何智燕，田 穎，彭蘇文，王 倩，陳 敏，周 環(huán)

（揚(yáng)州大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，江蘇 揚(yáng)州 225127）

肥胖癥是由于機(jī)體能量攝入超過(guò)消耗而導(dǎo)致體內(nèi)脂肪堆積的一種慢性代謝性疾病，與心腦血管疾病、糖尿病等疾病的發(fā)病密切相關(guān)，嚴(yán)重危害人類健康，已引起醫(yī)學(xué)界的廣泛關(guān)注[1-3]。肝臟不僅是脂肪合成的重要器官，也是脂肪酸β氧化的主要場(chǎng)所，肝臟正常功能的維持需要脂肪，但過(guò)多的脂肪堆積也會(huì)影響其正常功能，甚至導(dǎo)致疾病[4]。因此，提升肝臟的脂代謝水平，改善脂代謝效率，對(duì)于維持肝臟和機(jī)體的正常脂代謝功能有重要意義。

脂聯(lián)素（adiponectin，APN）是一種由成熟脂肪細(xì)胞分泌的特異性蛋白，是目前發(fā)現(xiàn)唯一的與肥胖呈負(fù)相關(guān)的細(xì)胞因子[5]。APN可通過(guò)與受體結(jié)合，減少游離脂肪酸進(jìn)入肝臟[6]。APN的受體包括APN受體（adiponectin receptor，AdipoR）1和AdipoR2，在肝臟中，AdipoR1激活A(yù)MP活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK），AdipoR2激活過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α（peroxisome proliferators-activated receptors，PPARα）[7]。APN-AMPK、APN-PPARα-肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶-1（carnitine palmitoyl transterase-1，CPT-1）是APN在肝臟中促進(jìn)脂肪酸氧化、抑制脂質(zhì)合成、調(diào)節(jié)脂代謝的重要通路，起到減少脂質(zhì)合成、防止肝臟產(chǎn)生脂肪性病變的重要作用。

能量限制是目前公認(rèn)的對(duì)于肥胖患者比較有效的減肥方式，可減少脂質(zhì)堆積、減輕肥胖者的體質(zhì)量并改善機(jī)體的脂代謝狀況，在一定程度上通過(guò)APN信號(hào)通路調(diào)節(jié)機(jī)體的脂代謝水平[8-9]。而蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物含量不同的等熱量飲食在減重效果和代謝機(jī)能調(diào)節(jié)方面存在爭(zhēng)議[10]，Wycherley等[11]研究發(fā)現(xiàn)攝入總能量相同時(shí)高蛋白飲食能更有效地降低體質(zhì)量，增加食物生熱效應(yīng)，進(jìn)而消耗更多能量；同時(shí)蛋白質(zhì)是構(gòu)成骨骼肌非脂肪組織的物質(zhì)基礎(chǔ)，在減重過(guò)程中，攝入充足的蛋白質(zhì)可能對(duì)保留骨骼肌的非脂肪組織以及維持基礎(chǔ)能量代謝方面有幫助[12]，但也有研究提示飲食中的產(chǎn)能營(yíng)養(yǎng)素比例對(duì)體質(zhì)量下降無(wú)影響[13-14]，可見(jiàn)蛋白質(zhì)攝入量對(duì)減重者有無(wú)影響仍無(wú)定論，雖然國(guó)內(nèi)外對(duì)高蛋白的研究報(bào)道很多，但僅限于對(duì)其減重和減脂的觀察，而對(duì)其作用機(jī)制鮮有深入探討，因此本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究不同蛋白質(zhì)攝入量對(duì)限能超重大鼠肝臟APN信號(hào)通路的影響，探討降低超重大鼠能量攝入的同時(shí)不同蛋白質(zhì)攝入量對(duì)機(jī)體脂代謝的調(diào)控機(jī)制，為合理減重提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、材料與試劑

健康雄性SD大鼠36 只，5～6 周齡，平均體質(zhì)量為（196.9±2.5）g，購(gòu)自上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證編號(hào)：20130016009088，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（瀘）2013-0016。大鼠喂養(yǎng)及干預(yù)期間自由飲水，12 h明暗周期，動(dòng)物房溫度為（22±2）℃，相對(duì)濕度為（50±10）%。動(dòng)物處理及飼養(yǎng)條件按照動(dòng)物福利的相關(guān)規(guī)定及《中華人民共和國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》和《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量管理辦法》實(shí)施。

