王敏 周璐 孫燕 陳琳 吳夢瑤 張鑫蕾 張淑靜 高譽珊 楊佳敏 鄭豐杰 李宇航

摘要 目的：對大柴胡湯及其“方劑要素”對NAFLD模型大鼠“腸-肝軸”作用機制進行相關(guān)分析，揭示大柴胡湯的配伍規(guī)律。方法：105只大鼠分為正常組、模型組、鹽酸吡格列酮組、疏肝利膽組、健脾化痰組、通腑泄?jié)峤M、大柴胡湯組，按照方法造模及給藥，檢測“肝軸”及“腸軸”相關(guān)指標，采用Critic法進行綜合評價。結(jié)果：與正常組比較，模型組“肝軸”以及“腸軸”各個指標權(quán)重之和Z總1、Z總2差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;與模型組比較，鹽酸吡格列酮組、疏肝利膽組、通腑泄?jié)峤M以及大柴胡湯組“肝軸”各個指標權(quán)重之和Z總1差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），鹽酸吡格列酮組、健脾化痰組、通腑泄?jié)峤M以及大柴胡湯組“腸軸”各個指標權(quán)重之和Z總2差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。腸道菌群分析顯示，通腑泄?jié)岱絼┮貙Ω纳芅AFLD模型大鼠腸道菌群優(yōu)勢顯著，能提高NAFLD大鼠腸道菌群中擬桿菌屬、薩特氏菌屬、假丁酸弧菌屬細菌和Akkermansia muciniphila等有益菌的相對豐度。結(jié)論：大柴胡湯中疏肝利膽方劑要素主要通過疏利肝膽作用顯著調(diào)節(jié)肝臟脂質(zhì)代謝以及肝臟免疫功能，即調(diào)節(jié)“肝軸”;大柴胡湯中健脾化痰方劑要素主要通過健運脾胃、化痰作用改善腸黏膜屏障功能，即調(diào)節(jié)“腸軸”;大柴胡湯中通腑泄?jié)岱絼┮刂饕{(diào)節(jié)腸道菌群;大柴胡湯全方則可同時作用于“肝軸”和“腸軸”，對NAFLD模型大鼠起治療作用。

關(guān)鍵詞 非酒精性脂肪性肝病;大柴胡湯;方劑要素;疏肝利膽;健脾化痰;通腑泄?jié)?腸-肝軸;CRITIC法;綜合評價

Relevant Analysis of Dachaihu Decoction and its “Formula Elements” on the “Intesine-liver axis” in the NAFLD Model

WANG Min，ZHOU Lu，SUN Yan，CHEN Lin，WU Mengyao，ZHANG Xinlei，ZHANG Shujing，GAO Yushan，YANG Jiamin，ZHENG Fengjie，LI Yuhang

（School of Traditional Chinese Medicine，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China）

Abstract Objective：To observe the effects of Dachaihu Decoction and various “formula-factors” on action mechanism of “Intestine-liver axis” of NAFLD model and to reveal the compatibility rule of Dachaihu Decoction.Methods：A total of 105 rats were divided into a normal group，a model group，a Western medicine group，a Shugan Lidan Decoction group，a Jianpi Huatan group，a Tongfu Xiezhuo group and a Dachaihu decoction group.According to the method of modeling and administration，the relevant indexes of“l(fā)iver axis”and“gut axis”were detected，and the comprehensive evaluation was carried out by the Critic method.Results：Compared with the normal group，in the model group，Z總1 、Z總2 of the sum of the weights of each index of“l(fā)iver axis”and“gut axis”is statistically significant（P<0.05）.Compared with the model group，there were significant differences in the sum weight of Z總1 in liver axis in the Pioglitazone hydrochloride group，dispersing stagnated liver qi for promoting bile flow group，catharis and dispel turbidity group and the Dachaihu Decoction group.And there were significant differences in the sum weight of Z總2 in the Pioglitazone hydrochloride group，dispersing stagnated liver qi for promoting bile flow group，Catharis and dispel turbidity group and the Dachaihu Decoction group.The analysis of intestinal flora showed that Tongfu Xiezhuo Formula have significant advantages in improving intestinal flora of NAFLD model rats.It can increase the relative abundance of beneficial bacteria in intestinal flora of NAFLD rats，such as Bacteroides，Sartoria，Vibrio pseudobutyricum and Akkermansia muciniphila.Conclusion：Formula factors of“Shugan Lidan formula”mainly regulate lipid metabolism of liver and liver immune function，namely，regulating“l(fā)iver axis”.The Jianpi Huatan Formula factors of the prescription mainly improves intestinal mucosal barrier function-that is，regulating the“intestinal axis”.The Tongfu Xiezhuo formula factors of the Dachaihu Decoction can regulate intestinal flora; Dachaihu Decoction can act on both“l(fā)iver axis”and“intestinal axis”at the same time，and has therapeutic effects on NAFLD model rats.

