周慕平，劉娜，文君，黃艷，鄧禮元

（邵陽市婦幼保健院檢驗(yàn)科，湖南 邵陽 422000）

染色體非整倍體疾病是染色體數(shù)目異常（增多或減少）而引發(fā)的非單倍體整數(shù)倍疾病[1]，目前，尚無特異性治療方案，因此，需在孕早期產(chǎn)檢進(jìn)行診斷方能降低缺陷胎兒出生率，同時(shí)，減輕患病家庭的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，提升生育質(zhì)量[2]。近年來，無創(chuàng)產(chǎn)前篩查（NIPT）作為新型胎兒染色體疾病檢測技術(shù)應(yīng)用于產(chǎn)前檢測領(lǐng)域，相較于傳統(tǒng)的臍血穿刺、羊水穿刺、胎兒組織活檢、絨毛活檢等檢查手段更具權(quán)威性，且安全性高，通過高通量測序技術(shù)檢測產(chǎn)前孕婦外周血中胎兒游離DNA（cell free fetal DNA，cffDNA），使產(chǎn)前篩查、診斷體系更加完整，進(jìn)一步優(yōu)化產(chǎn)前檢測技術(shù)，提升產(chǎn)前檢測整體質(zhì)量[3]。NIPT 適用于21 三體綜合征、18三體綜合征、13 三體綜合征等目標(biāo)疾病。有文獻(xiàn)表明[4]，無創(chuàng)產(chǎn)前DNA 檢測技術(shù)靈敏度、特異性高，假陽性率低，在全球廣泛使用。2012 年，美國母胎醫(yī)學(xué)會(huì)(SMFM)和美國婦產(chǎn)科醫(yī)師學(xué)會(huì)(ACOG)更是針對(duì)NIPT 發(fā)表了一致委員會(huì)指導(dǎo)意見，將NIPT 全面推廣至高危染色體非整倍體人群初篩檢測中[5]。本研究選取 2017 年 6 月至 2019 年 6 月某院產(chǎn)科收治的產(chǎn)前檢查孕婦102 例作為研究對(duì)象，探究無創(chuàng)產(chǎn)前篩查檢測胎兒染色體非整倍體異常的臨床價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2017年6月至2019年6月某院產(chǎn)科收治的產(chǎn)前檢查孕婦102 例作為研究對(duì)象。孕婦年齡21～37歲，平均年齡（29.64±2.07）歲；體質(zhì)量53～72 kg，平均體質(zhì)量（64.51±4.28）kg；孕周 11～28 周，平均孕周（22.19±2.88）周；孕次1～3次，平均孕次（2.03±0.07）次；高齡6例。唐氏篩查：高風(fēng)險(xiǎn)73 例，中等風(fēng)險(xiǎn)29 例，胎兒異常8 例。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)?；颊咧橥獠⒑炇鹬橥鈺?/p>

排除標(biāo)準(zhǔn)：①夫婦一方染色體異常，具有染色體異常分娩史，具體為：夫婦一方存在染色體異常的待產(chǎn)孕婦，具備染色體異常分娩史，均有介入性產(chǎn)前明確診斷指征，應(yīng)盡快執(zhí)行介入性產(chǎn)前診斷；②待產(chǎn)1年內(nèi)，孕婦接受過細(xì)胞治療、免疫治療、移植手術(shù)、異體輸血等，會(huì)直接干擾高通量測序產(chǎn)前篩查與診斷結(jié)果，降低篩查、診斷的準(zhǔn)確度，具體為：若產(chǎn)婦在待產(chǎn)1年內(nèi)，接受細(xì)胞治療、移植手術(shù)、細(xì)胞治療等非原有細(xì)胞和組織中帶有異常21-三體、18-三體、13-三體，則細(xì)胞在進(jìn)行新陳代謝后，基因組DNA 會(huì)混合進(jìn)孕婦外周血漿，使檢測呈假陽性，導(dǎo)致檢測出現(xiàn)錯(cuò)誤結(jié)果；③影像學(xué)檢查胎兒懷疑患有其他染色體異?；蛭⑷笔⒅貜?fù)綜合征，具體為：上述疾病無法應(yīng)用NIPT 進(jìn)行檢測，若胎兒影像學(xué)檢測懷疑患有其他染色體異?；蛭⑷笔⒅貜?fù)綜合征，應(yīng)盡快執(zhí)行介入性產(chǎn)前診斷；④各種高風(fēng)險(xiǎn)基因病人群，具體為：基因病無法應(yīng)用NIPT進(jìn)行檢測，若家族有高風(fēng)險(xiǎn)基因病遺傳史，應(yīng)盡快執(zhí)行介入性產(chǎn)前診斷[6]。