實(shí)驗(yàn)所用飼料購(gòu)自江蘇省協(xié)同醫(yī)藥生物工程有限責(zé)任公司，普通飼料（能量值為1 526.00 kJ/100 g）組分配方參考GB 14924.3—2010《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 配合飼料營(yíng)養(yǎng)成分》，其中含玉米40.60%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)，下同）、淀粉14.00%、小麥10.00%、苜蓿草3.00%、豆粕11.00%、魚粉6.00%、雞肉粉6.00%、動(dòng)物預(yù)混料（維生素、礦物質(zhì)的混合物）4.40%、谷朊粉2.00%、石粉1.00%、色拉油2.00%，蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)為19.20%；高脂飼料（能量值為2 062.91 kJ/100 g）在普通飼料為40%的基礎(chǔ)上加了豬油28.00%、蔗糖10.00%、全脂奶粉10.00%，蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)為19.11%；30%蛋白飼料（能量值為1 525.62 kJ/100 g）在普通維持飼料為77%的基礎(chǔ)上加了18.00%的大豆分離蛋白，蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)為31.18%；60%蛋白飼料（能量值為1 515.90 kJ/100 g）在普通維持飼料為27%的基礎(chǔ)上加了61.00%的大豆分離蛋白，蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)為54.90%。

APN、AMPK、固醇調(diào)節(jié)元件蛋白1c（sterol regulatory element binding protein 1c，SREBP-1c）、乙酰輔酶A羧化酶（acetyl-CoA carboxylase，ACC）、脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，F(xiàn)AS）、CPT-1酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司；其他試劑購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司。

1.2 儀器與設(shè)備

iMark酶標(biāo)儀 美國(guó)Bio-Rad公司；KDN-04III蛋白質(zhì)測(cè)定儀 上海纖檢儀器有限公司；SZC-C脂肪測(cè)定儀上海纖檢儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 動(dòng)物分組及干預(yù)

將36 只雄性大鼠給予普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為正常對(duì)照組（NC）（6 只）和造模組（30 只）。NC組普通飼料喂養(yǎng)，造模組高脂飼料喂養(yǎng)，均自由進(jìn)食飲水，每周末稱大鼠體質(zhì)量。于造模的第9周末，選擇體質(zhì)量為正常對(duì)照組平均體質(zhì)量的1.1 倍以上的大鼠共16 只，按體質(zhì)量隨機(jī)分為4 組，每組4 只，分別為：模型對(duì)照組（MC）和干預(yù)組，干預(yù)組包括低能量低蛋白組（LP）、低能量正常蛋白組（NP）、低能量高蛋白組（HP）。NC組：繼續(xù)普通飼料喂養(yǎng)9 周，自由進(jìn)食飲水。MC組：繼續(xù)高脂飼料喂養(yǎng)9 周，自由進(jìn)食飲水。LP組：普通飼料喂養(yǎng)，能量攝入量是NC組的60%，蛋白質(zhì)攝入量是NC組的60%；NP組：飼料為30%蛋白飼料，能量攝入量是NC組的60%，蛋白質(zhì)攝入量等于NC組；HP組：飼料為60%蛋白飼料，能量攝入量是NC組的60%，蛋白質(zhì)攝入量是NC組的2 倍。記錄每日進(jìn)食量。按照GB 5009.5—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中蛋白質(zhì)》、GB 5009.6—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中脂肪的測(cè)定》、GB 5009.3—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中水分的測(cè)定》、GB 5009.4—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中灰分的測(cè)定》測(cè)定各飼料中蛋白質(zhì)、脂肪、水分、灰分含量[15-18]，計(jì)算飼料中碳水化合物含量。稱量NC組第1天的攝食量并計(jì)算能量攝入，再根據(jù)不同飼料的能量值計(jì)算各干預(yù)組第2天的能量攝入量和投食量，于第2天投喂3 個(gè)干預(yù)組相應(yīng)質(zhì)量的飼料，干預(yù)組每日投食量均食完，每周末稱量各組大鼠體質(zhì)量。通過(guò)每日的進(jìn)食量、飼料中的各營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)水平計(jì)算出大鼠每日蛋白、脂肪、碳水化合物攝入量及其供能比。