Keywords Nonalcoholic fatty liver disease; Dachaihu Decoction; Formula factors; Dispersing stagnated liver qi for promoting bile flow; Invigorate the spleen and dissapte phlegm; Catharis and dispel turbidity; Intestinal-liver shaft; CRITIC method; Comprehensive evaluation

中圖分類號：R242文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.03.012

非酒精性脂肪性肝?。∟onalcoholic Fatty Liver Disease，NAFLD）是一種與胰島素抵抗（IR）和遺傳易感密切相關(guān)的代謝應激性肝臟損傷，其病理學改變與酒精性肝?。ˋLD）相似，但患者無過量飲酒史，疾病譜包括非酒精性單純性脂肪肝（NAFL）、非酒精性脂肪性肝炎（NASH）及其相關(guān)肝硬化和肝細胞癌[1]。隨著人們生活方式和飲食結(jié)構(gòu)的改變，NAFLD的患病率呈現(xiàn)逐年上升趨勢，全球NAFLD患病率約為25.24%。其中北美洲24.1%、歐洲23.7%、亞洲27.4%、中東31.8%、非洲13.5%、南美洲30.5%[2]。雖然NAFLD由單純脂肪肝發(fā)展為非酒精性脂肪性肝炎、肝硬化的時限很長，但由于其代謝紊亂、血脂升高，與心腦血管疾病的發(fā)展密切相關(guān)，對人類健康構(gòu)成嚴重威脅，現(xiàn)在也越來越引起人們的重視，成為21世紀我國乃至全球重要的公共健康問題之一。

NAFLD在單純脂肪肝或肝炎早期多無明顯癥狀，現(xiàn)代臨床多采用調(diào)節(jié)生活節(jié)奏，調(diào)整飲食習慣以及加強鍛煉等方式加以干預，中醫(yī)藥在其治療上有明顯優(yōu)勢。大柴胡湯是《傷寒論》經(jīng)典方劑，具有和解少陽、內(nèi)瀉熱結(jié)之功效，符合臨床上大多數(shù)NAFLD患者肝膽氣機不利，脾虛痰濕中阻，陽明濁氣不降的證候特點，而廣泛應用于臨床治療NAFLD，療效確切。

現(xiàn)代臨床上應用大柴胡湯治療NAFLD的效應研究較多，但其作用機制及作用靶點的基礎(chǔ)研究甚少，藥理機制不能用線性邏輯關(guān)系去推理，影響了該方臨床治療NAFLD療效的進一步提高及化裁應用。證候要素、方劑要素的提出以及對中醫(yī)復方靶點認識的不斷加深為我們提供了一個研究思路[3]，“方-證要素對應”不僅用來研究中醫(yī)方劑的組方原理[4-9]，也越來越多被用來研究中藥方治療疾病的現(xiàn)代作用機制[10]?；凇胺?證要素對應”的關(guān)系，我們從大柴胡湯方劑要素的角度出發(fā)，以腸-肝軸為切入點，研究大柴胡湯及其拆方—即各個”方劑要素”對NAFLD模型大鼠腸-肝軸上多靶點的作用，從而為中藥復方治療疾病的多靶點作用機制研究提供一種方法。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物

SPF級健康SD大鼠，雄性，56只，體質(zhì)量（180±20）g，購于斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司，許可證號：SCXK（京）2016-0002。大鼠于SPF級動物房內(nèi)飼養(yǎng)，室溫為22 ℃，濕度為50%。適應性喂養(yǎng)7 d以后開始造模，整個過程中自由進食、飲水。

