潘承慧，齊東月，趙大云

（上海交通大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院，上海 200240）

大豆皂苷（Soyasaponin）是由非極性的苷元（Soyasapogenol）和極性的低聚糖鏈組成，主要來(lái)源于豆類(lèi)植物[1-2]。根據(jù)苷元結(jié)構(gòu)，一般將大豆皂苷分為A類(lèi)、B類(lèi)、C類(lèi)、E類(lèi)和DDMP類(lèi)[3]。目前大豆皂苷的性質(zhì)、功能以及應(yīng)用的研究以A類(lèi)和B類(lèi)為主[4-8]。大豆皂苷具有降血脂[9]、降血壓[10]、減少肝細(xì)胞損傷[11]、抑制癌細(xì)胞增殖[12]以及抗氧化抗炎[13]等多種生理功能?；钚猿煞衷隗w內(nèi)的生物利用度對(duì)其功效發(fā)揮具有重要意義[14-15]。體內(nèi)外代謝研究表明，大豆皂苷在體內(nèi)無(wú)法直接被吸收，而是進(jìn)一步降解為苷元發(fā)揮功效，且口服生物利用度不理想[16-18]。

腸道是消化吸收的主要部位，研究功能性食品及藥物的腸道吸收特性，可指導(dǎo)選擇適宜的制劑方式，從而提高制劑的生物利用度。腸吸收的研究方法包括離體外翻腸囊模型、Caco-2細(xì)胞模型、在體循環(huán)腸灌流和在體單向腸灌流模型[19-22]。在體單向腸灌流模型因簡(jiǎn)單、易操作，實(shí)驗(yàn)條件與實(shí)際腸道內(nèi)環(huán)境接近，國(guó)內(nèi)外廣泛應(yīng)用該技術(shù)于研究各種化學(xué)藥物的吸收行為，在中藥及功能食品研究中也日益普及，成為預(yù)測(cè)活性成分在體內(nèi)吸收特征的重要手段[23-24]。當(dāng)前，苷元在腸道的吸收、分布、代謝和排泄等規(guī)律研究尚未見(jiàn)報(bào)道，而吸收是苷元可利用的關(guān)鍵階段，直接影響其生理功效作用[25]。因此，研究苷元在腸道的吸收特征對(duì)提高其在實(shí)際應(yīng)用中的附加值具有關(guān)鍵的指導(dǎo)意義。

本研究以大豆皂苷元A和B為研究對(duì)象，建立了大豆皂苷元A和B的HPLC分析方法和可靠的在體單向腸灌流模型，并通過(guò)該模型考察了腸段、苷元?jiǎng)┝亢湍懼纫蛩貙?duì)其在大鼠腸道的表觀(guān)滲透系數(shù)和吸收速率常數(shù)的影響，以闡明苷元在小腸中的吸收特征和吸收機(jī)制，為其在食品和制藥行業(yè)的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

大豆皂苷苷元A和B樣品 純度＞98%，由實(shí)驗(yàn)室制備[26]；大豆皂苷苷元A標(biāo)準(zhǔn)品（批號(hào)：79086525）、大豆皂苷苷元B標(biāo)準(zhǔn)品（批號(hào)：SLCC1104） 純度＞98%，戊巴比妥鈉 分析純，美國(guó)Sigma公司；生理鹽水 山東康寧藥業(yè)有限公司；Krebs-Ringer緩沖液 北京雷根生物技術(shù)有限公司；其他有機(jī)試劑 均為分析純，上海凌鋒化學(xué)試劑有限公司；雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠（6～8周齡，共24只）體質(zhì)量（250±20） g，北京維通利華有限公司，經(jīng)上海交通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理與使用委員會(huì)批準(zhǔn)（IACUC），批準(zhǔn)號(hào)：A2019086，飼養(yǎng)在12 h光照12 h黑暗循環(huán)條件下，室溫保持24 ℃，飼喂不含大豆制品的飼料，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。