1.3.2 樣本采集及檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)結(jié)束前，各組大鼠禁食12 h，稱質(zhì)量后采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%水合氯醛腹腔麻醉，腹主動(dòng)脈取血，離心收集血清，取脂肪組織（附睪周圍、皮下脂肪、腹膜后脂肪、肩胛間）、肝臟組織并稱質(zhì)量備用。采用索氏抽提法[16]，檢測(cè)肝臟中脂肪質(zhì)量；用ELISA法檢測(cè)血清APN質(zhì)量濃度和肝臟中AMPK、SREBP-1c、ACC、FAS、PPARα、CPT-1水平，按照試劑盒說(shuō)明書操作。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用Excel進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，采用SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)均用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，結(jié)果進(jìn)行正態(tài)性和方差同質(zhì)性檢驗(yàn)，采用單因素方差分析最小顯著性差異（least significance difference，LSD）或非參數(shù)檢驗(yàn)進(jìn)行組間數(shù)據(jù)分析，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 各組大鼠進(jìn)食情況

由表1可知，干預(yù)組每日進(jìn)食量、能量及脂肪攝入量均顯著低于MC組（P＜0.05）；LP組蛋白質(zhì)攝入量顯著低于MC組（P＜0.05），碳水化合物攝入量與MC組無(wú)顯著差異；NP組蛋白質(zhì)攝入量、碳水化合物攝入量與MC組相比均無(wú)差異；HP組蛋白質(zhì)攝入量顯著高于MC組（P＜0.05），碳水化合物攝入量顯著低于MC組（P＜0.05）。

表1 干預(yù)期間大鼠每日進(jìn)食量、能量攝入量、產(chǎn)能營(yíng)養(yǎng)素?cái)z入量及其供能比（n＝4）Table 1 Daily food intake, calorie intake, energy-yielding nutrients and its energy supply ratio in rats during intervention period (n= 4)

2.2 造模、干預(yù)期間各組大鼠體質(zhì)量變化情況

圖2 干預(yù)期間大鼠的體質(zhì)量變化Fig.2 Changes in body mass of rats during intervention

由圖1～2和表2可知，在干預(yù)前，與NC組相比，MC、LP、NP、HP組體質(zhì)量顯著升高（P＜0.05），平均體質(zhì)量比NC組高18.20%，說(shuō)明造模成功。在干預(yù)后，與MC組和NC組相比，LP、NP、HP組體質(zhì)量和脂肪質(zhì)量均顯著下降（P＜0.05）；與LP、NP組相比，HP組體質(zhì)量和脂肪質(zhì)量均有所降低，但無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

圖1 造模期間大鼠的體質(zhì)量變化Fig.1 Changes in body mass of rats during modeling

表2 干預(yù)前后各組大鼠體質(zhì)量、體脂肪的比較（n＝4）Table 2 Comparison of body mass and body fat in rats among five groups of rats (n= 4)

2.3 蛋白質(zhì)攝入量對(duì)限能超重大鼠肝質(zhì)量、肝臟脂肪質(zhì)量的影響

由表3可知，與NC組相比，MC組肝質(zhì)量、肝臟脂肪質(zhì)量均顯著升高（P＜0.05）；與MC組相比，LP、NP、HP組肝質(zhì)量、肝臟脂肪質(zhì)量均顯著降低（P＜0.05）；3 個(gè)干預(yù)組之間，肝臟質(zhì)量無(wú)顯著性差異（P＞0.05），與LP、NP組相比，HP組肝中脂肪質(zhì)量顯著降低（P＜0.05）。

表3 各組大鼠肝質(zhì)量、肝臟脂肪質(zhì)量的比較（n ＝4）Table 3 Comparison of liver mass and liver fat among five groups of rats (n= 4)