1.1.2 藥物

鹽酸吡格列酮片（杭州中美華東制藥有限公司，生產(chǎn)批號：170102）。疏肝利膽藥物組成：柴胡15 g、黃芩9 g、白芍9 g;健脾化痰藥物組成：法半夏9 g、生姜15 g、大棗12 g;通腑泄?jié)崴幬锝M成：生大黃6 g、燙枳實9 g;大柴胡湯藥物組成：柴胡15 g、黃芩9 g、白芍9 g、法半夏9 g、生姜15 g、大棗12 g、生大黃6 g、燙枳實9 g。以上中藥飲片均購自北京同仁堂藥房。

1.1.3 試劑與儀器

大鼠TNF-α Elisa試劑盒（欣博盛生物科技有限公司，貨號：ERC102a.96）;大鼠TGF-β1Elisa試劑盒（欣博盛生物科技有限公司，貨號：ERC107B.96）;大鼠TLR4 Elisa試劑盒（武漢優(yōu)爾生科技股份有限公司，貨號：SEB824Ra）;大鼠NF-кB Elisa試劑盒（武漢優(yōu)爾生科技股份有限公司，貨號：SEA753Ra）;BCA法蛋白定量試劑盒（北京普利萊基因技術(shù)有限公司，貨號：P1511）;Occludin抗體（英國abcam公司，貨號：ab167161）;ZO-1抗體（美國proteintech公司，貨號：21773-1-AP-50）;引物[英濰捷基（上海）貿(mào)易有限公司，訂單號：4378367];大鼠sIgA試劑盒（欣博盛生物科技有限公司，貨號：ERC015）。

全自動生化分析儀（美國貝克曼庫爾特有限公司，美國，型號：au5800）;小型臺式高速冷凍離心機[德國艾本德股份公司（Eppendorf AG），德國，型號：5417R];臺式恒溫振蕩器（太倉實驗設(shè)備廠，型號：THZ-D）;超聲波細胞粉碎機（寧波新芝生物科技股份有限公司，型號：JY96-IIN）;電泳儀（美國BIO-RAD公司，美國，型號：Mini-PROTEAN）;脫色搖床（太倉實驗設(shè)備廠，型號：TS-1）;生物分子成像儀（美國BIO-RAD公司，美國，型號：LAS-4000MINI）;紫外可見分光光度計（尤尼柯（上海）有限公司，型號：UV-2600型）;MyCyclerPCR儀（美國BIO-RAD公司，美國，型號：T100）;熒光定量PCR儀（美國應用生物系統(tǒng)（ABI）公司，美國，型號：stepone-plus）;全波長酶標儀（美國賽默飛世爾科技公司，美國，型號：MultiskanMK3）。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備

105只大鼠按隨機數(shù)字表法分為正常組、模型組、鹽酸吡格列酮組、疏肝利膽組、健脾化痰組、通腑泄?jié)峤M、大柴胡湯組，其中每組7只用于電鏡取材，其余8只大鼠血清、肝、腸組織用于指標檢測。

參照文獻[11]選高脂高糖飼料配方，通過預實驗驗證后選定高脂高糖飼料配方為：52.5%維持飼料+30%蔗糖+10%豬油+2%膽固醇+5%蛋黃粉+0.5%膽酸鈉。所有大鼠適應性喂養(yǎng)7 d以后，除正常組大鼠外均給予高脂高糖飼料喂養(yǎng)16周建立NAFLD模型，正常組給予維持飼料喂養(yǎng)。所有組大鼠均自由飲食、飲水。

1.2.2 給藥方法

實驗用陽性對照藥選取鹽酸吡格列酮片，所用藥物購自京東大藥房（中美華東制藥，批號：170102）。藥物劑量參照文獻[12]為10 mg/（kg·d），按大鼠體質(zhì)量折算，將片劑研為粉末，溶于蒸餾水做成懸濁劑放入4 ℃冰箱備用。

