1.23%，具有較好的精密度。

2.7 加樣回收試驗

氯霉素、克霉唑及醋酸地塞米松的加入量發(fā)生變化，對應(yīng)的回收率也發(fā)生變化，氯霉素、克霉唑及醋酸地塞米松的平均回收率分別為99.93%、100.21%、100.26%。見表2。

表2 回收率試驗結(jié)果（n=9）

2.8 專屬性試驗

選取2.2下混合對照品溶液、供試品溶液和空白基質(zhì)溶液適量，按2.1項下色譜條件進樣，然后將色譜記錄下來并保存，并進行線性關(guān)系考察和精密度試驗。根據(jù)高效液色譜圖中顯示，空白基質(zhì)對氯霉素、克霉唑、醋酸地塞米松3種主要成分的測定，無干擾作用，表示本方法的專屬性較好，見圖1。

圖1 高效液色譜圖

2.9 樣品含量測定

取不同批次樣品適量，根據(jù)2.2.2項下方法制備供試品溶液，再根據(jù)2.1項下色譜條件進樣測定，計算3種主要成分含量，結(jié)果表明，氯霉素含量分別為 92.23%（批號 190301）、91.59%（批號194831）；克霉唑含量分別為95.7%（批號：190107）、102.59%（批號 195836）；醋酸地塞米松含量為100.59%（批號20170602）、103.32%（批號20184376）。

3 討論

選擇不同的色譜柱并選擇不同的柱溫，分別對氯霉素的分離度、克霉唑的分離度和醋酸地塞米松的分離度進行研究，其結(jié)果顯示不同柱溫、不同色譜柱對氯霉素、克霉唑和醋酸地塞米松的分離度影響較小，則顯示出高效液相色譜的耐用性較好[9-10]。復(fù)方地克軟膏是一種復(fù)方制劑，組成成分非常復(fù)雜，包含許多親水性和親脂性基質(zhì)。制備測試溶液時，應(yīng)根據(jù)主要藥物和輔助材料的理化性質(zhì)選擇溶劑，嘗試不同濃度的甲醇溶液作為溶劑，或嘗試不同濃度純甲醇作為溶劑，提取樣品。當(dāng)甲醇濃度低時，色譜柱被堵塞而導(dǎo)致色譜柱壓力升高。通過采用高效液相色譜檢測復(fù)方地克軟膏中3組分的含量，以便能夠改進優(yōu)化制備工藝[11-13]。

復(fù)方地克軟膏原生產(chǎn)工藝操作要求為醋酸地塞米松、氯霉素、克霉唑混勻，加入甘油研成糊狀，加入熱水混勻再加入三乙醇胺混勻備用，再取硬脂酸、十八醇、尼泊金、液體石蠟加熱共熔，隨后加入樟腦、薄荷腦溶解，混勻備用，最后將水相備用液在攪拌下加入油相備用液中直至形成糊狀半固體，停止攪拌，即得。此工藝存在的問題[14-15]：制劑的穩(wěn)定性差，醋酸地塞米松、氯霉素含量不穩(wěn)定；儲存過程中易變色。同時，試劑制備過程中加入時，基質(zhì)的溫度對醋酸地塞米松、氯霉素、克霉唑的穩(wěn)定性可能也有影響，從實驗結(jié)果來看基質(zhì)溫度在50～60℃時加入混合出來的制劑原料含量更高。文獻資料顯示[16]，氯霉素滴眼液在制劑時，將注射用水煮沸，能夠有效的減少水中含氧量，等到冷卻到60℃以下時，再取合適劑量的氯霉素加入，能夠有效的減少制備過程中，氯霉素分解的情況。在制備過程中，添加合適劑量的β-環(huán)糊精，就能夠增強氯霉素的穩(wěn)定性。如果利用β-環(huán)糊精或其衍生物，通過飽和水溶液法、超聲波法、研磨法、冷凍干燥法等包合技術(shù)，制備氯霉素-β-環(huán)糊精包合物，有極大幾率得到的氯霉素制劑穩(wěn)定性更加良好，通過分析其中的含量并將其改進生產(chǎn)工藝路線[17-18]，使得復(fù)方地克軟膏中各項成分含量更穩(wěn)定、精密度良好、更具有專屬性。本研究中，氯霉素、克霉唑及醋酸地塞米松的加入量發(fā)生變化，對應(yīng)的回收率也發(fā)生變化，氯霉素、克霉唑及醋酸地塞米松的平均回收率分別為99.93%、100.21%、100.26%，說明醋酸地塞米松回收率較高。

綜上所述，高效液相色譜法檢測復(fù)方地克軟膏中3組分的含量效果較好，該檢測方法簡單快速，結(jié)果準確性較高且具有較好的重復(fù)性，能完成該類藥物質(zhì)控，值得推廣應(yīng)用。