HL-1S型恒流泵 上海青浦滬西儀器廠(chǎng)；R-300型超高效液相色譜儀（UPLC-PDA-ELSD） 美國(guó)Waters公司；DM 4000型光學(xué)顯微鏡 德國(guó)Leica公司；Sirion型高分辨場(chǎng)發(fā)射掃描電子顯微鏡 美國(guó)FEI公司；Tecnai G2型生物型透射電鏡美國(guó)Thermoscientific公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 溶液配制

1.2.1.1 大豆皂苷苷元標(biāo)準(zhǔn)液的配制 準(zhǔn)確稱(chēng)取大豆皂苷苷元A和B標(biāo)準(zhǔn)品1.00 mg，分別用甲醇定容至10 mL容量瓶中，配制成100 μg/mL的母液，置于4 ℃冰箱中保存，備用。

1.2.1.2 大豆皂苷苷元灌流液的配制 準(zhǔn)確稱(chēng)取適量大豆皂苷苷元A和B，溶解于Krebs-Ringer緩沖液，配制成10 mg/L（低劑量）和50 mg/L（高劑量）的灌流液。空白灌流液為Krebs-Ringer緩沖液。

1.2.2 液相色譜條件及方法學(xué)考察

1.2.2.1 色譜條件 色譜柱：Inertsil ODS C18柱 (i.d.250 mm×4.6 mm，5 μm)，進(jìn)樣體積：10 μL，柱溫：25 ℃，流 動(dòng) 相：乙 腈-正 丙 醇-水-乙 酸（80:6:13.9:0.1，v:v:v:v），流速：0.9 mL/min，等度洗脫；紫外檢測(cè)范圍200～600 nm，檢測(cè)波長(zhǎng)205 nm；蒸發(fā)光檢測(cè)器參數(shù)：漂移管溫度52 ℃，增益值1，氣體壓力35 psi。

1.2.2.2 專(zhuān)屬性考察 分別吸取空白灌流液、大豆皂苷苷元標(biāo)準(zhǔn)液和灌流液適量進(jìn)行液相檢測(cè)，得到色譜圖，考察該色譜方法的專(zhuān)屬性。

1.2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制作 精密吸取大豆皂苷苷元標(biāo)準(zhǔn)母液（100 μg/mL）適量，制備系列濃度標(biāo)準(zhǔn)液，分別為10、20、30、40、50、70、100 μg/mL，精密吸取各濃度標(biāo)準(zhǔn)液10 μL進(jìn)行色譜測(cè)定，得到苷元A和B的峰面積。以苷元質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），繪制雙對(duì)數(shù)坐標(biāo)，并進(jìn)行線(xiàn)性回歸，計(jì)算苷元A和B的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程。

1.2.2.4 精密度考察 分別吸取濃度為20、50和100 μg/mL的大豆皂苷苷元標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)樣測(cè)定，每個(gè)濃度日內(nèi)間隔測(cè)定5次，連續(xù)測(cè)定5 d，得到苷元A和B的峰面積，計(jì)算其含量，考察該方法日內(nèi)和日間精密度。

1.2.2.5 回收率考察 分別精密吸取濃度為20、50和100 μg/mL的大豆皂苷苷元標(biāo)準(zhǔn)液，進(jìn)樣檢測(cè)，得到峰面積代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程計(jì)算其實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度，以實(shí)測(cè)濃度與配制濃度的比值計(jì)算該方法的回收率。

1.2.2.6 穩(wěn)定性考察 取濃度為10 mg/L的大豆皂苷苷元灌流液，置于37 ℃恒溫水浴，分別測(cè)定0、30、60、90、120 min時(shí)間點(diǎn)下苷元A和B的峰面積，計(jì)算其濃度，并與0 min時(shí)測(cè)得的濃度作百分比，考察灌流液在試驗(yàn)過(guò)程中的穩(wěn)定性。