實驗用方大柴胡湯為《傷寒論》經(jīng)典原方，所用中藥全部購自于北京同仁堂藥房，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學中醫(yī)藥基礎(chǔ)理論與關(guān)鍵技術(shù)研究中心鑒定為正品。生藥劑量比例參《方劑學》[13]大柴胡湯全方（柴胡15 g、黃芩9 g、白芍9 g、法半夏9 g、生姜15 g、大棗12 g、生大黃6 g、燙枳實9 g），按照體表面積法[14]換算求得大鼠單位體質(zhì)量生藥量8.64 g/kg。疏肝利膽藥物組成為柴胡15 g、黃芩9 g、白芍9 g，由體表面積法算得大鼠單位體質(zhì)量生藥量為3.39 g/kg;健脾化痰藥物組成為法半夏9 g、生姜15 g、大棗12 g，由體表面積法算得大鼠單位體質(zhì)量生藥量，并擴大10倍后為3.70 g/kg;通腑泄?jié)崴幬锝M成為生大黃6 g、燙枳實9 g，由體表面積法算得大鼠單位體質(zhì)量生藥量為1.54 g/kg。用蒸餾水將藥物浸泡30 min，武火煮沸后文火煎煮30 min，倒出，加蒸餾水再煎取一遍，將兩次所得煎液合并，用雙層紗布過濾，水浴蒸發(fā)濃縮，分別標記后貯存于冰箱備用。

第13～16周，分別給鹽酸吡格列酮組、疏肝利膽組、健脾化痰組、通腑泄?jié)峤M、大柴胡湯組大鼠灌胃相應藥液，3 mL/只，1次/d，正常組及模型組于相同時間給予同等劑量蒸餾水灌胃。

1.2.3 檢測指標與方法

實驗第16周，末次灌胃給藥后12 h（禁食水12 h），稱量大鼠體質(zhì)量，詳細記錄一般情況，后采用10%水合氯醛（0.3 mL/100 g）腹腔注射麻醉各組大鼠，仰位固定，開胸，腹主動脈取血，采集肝臟、回腸組織凍存?zhèn)溆?。同時，剖開大腸，取糞便分裝于事前高壓滅菌過的無菌凍存管，液氮凍存后轉(zhuǎn)移至-80 ℃冰箱待送深圳華大基因科技服務有限公司進行檢測。整個操作過程嚴格按照無菌操作進行，避免樣本污染，避免反復凍融。

本動物實驗過程均遵守美國國立衛(wèi)生院倡導的實驗動物關(guān)懷、使用指導原則，及以減少、替代和優(yōu)化為核心的動物實驗“3R”原則。本研究通過了北京中醫(yī)藥大學醫(yī)學與實驗動物倫理委員會的批準（編號：BUCM-1-2017051030-2030）。

血清三酰甘油（Triacylglycerol，TG）、總膽固醇（Total Cholesterol，TC）、高密度脂蛋白（High-density Lipoprotein，HDL），低密度脂蛋白（Low-density Lipoprotein，LDL）及谷丙轉(zhuǎn)氨酶（Alanine Aminotransferase，ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（Aspartate Aminotransferase，AST）由全自動生化儀（北京中醫(yī)藥大學科研中心）測定。Elisa法測定大鼠肝組織中TNF-α、TLR4、NF-кB、TGF-β以及腸組織sIgA含量。Western Blot法測定大鼠腸組織Occludin、ZO-1蛋白表達。RT-qPCR法測定大鼠腸組織Occludin mRNA、ZO-1 mRNA表達。

1.3 統(tǒng)計學方法

1.3.1 無量綱化處理

在運用Critic法對腸-肝軸指標進行分析時，由于指標間的單位不同，需進行無量綱化處理，消除單位不同的影響。同時，由于指標中存在高優(yōu)指標（指標值越高則結(jié)果越優(yōu)：HDL-C，sIgA，Occludin mRNA，ZO-1 mRNA，Occludin蛋白，ZO-1蛋白）與低優(yōu)指標（指標值越低則結(jié)果越優(yōu)：ALT，AST，TC，TG，LDL-C，NF-кB，TGF-b1，TLR4，TNF-α），因此需分別進行無量綱化處理，公式如下：

高優(yōu)指標無量綱化處理：Zij=xijmax（xij）

低優(yōu)指標無量綱化處理：Zij=max（xij）xij

1.3.2 計算指標間的相關(guān)性與沖突系數(shù)