1.2 方法 首先，樣本采集5 mL外周靜脈血，置于乙二胺四乙酸抗凝管中，明確標(biāo)注取血日期及血漿編號(hào)。4 ℃環(huán)境下1 600 r/min離心10 min分離血漿。對(duì)初步分離出的血漿再次使用離心機(jī)，同樣以1 600 r/min轉(zhuǎn)速行離心操作10 min，除去白細(xì)胞和殘留碎片，取微量離心管，將離心后血漿倒入其中，于-80 ℃環(huán)境中貯存。選取新鮮無污染且質(zhì)量良好樣本送去檢測[7]。其次，在BD管中加入Bindding buffer 2 mL、血漿樣本1 mL、磁珠20 μL、Proteinase K溶液50 μL，將該BD管垂直放置于12 r/min轉(zhuǎn)速混合儀中，正常室溫條件下使液體混合。用移液器取出混合液中磁珠，放入分離磁珠專用臺(tái)上試管內(nèi)去除上層清液。離心管中加入Wash buffer Ⅰ500 μL，放置至徹底沉淀，去除上層清液。再將Wash buffer Ⅱ500 μL緩慢加入離心管中，重復(fù)上述操作。再將Wash buffer Ⅱ550 μL緩慢加入離心管中，重復(fù)上述操作。離心管中加入Elution buffer 100 μL，液體混勻后置于50 ℃恒溫水浴鍋中，每2分鐘混合1次，取混合液在磁珠分離臺(tái)處放置，去除上層清液。利用核酸定量計(jì)生成DNA 文庫，測定核酸片段數(shù)量，計(jì)算染色體覆蓋深度值，按照此步驟依次進(jìn)行可直接推算出風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)。最后，檢測孕婦分娩風(fēng)險(xiǎn)高的須通過羊水穿刺、臍血穿刺等手段進(jìn)一步分析染色體核型，以診斷胎兒染色體非整倍體情況[8]。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察納入孕婦性染色體非整倍異常情況，并對(duì)篩查高風(fēng)險(xiǎn)孕婦行羊水穿刺、臍血穿刺等手段分析染色體核型，評(píng)價(jià)無創(chuàng)產(chǎn)前篩查與染色體核型分析結(jié)果是否一致。同時(shí)，對(duì)無創(chuàng)產(chǎn)前低風(fēng)險(xiǎn)篩查孕婦進(jìn)行定期隨訪。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 將所有數(shù)據(jù)輸入Excel表中進(jìn)行描述性分析。

2 結(jié)果

2.1 性染色體非整倍異常檢測情況 收取外周血標(biāo)本102份，NIPT檢測顯示性染色體非整倍異常16例。經(jīng)咨詢發(fā)現(xiàn)，16 例孕婦均自愿接受檢測，其中NIPT 與染色體核型分析結(jié)果一致 6 例，包括（45，X）3 例；（46，XXX）1 例；（46，XX）1 例；（47，XXY）1例，見表1。

表1 性染色體非整倍異常檢測情況

2.2 無創(chuàng)產(chǎn)前篩查符合率分析 收取外周血標(biāo)本102 份，檢測顯示高風(fēng)險(xiǎn)8 例，檢出陽性率7.84%。經(jīng)染色體核型分析和無創(chuàng)產(chǎn)前篩查，發(fā)現(xiàn)兩種檢測結(jié)果完全相同，符合率高達(dá)100.00%，見表2。

表2 染色體核型分析和無創(chuàng)產(chǎn)前篩查檢測結(jié)果

3 討論

染色體非整倍體包括21-三體異常、18-三體異常、13-三體異常等，是遺傳缺陷的一種表現(xiàn)形式。據(jù)研究[9]，染色體非整倍體疾病發(fā)生率與孕婦年齡呈正相關(guān)?；诖?，孕婦產(chǎn)齡越高所面臨的風(fēng)險(xiǎn)越高，胎兒患病率也就越高，臨床建議高齡孕婦產(chǎn)前行染色體非整倍體檢查診斷。傳統(tǒng)診斷技術(shù)的創(chuàng)傷性較高，孕婦行檢查易發(fā)生宮內(nèi)感染、流產(chǎn)等現(xiàn)象，危及胎兒健康。為有效降低產(chǎn)前檢測風(fēng)險(xiǎn)，需使用新型產(chǎn)前篩查手段。

20 世紀(jì)末，相關(guān)學(xué)者發(fā)現(xiàn)，孕婦外周血內(nèi)存在胎兒DNA游離片段，胎兒有150 bp 源于胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞形成的DNA 片段，并在母體妊娠5 周后可檢測顯示[10]。不少學(xué)者開始按照這一探索思路進(jìn)行深入研究，并將這一技術(shù)應(yīng)用到胎兒染色體非整倍體疾病篩查中。無創(chuàng)產(chǎn)前DNA 檢測作為新型產(chǎn)前診斷技術(shù)之一，具有安全、無創(chuàng)、快速等優(yōu)勢，后應(yīng)用高通量測序技術(shù)檢測采集母體外周血中游離DNA 數(shù)目，判斷胎兒染色體數(shù)據(jù)異常情況[11]。本研究結(jié)果顯示，102份標(biāo)本中，NIPT 檢測顯示性染色體非整倍異常16 例。經(jīng)咨詢發(fā)現(xiàn)，16 例孕婦均自愿接受檢測，其中NIPT 與染色體核型分析結(jié)果一致6 例。檢測顯示高風(fēng)險(xiǎn)8 例，檢出陽性率7.84%。染色體核型分析結(jié)果等同于無創(chuàng)產(chǎn)前篩查檢測結(jié)果。

綜上所述，孕早期孕婦可通過無創(chuàng)產(chǎn)前篩查及早發(fā)現(xiàn)胎兒異常染色體非整倍體疾病存在，并在無發(fā)生影響的情況下“止損”處理，降低缺陷兒降生率[12]。結(jié)合孕婦實(shí)際情況選擇合適臨床檢測方式盡早行產(chǎn)前篩查，針對(duì)胎兒染色體非整倍體疾病產(chǎn)前篩查應(yīng)用無創(chuàng)產(chǎn)前DNA 檢測具有重要臨床價(jià)值，由于該檢測技術(shù)敏感性較高，因此，具有較高的準(zhǔn)確性，且為無創(chuàng)操作，對(duì)孕婦及胎兒的傷害較小，是提高生育質(zhì)量的重要技術(shù)。