1.2.3 大鼠在體單向腸灌流實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)前，將SD大鼠禁食12 h，自由飲水。腹腔注射1%戊巴比妥鈉（40 mg/kg）進(jìn)行麻醉，麻醉后置于電熱墊，保持體溫37 ℃，并將背位固定于手術(shù)臺(tái)上。沿腹中線(xiàn)剪開(kāi)腹腔部位，切口為3～4 cm，確定四個(gè)腸段部位：十二指腸段在距幽門(mén)1 cm處開(kāi)始向下取5 cm，空腸腸段在距十二指腸出口端4 cm處開(kāi)始向下取5 cm，回腸腸段在距和盲腸連接處上端2 cm處開(kāi)始向上取5 cm，結(jié)腸腸段在距和盲腸連接處開(kāi)始向下取10 cm。四個(gè)腸段兩端切口插管并用手術(shù)線(xiàn)結(jié)扎，用37 ℃生理鹽水緩慢將腸內(nèi)容物沖洗干凈，排空生理鹽水后，連接恒流泵，先用Krebs-Ringer緩沖液（提前37 ℃預(yù)熱）以0.2 mL/min 的流速平衡各腸段30 min，再切換為大豆皂苷苷元灌流液開(kāi)始試驗(yàn)，分別在15、30、45、60、75、90、105、120 min時(shí)間點(diǎn)收集流出液于已知質(zhì)量離心管中，灌流期間用浸濕生理鹽水的棉布覆蓋腹腔，保持濕潤(rùn)，間斷給予1%戊巴比妥鈉維持麻醉狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，再次稱(chēng)取收集后的離心管質(zhì)量，剪取各灌流腸段部位，分別測(cè)量?jī)?nèi)徑及長(zhǎng)度。

1.2.4 大鼠小腸形態(tài)學(xué)變化實(shí)驗(yàn) 驗(yàn)證大鼠在體單向腸灌流模型的可靠性，采用50 mg/L苷元灌流液，在有膽汁情況下按1.2.3灌流操作，分別取灌流前（0 h）、灌流2和4 h的大鼠腸段1 cm，生理鹽水清洗除去表面雜垢后，立即投入預(yù)先配好的固定液中保存24 h后，進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀(guān)察。

1.2.4.1 光學(xué)顯微鏡 將切下的空腸段投入預(yù)先配好的4%多聚甲醛溶液保存過(guò)夜，經(jīng)脫水、石蠟包埋、切片（厚度3 μm）以及HE染色，光學(xué)顯微鏡低倍鏡下觀(guān)察切片并測(cè)量空腸壁厚度、粘膜厚度、皺襞高度、皺襞表面積，平行測(cè)定5次，計(jì)算其平均值。

1.2.4.2 掃描電鏡 將切下的空腸段投入預(yù)先裝有2.5%戊二醛固定液的小瓶固定過(guò)夜，脫水程序如下：0.1 mol/L PBS緩沖液漂洗，10 min×4次；用1%四氧化鋨0.2 mL二次固定2 h；再次用0.1 mol/L PBS緩沖液漂洗，10 min×4次；用50%、70%、90%乙醇清洗15 min；最后用90%乙醇：90%丙酮（1:1）和90%丙酮各脫水20 min。將樣品放進(jìn)CO2干燥機(jī)進(jìn)行臨界干燥3 h，干燥后噴金，進(jìn)行掃描電鏡觀(guān)察。

1.2.4.3 透射電鏡 將切下的空腸段投入預(yù)先裝有2.5%戊二醛固定液的小瓶固定過(guò)夜，按照1.2.3.2脫水程序處理方法，再用100%丙酮進(jìn)一步脫水，15 min×3次；丙酮：環(huán)氧樹(shù)脂（1:1）0.5 mL浸泡1 h，再用丙酮：環(huán)氧樹(shù)脂（1:2）0.5 mL浸泡過(guò)夜；用環(huán)氧樹(shù)脂0.4 mL置換，4 h×2次，經(jīng)樹(shù)脂包埋后在60 ℃烘箱里聚合48 h，取出進(jìn)行超薄切片（大小1 mm3），最后用醋酸鈾和檸檬酸鉛染色，進(jìn)行透射電鏡觀(guān)察。

1.2.5 苷元腸吸收特性的單因素影響實(shí)驗(yàn) 探究不同因素對(duì)大豆皂苷苷元在腸道的吸收影響，將大鼠分為低劑量組和高劑量組（10 、50 mg/L，有膽汁）、有膽汁組和無(wú)膽汁組（不結(jié)扎膽管，結(jié)扎膽管，50 mg/L），分別考察不同腸段、劑量和膽汁對(duì)大豆皂苷苷元灌流液在大鼠小腸的吸收能力。