2.4 蛋白質(zhì)攝入量對(duì)限能超重大鼠血清APN和肝臟中AMPK、SREBP-1c、ACC、FAS水平的影響

由圖3可知，與NC組相比，MC組血清APN、肝臟AMPK質(zhì)量濃度顯著下降（P＜0.05），肝臟SREBP-1c、ACC、FAS水平均顯著升高（P＜0.05）；與MC組相比，LP、NP、HP組血清APN質(zhì)量濃度顯著升高（P＜0.05），肝臟ACC、FAS濃度均顯著降低（P＜0.05），肝臟AMPK質(zhì)量濃度有所升高但無(wú)顯著性變化（P＞0.05），LP、NP組肝臟SREBP-1c質(zhì)量濃度顯著降低（P＜0.05），HP組SREBP-1c質(zhì)量濃度有所降低但無(wú)顯著性變化（P＞0.05）；3 個(gè)干預(yù)組中，NP、HP組血清APN質(zhì)量濃度顯著高于LP組（P＜0.05），HP組血清SREBP-1c、FAS水平均顯著高于LP、NP組（P＜0.05）。

圖3 各組大鼠血清APN和肝臟AMPK、SREBP-1c、ACC、FAS水平的比較（n＝4）Fig.3 Comparison of serum APN and liver AMPK, SREBP-1c, ACC and FAS levels among five groups of rats (n = 4)

2.5 蛋白質(zhì)攝入量對(duì)限能超重大鼠PPARα、CPT-1水平的影響

由圖4可知，與NC組相比，MC組肝臟PPARα、CPT-1質(zhì)量濃度均顯著降低（P＜0.05）；與MC組相比，3 個(gè)干預(yù)組肝臟PPARα、CPT-1質(zhì)量濃度均顯著升高（P＜0.05）；LP、NP兩組之間肝臟PPARα、CPT-1質(zhì)量濃度無(wú)顯著差異（P＞0.05）；與LP、NP組相比，HP組PPARα質(zhì)量濃度顯著升高（P＜0.05），CPT-1質(zhì)量濃度升高，但無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

圖4 各組大鼠肝臟PPARα、CPT-1水平的比較（n＝4）Fig.4 Comparison of live PPARα and CPT-1 levels among five groups of rats (n = 4)

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)中，干預(yù)組的能量攝入是NC組的60%，干預(yù)9 周后，低能量攝入的干預(yù)組體質(zhì)量、體脂肪質(zhì)量均顯著低于MC和NC組（P＜0.05），說(shuō)明能量控制可達(dá)到減少體質(zhì)量、體脂肪的效果。本實(shí)驗(yàn)為保證干預(yù)效果的顯著性，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間采用能量攝入的低限（正常能量攝入量的60%）作為干預(yù)組的能量攝入量，但長(zhǎng)期以此能量攝入量進(jìn)食會(huì)引起體質(zhì)量過(guò)輕、營(yíng)養(yǎng)不良的情況發(fā)生，因此對(duì)于肥胖患者的減重，當(dāng)體質(zhì)量降低到正常體質(zhì)量時(shí)，應(yīng)將人體的能量攝入量調(diào)整為正常水平，以保證營(yíng)養(yǎng)和健康。在能量限制一致的條件下，與LP、NP組相比，HP組體質(zhì)量、體脂肪質(zhì)量均有所降低，但無(wú)顯著性差異。有多個(gè)研究發(fā)現(xiàn)采取高蛋白飲食的受試者比低蛋白飲食的受試者在餐時(shí)和餐后都有更高的飽腹感，且能減掉更多的體質(zhì)量和脂肪[19-20]。Due等[21]對(duì)50 名超重受試者進(jìn)行為期一年的高蛋白減脂膳食干預(yù)，結(jié)果顯示體質(zhì)量、體脂質(zhì)量均顯著下降，說(shuō)明限能狀態(tài)一致時(shí)，高蛋白飲食對(duì)降低超重者的體質(zhì)量、體脂質(zhì)量有一定作用。但是由于本研究的干預(yù)時(shí)間較短，高蛋白飲食的減重、減脂效果還未顯示出顯著性差異，因此還需要進(jìn)一步延長(zhǎng)干預(yù)時(shí)間以明確其作用。