利用pearson相關(guān)系數(shù)，對無量綱化后的指標計算指標間的相關(guān)性，公式如下：

rij=Cov（Zi，Zj）D（Zi）D（Zj）

沖突性系數(shù)與指標的相關(guān)性相反，相關(guān)性越高則沖突性越低，其公式如下：

Rj=i=1（1-rij）

以上公式中Cov（Zi，Zj）為Zi，Zj的協(xié)方差，D（Zi）、D（Zj）分別為Zi、Zj的方差。rij代表第i個指標與第j個指標的相關(guān)性。Rj表示第j個指標的沖突性。

1.3.3 計算客觀權(quán)重

指標的客觀權(quán)重通過如下公式進行求解：

Cj=σjRj

wj=Cjj=1Cj

公式中σj代表第j個指標的標準差即沖突性。Cj為指標j的信息量。

2 結(jié)果

2.1 各指標的變異性、沖突性、信息量、客觀權(quán)重值見表1。

2.2 肝軸指標、腸軸指標綜合評價 見表2。

2.3 各組腸道菌群中起重要作用的微生物 見表3。

3 討論

NAFLD是指除外一些明確損肝因素所導致的主要以肝細胞內(nèi)脂肪過度沉積為特征的臨床病理綜合征，屬于中醫(yī)學“脅痛”“痞滿”“肝脹”“肝痞”“肝癖”“肝著”“積聚”“痰證”“痰濁”“濕阻”“瘀證”“肥氣”“積證”等疾病范疇。NAFLD的發(fā)病機制并不十分明確，對其的研究大多處于假說階段，“二次打擊”學說占據(jù)主導地位，隨著1998年Marshall正式提出“腸-肝軸”概念，腸道因素在疾病發(fā)生發(fā)展中的作用越來越引起人們的重視。

腸-肝軸的“肝軸”主要包括脂質(zhì)代謝以及氧化應激反應。肝臟為脂質(zhì)代謝中心，脂質(zhì)代謝過程中任何一個小環(huán)節(jié)異常均會改變正常情況下的動態(tài)平衡[15]，從而導致肝臟內(nèi)脂肪堆積等一系列變化[16]。TC、TG、HDL、LDL反應脂質(zhì)代謝情況，而ALT、AST反映肝細胞炎性反應、受損以及肝臟損害程度的指標。胰島素抵抗、脂質(zhì)過氧化反應是NAFLD發(fā)病的重要環(huán)節(jié)，TNF-α通過降低胰島素受體-酪氨酸激酶的活性[17]、介導肝臟損傷的重要炎性反應因子[18]、減弱線粒體的呼吸功能[19]等參與NAFLD的發(fā)生發(fā)展。NF-кB作為一種核轉(zhuǎn)錄因子，在肝細胞凋亡的中心環(huán)節(jié)-線粒體損傷中發(fā)揮重要作用，NF-кB活化后作用于TNF-α，產(chǎn)生大量炎性遞質(zhì)，激活bax等線粒體上的促凋亡蛋白，導致肝細胞凋亡，參與NAFLD發(fā)展進程[20]，TNFα/NF-κB信號通路在各種信號刺激的條件下促進了NAFLD的發(fā)展[21]。TGF-β1通過誘導肝細胞凋亡和激活肝星狀細胞促進細胞外基質(zhì)的形成，孫丹莉等人研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β1隨脂肪肝程度加重而升高，并且與肝活檢所見肝組織炎性反應改變密切相關(guān)[22]。TLR4信號途徑的激活，還可通過促進促炎性反應細胞因子的合成與釋放，增強胰島素受體底物（IRS）中絲氨酸發(fā)生磷酸化，進一步調(diào)控下游酪氨酸激酶的活性下調(diào)，并且能夠阻斷下游胰島素信號的遞增傳遞。同時，TLR4信號途徑的激活，還可以通過抑制胰島素受體有效結(jié)合IRS-1，進一步誘發(fā)機體內(nèi)部葡萄糖轉(zhuǎn)運體（Glucose-transporter，GLUT）4的表達水平降低，最終誘發(fā)肝臟胰島素抵抗的發(fā)生[23]。TLR4作為Toll樣受體家族中的重要環(huán)節(jié)，在各種肝臟細胞中廣泛表達，其介導的信號通路參與胰島素抵抗，引起氧化應激，誘發(fā)炎性反應[24]?？偠灾?，TNF-α、NF-кB、TGF-β1和TLR4在NAFLD的發(fā)病機制中發(fā)揮作用，TC、TG、HDL、LDL、TNF-α、NF-кB、TGF-β1和TLR4是反應NAFLD發(fā)生發(fā)展在腸-肝軸中“肝軸”的體現(xiàn)。