1.2.6 灌流液樣品HPLC測(cè)定 準(zhǔn)確吸取灌流液樣品200 μL，置于1.5 mL離心管，再加入800 μL內(nèi)標(biāo)液，渦旋混勻1 min后，12000 r/min下離心10 min，取上清液，50 ℃水浴加熱氮吹至干后，加入100 μL甲醇溶解，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾，取濾液進(jìn)行色譜分析，得到灌流液中苷元濃度，并計(jì)算苷元在體的吸收速率常數(shù)Ka（s-1）和表觀(guān)滲透系數(shù)Papp（cm/s）。

采用重量法，校正因腸內(nèi)水分吸收引起的灌流液質(zhì)量變化。吸收速率常數(shù)Ka（s-1）、表觀(guān)滲透系數(shù)Papp（cm/s）計(jì)算公式如下：

式中：Cin和Cout分別表示腸道進(jìn)口灌流液和出口收集液的樣品濃度，mg/L；Vin和Vout分別表示腸道進(jìn)口灌流液和出口收集液的樣品體積，mL；Qin表示灌流速度，0.2 mL/min；r表示灌流腸段的內(nèi)徑，cm；l表示灌流腸段的長(zhǎng)度，cm。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Origin軟件進(jìn)行繪圖，采用SPSS 24.0軟件系統(tǒng)進(jìn)行方差分析，結(jié)果以表示，采用Tukey HSD檢驗(yàn)組間顯著性，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法學(xué)考察

HPLC色譜參考Rupasinghe等[27]的方法，分別將空白灌流液、大豆皂苷苷元標(biāo)準(zhǔn)液和灌流液進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如圖1所示?？瞻坠嗔饕褐械奈镔|(zhì)在4.11 min洗脫出來(lái)，而苷元A和B的保留時(shí)間分別為8.34和12.45 min，且分離度較好，無(wú)其他物質(zhì)干擾，說(shuō)明此色譜方法適于兩種苷元及其灌流液的分析。

圖1 大豆皂苷苷元標(biāo)準(zhǔn)液及灌流液的HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of soyasapogneols standard and intestinal liquid

蒸發(fā)光散射檢測(cè)器信號(hào)與峰面積的關(guān)系符合Y=aXb，兩者的對(duì)數(shù)呈線(xiàn)性關(guān)系[28]。對(duì)檢測(cè)得到的系列濃度苷元峰面積和對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度取對(duì)數(shù)，經(jīng)線(xiàn)性回歸計(jì)算，得到苷元A的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程為：Y=0.062X1.610（R2=0.9997），苷元B的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)為：Y=0.225X1.466（R2=0.9994），說(shuō)明苷元A和B在濃度范圍10～100 μg/mL內(nèi)擬合度較好。苷元A和B的檢測(cè)限（LOD，S/N=3）分別為4.06和2.17 μg/mL，定量限（LOQ，S/N=10）為10.81和5.77 μg/mL。

大豆皂苷苷元的精密度、回收率和穩(wěn)定性結(jié)果如表1所示。在20、50、100 μg/mL濃度時(shí)，苷元A和B的日內(nèi)和日間精密度RSD（n=5）均小于9%，苷元A提取回收率在98.42%～103.43%，RSD小于6%，苷元B提取回收率在94.56%～104.32%，RSD小于7%，說(shuō)明此HPLC條件下的精密度良好，回收率符合苷元的檢測(cè)要求。苷元A和B在37 ℃水浴不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)得的濃度百分比RSD分別為3.23%和4.56%，表明苷元在37 ℃水浴時(shí)熱穩(wěn)定性良好。

2.2 大鼠空腸的形態(tài)學(xué)變化

選取空腸段，考察灌流前（0 h）、灌流2和4 h時(shí)的形態(tài)學(xué)變化，光鏡測(cè)量空腸各結(jié)構(gòu)的結(jié)果見(jiàn)表2，掃描電鏡和透射電鏡觀(guān)察結(jié)果見(jiàn)圖2。