肝臟作為碳水化合物、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)合成、代謝、存儲(chǔ)、重新分配的主要場(chǎng)所，在維持機(jī)體代謝穩(wěn)態(tài)中起著重要作用。當(dāng)肝臟所吸收的能量大于消耗時(shí)，會(huì)引起肝臟的脂肪蓄積，表現(xiàn)為肝臟脂肪變性。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示高脂膳食會(huì)明顯促進(jìn)肝質(zhì)量增加和肝細(xì)胞內(nèi)脂肪蓄積，而進(jìn)行能量限制干預(yù)后可以有效減輕肝質(zhì)量，減少肝臟中的脂肪質(zhì)量，且3 個(gè)干預(yù)組中，與LP、NP組相比，HP組肝中脂肪質(zhì)量顯著降低（P＜0.05），提示可能與蛋白質(zhì)攝入量和肝臟中相關(guān)信號(hào)通路有關(guān)，為進(jìn)一步探究造成該結(jié)果的原因，進(jìn)一步對(duì)大鼠血清和肝臟中的激素水平進(jìn)行了檢測(cè)分析。

APN是調(diào)節(jié)脂類代謝的重要激素[22]，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示干預(yù)組中血清APN質(zhì)量濃度顯著高于MC組，當(dāng)機(jī)體的脂肪質(zhì)量減少時(shí)，APN的質(zhì)量濃度會(huì)增加，說(shuō)明限制能量、減少體脂后可以促進(jìn)APN的分泌。隨蛋白質(zhì)攝入量增加，APN的分泌量呈上升趨勢(shì)，與LP組相比，HP組血清APN質(zhì)量濃度顯著升高，該變化趨勢(shì)與體脂肪、肝臟脂肪質(zhì)量的變化趨勢(shì)相反，其機(jī)制可能為限制熱量的高蛋白飲食會(huì)增加脂肪組織中APNmRNA的表達(dá)水平，促進(jìn)APN的分泌[23]。在APN及其受體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)研究中，有2 條比較重要的傳導(dǎo)通路：AMPK通路和PPARα通路（圖5）。AMPK活化可以減少外周脂肪組織釋放脂肪酸、抑制脂質(zhì)合成、促進(jìn)脂質(zhì)降解等，從而減少脂質(zhì)在肝臟沉積[24]。PPARα通路下游諸多靶點(diǎn)和脂類、脂聯(lián)素受體緊密聯(lián)系，與脂肪酸的獲取、結(jié)合、轉(zhuǎn)運(yùn)、氧化效應(yīng)以及脂蛋白質(zhì)的裝配等有關(guān)。如果PPARα及其信號(hào)通路的相關(guān)基因表達(dá)發(fā)生紊亂，可導(dǎo)致與脂質(zhì)代謝有關(guān)的基因轉(zhuǎn)錄水平的降低，出現(xiàn)脂肪酸氧化減少，脂蛋白合成代謝障礙，肝臟脂質(zhì)沉積，引起肝細(xì)胞損傷[25]。因此本實(shí)驗(yàn)從APN對(duì)脂肪的合成、分解兩個(gè)方面進(jìn)行討論分析。

圖5 肝臟脂聯(lián)素信號(hào)通路控制示意圖[24-25]Fig.5 Schematic diagram of liver adiponectin signal pathway control[24-25]