腸道黏膜不僅承擔著消化、吸收營養(yǎng)物質(zhì)的功能，同時也是機體最大的儲存細菌器官和阻擋毒素、病原微生物侵入的主要門戶[25]，腸道黏膜屏障包括生物屏障、機械屏障、免疫屏障和化學屏障，腸道黏膜屏障功能在NAFLD發(fā)病中占有重要作用[26]。腸黏膜通透性主要與機械屏障相關(guān)，腸黏膜機械屏障主要由腸頂端膜腸上皮細胞（Intestinal Epithelial Cells，IECs）和上皮緊密連接蛋白（Tight Junction Protein，TJP）與菌膜三者組成，緊密連接作為腸黏膜機械屏障最重要的連接方式，由Occludin蛋白、Claudin蛋白、ZOs等結(jié)構(gòu)蛋白及各類連接蛋白分子共同組成[27]。“腸-肝軸”與NAFLD發(fā)生密切相關(guān)，NAFLD發(fā)生時腸黏膜機械屏障破壞，通透性增加。Xin D[28]通過對28名轉(zhuǎn)氨酶升高的NAFLD患者、30名轉(zhuǎn)氨酶正常的NAFLD患者以及34名健康志愿者進行研究發(fā)現(xiàn)，在NAFLD患者中，ZO-1和Occludin表達水平與轉(zhuǎn)氨酶水平呈負相關(guān)，說明了腸上皮細胞緊密連接蛋白的表達與NAFLD發(fā)生密切相關(guān)。腸黏膜的屏障作用還包括免疫屏障，在腸黏膜免疫屏障中起主導作用的是以sIgA為主的體液免疫，防御病原菌在腸黏膜黏附和定植[29]。最主要的體液免疫防御因子sIgA，通過包裹、封閉外來的病菌與IEC的特異結(jié)合位點，能夠讓其喪失黏附IEC的能力。此外，sIgA不僅能夠阻止腸黏膜上皮細胞識別及攝取細菌、毒素和其他有害分子，依靠腸道機械蠕動對病原體和毒素的清除，而且能夠減弱外部抗原刺激所引起的免疫耐受的形成，阻止腸道共棲的有益菌群對腸黏膜免疫屏障系統(tǒng)產(chǎn)生的免疫應答[30]。李生[31]通過動物實驗研究發(fā)現(xiàn)，非酒精性脂肪性肝炎形成過程中小腸分泌液中sIgA含量顯著降低，說明腸道免疫屏障受到損害，并且其損害可能與腸道脂質(zhì)過氧化增強相關(guān)。總言之，Occludin、ZO-1、sIgA是評價腸黏膜屏障功能的重要指標，是反應NAFLD發(fā)生發(fā)展在腸-肝軸中“腸軸”的體現(xiàn)。

Critic賦權(quán)法結(jié)合了無量綱化與協(xié)方差矩陣統(tǒng)一度量以借助比較評價確定客觀權(quán)重，具體到本研究，權(quán)重值的大小則表示其對疾病的貢獻度大小。實驗結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組“肝軸”以及“腸軸”各個指標權(quán)重之和Z總1、Z總2比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），說明NAFLD模型大鼠出現(xiàn)了肝臟以及腸黏膜屏障的病理變化。與模型組比較，鹽酸吡格列酮組、疏肝利膽組、通腑泄?jié)峤M以及大柴胡湯組“肝軸”各個指標權(quán)重之和Z總1比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），說明鹽酸吡格列酮、疏肝利膽方劑要素、通腑泄?jié)岱絼┮匾约按蟛窈鷾梢燥@著調(diào)節(jié)NAFLD模型大鼠的肝臟脂質(zhì)代謝以及肝臟免疫，而健脾化痰方劑要素調(diào)節(jié)“肝軸”效應不顯著。鹽酸吡格列酮組、健脾化痰組、通腑泄?jié)峤M以及大柴胡湯組“腸軸”各個指標權(quán)重之和Z總2比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），說明鹽酸吡格列酮、健脾化痰方劑要素、通腑泄?jié)岱絼┮匾约按蟛窈鷾梢燥@著調(diào)節(jié)NAFLD模型大鼠腸黏膜屏障功能，而疏肝利膽方劑要素調(diào)節(jié)“腸軸”的效應不顯著。