由表2可知，隨著灌流時(shí)間的增長(zhǎng)，空腸腸壁厚度、粘膜厚度減小，皺襞高度以及表面積都呈現(xiàn)降低的趨勢(shì)，灌流2 h組參數(shù)分別為646.42、524.57、391.93 μm和63930.46 μm2，空腸腸壁厚度、皺襞表面積與灌流前差異不顯著（P＞0.05），其他差異顯著；而灌流4 h組顯著減少（P＜0.05），這說(shuō)明，此實(shí)驗(yàn)采用的單向在體灌流模型在2 h內(nèi)腸壁受到的機(jī)械損傷程度較低，從而更好地減小實(shí)驗(yàn)誤差，測(cè)得的吸收參數(shù)可靠。

掃描電鏡觀(guān)察灌流內(nèi)壁結(jié)果發(fā)現(xiàn)，灌流前大鼠空腸皺襞表面光滑，腺體大小一致，呈有序排列，隱凹結(jié)構(gòu)明顯；受灌流機(jī)械作用，皺襞表面易出現(xiàn)破裂，灌流2 h組有輕微裂口，隱凹深度變淺；灌流4 h組破裂程度加重，粘膜內(nèi)物質(zhì)有溶出現(xiàn)象，隱凹結(jié)構(gòu)難以觀(guān)察。

透射電鏡觀(guān)察內(nèi)部細(xì)胞結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)，灌流前大鼠空腸粘膜杯狀細(xì)胞數(shù)量多，排列整齊；隨著灌流時(shí)間的延長(zhǎng)，粘膜杯狀細(xì)胞和上皮吸收細(xì)胞數(shù)量減少，灌流2 h組細(xì)胞結(jié)構(gòu)保留相對(duì)完整，灌流4 h組細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重，細(xì)胞膜破裂，細(xì)胞器分散明顯。

從空腸表觀(guān)和內(nèi)部形態(tài)觀(guān)察結(jié)果來(lái)看，由于灌流的機(jī)械作用，大鼠腸道存在不同程度的損傷，且灌流時(shí)間越長(zhǎng)，損傷越嚴(yán)重，為保證苷元腸吸收實(shí)驗(yàn)的可靠性，選擇灌流2 h為實(shí)驗(yàn)時(shí)長(zhǎng)。

表1 大豆皂苷苷元HPLC的精密度、回收率和穩(wěn)定性考察（n=5）Table 1 Accuracy, recovery and stability of soyasapogenol by HPLC (n=5)

表2 空腸結(jié)構(gòu)形態(tài)學(xué)變化Table 2 Morphological changes of jejunum structure

圖2 掃描和透射電鏡下空腸形態(tài)學(xué)變化Fig.2 Morphological changes of jejunum by scanning and transmission electron microscope

2.3 不同因素對(duì)大豆皂苷苷元A和B腸吸收特性的影響

2.3.1 不同腸段對(duì)腸吸收的影響 50 mg/L下苷元A和B在不同腸段的表觀(guān)滲透系數(shù)Papp及吸收速率常數(shù)Ka結(jié)果如表3所示。

大鼠腸道包括十二指腸、空腸、回腸和結(jié)腸，各部小腸絨毛和粘膜皺襞結(jié)構(gòu)存在差異，因此，成分在不同腸道的吸收具有部位特異性。苷元A在不同腸段的表觀(guān)滲透系數(shù)Papp大小為：空腸＞十二指腸＞回腸＞結(jié)腸，空腸滲透系數(shù)最高，50 mg/L劑量時(shí)為15.34×10-5cm/s，是十二指腸的1.64倍、回腸的2.75倍、結(jié)腸的4.10倍，顯著優(yōu)于其他腸段（P＜0.05）；吸收速率常數(shù)Ka大小為：空腸＞十二指腸＞回腸＞結(jié)腸，空腸與十二指腸吸收能力接近，50 mg/L劑量時(shí)分別為3.06×10-5、2.74×10-5s-1，無(wú)顯著差異（P＞0.05）。苷元B在不同腸段的滲透和吸收情況與苷元A相似，均為空腸優(yōu)于十二指腸、回腸、結(jié)腸，但滲透和吸收參數(shù)低于苷元A。苷元A和B在各腸段均存在吸收，且空腸段吸收效果最優(yōu)，可考慮將其制為空腸特定部位靶向制劑[29]。