在APN-AMPK通路中，AMPK是機(jī)體細(xì)胞內(nèi)主要的能量傳感器[26]，參與脂肪酸氧化與葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)、甘油三酯的合成與代謝等多種細(xì)胞代謝過(guò)程，也是APN信號(hào)通路的重要下游因子。在肝臟中，APN通過(guò)與Adipor1結(jié)合，激活A(yù)MPK，活化的AMPK可抑制SREBP-1c的活性。SREBP-1c是一個(gè)重要的脂質(zhì)合成調(diào)節(jié)因子，具有調(diào)控脂肪細(xì)胞的分化和脂肪在細(xì)胞內(nèi)異位積聚的作用。SREBP-1c的下游是ACC和FAS，F(xiàn)AS是內(nèi)源性脂肪酸合成的關(guān)鍵酶[27]，ACC是脂肪酸合成的限速酶，與脂肪合成的速率密切相關(guān)，SREBP-1c活性受抑制后可抑制ACC、FAS的轉(zhuǎn)錄，從而減少肝臟脂肪的合成[28]。在本實(shí)驗(yàn)中，與MC組相比，干預(yù)組中血清APN、肝臟AMPK水平增加，肝臟SREBP-1c、FAS、ACC的表達(dá)水平顯著降低（P＜0.05），說(shuō)明能量限制能夠通過(guò)激活A(yù)PN-AMPK通路，抑制SREBP-1c的表達(dá)，下調(diào)SREBP-1c下游FAS和ACC的表達(dá)，減少脂質(zhì)合成。在限能狀態(tài)一致時(shí)，隨蛋白質(zhì)攝入量增加，干預(yù)組的血清APN水平呈升高趨勢(shì)，但血漿AMPK、SREBP-1c、ACC和FAS并未呈現(xiàn)出相應(yīng)的變化，這可能是因?yàn)锳MPK受APN和胃饑餓素等激素和細(xì)胞因子的多重調(diào)控作用，雖然APN會(huì)促進(jìn)AMPK的分泌，但是由于高蛋白飲食可以促進(jìn)胃饑餓素的分泌[29]，而胃饑餓素促進(jìn)肝臟和脂肪細(xì)胞的脂肪合成，降低骨骼肌的脂肪含量，同時(shí)抑制肝臟中脂肪酸氧化及AMPK信號(hào)通路[30]，推測(cè)可能此時(shí)胃饑餓素的調(diào)控作用大于APN，所以AMPK的分泌趨勢(shì)并沒(méi)有隨APN質(zhì)量濃度的升高而升高，其下游因子SREBP-1c、FAS和ACC的表達(dá)水平也沒(méi)有隨之被抑制，提示蛋白質(zhì)攝入量增加不能通過(guò)促進(jìn)APN-AMPK信號(hào)通路的激活來(lái)調(diào)節(jié)脂代謝，抑制脂肪合成，最終降低大鼠的肝臟脂肪質(zhì)量。

在APN-PPARα通路中，PPARα作為配體誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子通過(guò)調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄從而調(diào)控脂代謝[31]。研究證實(shí)，APN在肝臟中可與AdipoR2結(jié)合激活PPARα，PPARα表達(dá)上調(diào)會(huì)促進(jìn)CPT-1基因的表達(dá)，而CPT-1是脂肪酸β氧化過(guò)程中的重要限速酶，可以提高能量消耗，最終導(dǎo)致降脂效應(yīng)[32]。本實(shí)驗(yàn)中，干預(yù)組血清APN和肝臟PPARα、CPT-1水平均顯著高于MC組（P＜0.05），說(shuō)明限制能量可以通過(guò)減少脂肪合成從而促進(jìn)APN的分泌，激活高脂飲食大鼠肝臟的APN-PPARα信號(hào)通路來(lái)調(diào)節(jié)脂代謝，促進(jìn)脂肪酸氧化，最終降低大鼠的肝臟脂肪質(zhì)量。在限能狀態(tài)一致時(shí)，隨蛋白質(zhì)攝入量增加，3 個(gè)干預(yù)組的血清APN和肝臟PPARα、CPT-1水平均呈上升趨勢(shì)，其中NP、HP組血清APN質(zhì)量濃度顯著高于LP組（P＜0.05），HP組肝臟PPARα質(zhì)量濃度顯著高于LP、NP組（P＜0.05），推測(cè)與高蛋白膳食彌補(bǔ)了機(jī)體對(duì)蛋白質(zhì)和必需氨基酸的生理需要，改善了機(jī)體相應(yīng)的生化或生理代謝，從而對(duì)APN、PPARα、CPT-1合成產(chǎn)生了明顯的促進(jìn)作用，進(jìn)而促進(jìn)了脂肪酸的氧化，減輕了超重雄鼠的肝臟脂肪質(zhì)量，最終改善肝臟脂肪的蓄積。

綜上，能量限制可以通過(guò)激活肝臟中APN-AMPK信號(hào)通路和APN-PPARα信號(hào)通路，促進(jìn)脂肪酸氧化、抑制脂質(zhì)合成、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝；在能量限制一致的情況下，增加蛋白質(zhì)攝入量可以促進(jìn)APN的分泌，促進(jìn)APN-PPARα信號(hào)通路的激活，從而促進(jìn)脂肪酸氧化，減少肝臟脂肪的蓄積。