腸道菌群由大約1 014種微生物構(gòu)成，共同參與宿主的代謝和免疫，可以應對機體受外部刺激所產(chǎn)生的各種適應性反應[32-35]。肝臟和胃腸道在解剖、功能上關(guān)系密切，近些年國外研究[36-37]顯示，肝臟疾病的發(fā)生、發(fā)展與機體腸道微生態(tài)變化密切相關(guān)，腸道菌群失調(diào)及內(nèi)源性內(nèi)毒素血癥在NAFLD發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用[38-40]，通過調(diào)節(jié)腸道菌群，恢復腸道微生態(tài)平衡，對延緩乃至阻止NAFLD的進展可能有重要的作用，成為預防及治療該病的新方法[41]。本實驗結(jié)果顯示通腑泄?jié)岱絼┮貙Ω纳芅AFLD模型大鼠腸道菌群優(yōu)勢顯著，其通過提高NAFLD大鼠腸道菌群中擬桿菌屬、薩特氏菌屬、假丁酸弧菌屬細菌和Akkermansia muciniphila等有益菌的相對豐度，改善NAFLD大鼠的糖脂質(zhì)代謝，減少肝臟中脂肪沉積，抑制腸道內(nèi)炎性反應，維持腸黏膜屏障的完整性。

中醫(yī)學中，肝脾密切相關(guān)，尤其在病理方面，肝病傳脾，脾病及肝?！端貑枴び駲C真臟論》云：“肝受氣于心，傳之于脾”，《素問·寶命全形論》云：“土得木而達”?！峨y經(jīng)·七十七難》說：“所謂治未病者，見肝之病，則知肝當傳之于脾，故先實脾氣，無令得受肝之邪”?！督饏T要略》更是說：“夫治未病者，見肝之病，知肝傳脾，當先實脾，四季脾旺不受邪，即勿補之;中工不曉其傳，見肝之病，不解實脾，惟治肝也”。NAFLD為中醫(yī)肝、脾同病之典范，其中醫(yī)病機為肝膽氣機不利，脾虛痰濕中阻，陽明濁氣不降，大柴胡湯通過將有疏利肝膽作用的藥物—柴胡、黃芩、白芍，有健脾化痰作用的藥物—半夏、生姜、大棗以及具有通腑泄?jié)嶙饔玫乃幬铩簏S、枳實配伍，達到肝、脾、大腸同治的作用，并且通過與NAFLD西醫(yī)學病理機制進行研究，發(fā)現(xiàn)方中各方劑要素與“腸-肝軸”病機軸上靶點的對應關(guān)系，體現(xiàn)了大柴胡湯配伍的科學性。

中醫(yī)復方治病具有多種配伍組合形式及“多靶點”的特點，采用證候靶點與疾病靶點（作用環(huán)節(jié)）相結(jié)合的研究模式，將是破解中醫(yī)復方配伍規(guī)律的重要途徑之一。本實驗研究即是采用此種研究模式，證實了大柴胡湯及其各方劑要素在治療高脂高糖飼料喂養(yǎng)的NAFLD模型大鼠中，對應“肝膽氣機不利”證候的方劑要素—疏肝利膽方劑要素主要對應西醫(yī)學中“腸-肝軸”作用機制中的“肝軸”，而對應“脾虛痰濕中阻”證候的方劑要素—健脾化痰方劑要素主要對應“腸-肝軸”作用機制中的“腸軸”，對應“陽明濁氣不降”證候的方劑要素—通腑泄?jié)岱絼┮?，主要調(diào)節(jié)腸道菌群，而同時也對肝臟脂質(zhì)代謝、肝臟免疫以及腸黏膜屏障有調(diào)節(jié)作用。通過各方劑要素配合，全方大柴胡湯亦對應西醫(yī)“腸-肝軸”中的“肝軸”和“腸軸”。本研究證實了大柴胡湯配伍方法的西醫(yī)病理機制規(guī)律，為開展中藥復方的靶點作用機制研究提供了思路和方法。

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（2019-07-09收稿 責任編輯：徐穎）