2.3.2 不同劑量對(duì)腸吸收的影響 從表3來(lái)看，大豆皂苷苷元A高劑量組的表觀(guān)滲透系數(shù)Papp和吸收速率常數(shù)Ka均高于低劑量組，在空腸段高劑量組的滲透和吸收能力是低劑量組的1.54、1.15倍，有顯著性差異（P＜0.05），說(shuō)明苷元A在腸道的吸收存在濃度依賴(lài)性，吸收機(jī)制為被動(dòng)擴(kuò)散[30]?？漳c段苷元B高、低劑量組的表觀(guān)滲透系數(shù)Papp分別為6.32×10-5、11.36×10-5cm/s，差異明顯（P＜0.05），而吸收速率常數(shù)Ka分別為2.42×10-5、2.74×10-5s-1，無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

2.3.3 膽汁對(duì)腸吸收的影響 如表4可知，苷元A和B有膽汁組在十二指腸部位的表觀(guān)滲透系數(shù)Papp分別為9.76×10-5、3.77×10-5cm/s，在空腸部位分別為16.56×10-5、12.01×10-5cm/s，在十二指腸部位吸收速率常數(shù)Ka分別為3.96×10-5、1.82×10-5s-1，在空腸部位分別為3.06×10-5、2.97×10-5s-1，均顯著高于無(wú)膽汁組（P＜0.05），說(shuō)明膽汁的分泌對(duì)苷元吸收具有特殊吸收機(jī)制，苷元在體內(nèi)吸收形式為腸肝循環(huán)，膽汁中的膽汁酸對(duì)苷元在小腸部位的消化吸收具有促進(jìn)作用[31]。膽汁在回腸段和結(jié)腸段的促進(jìn)效果不明顯，說(shuō)明膽汁主要作用部位于腸部上端。

表3 各劑量對(duì)大豆皂苷苷元在各腸段Papp和Ka的影響（D，n=4）Table 3 Effect of concentration on soyasapogenol absorptivity at different intestines ( D, n=4)

表3 各劑量對(duì)大豆皂苷苷元在各腸段Papp和Ka的影響（D，n=4）Table 3 Effect of concentration on soyasapogenol absorptivity at different intestines ( D, n=4)

注：不同字母表示表觀(guān)滲透系數(shù)Papp和吸收速率常數(shù)Ka的高低劑量組間顯著差異，P＜0.05。

苷元 劑量 吸收參數(shù) 十二指腸 空腸 回腸 結(jié)腸苷元A 10 mg/L（低） Papp*10-5(cm/s) 4.81±1.08b 9.99±2.71b 3.01±1.23b 2.70±0.15b Ka*10-5(s-1) 2.61±0.31b 2.66±0.14a 3.41±0.23a 0.70±0.01a 50 mg/L（高） Papp*10-5(cm/s) 9.37±0.95a 15.34±0.60a 5.58±0.70a 3.74±0.38a Ka*10-5(s-1) 3.05±0.09a 3.06±0.13b 2.51±0.09b 0.72±0.01a 10 mg/L（低） Papp*10-5(cm/s) 2.63±0.03b 6.32±1.14b 1.90±0.58b 1.38±±0.35b Ka*10-5(s-1) 2.03±0.16a 2.42±0.23a 1.38±0.35a 0.48±0.08a 50 mg/L（高） Papp*10-5(cm/s) 3.77±1.51a 11.36±0.70a 3.18±0.66a 1.64±0.27a Ka*10-5(s-1) 2.34±0.33a 2.74±0.02a 1.59±0.24a 0.55±0.05a苷元B

表4 有無(wú)膽汁對(duì)大豆皂苷苷元在各腸段Papp和Ka的影響（D，n=4）Table 4 Effect of bile on soyasapogenol absorptivity at different Intestines (D, n=4)

表4 有無(wú)膽汁對(duì)大豆皂苷苷元在各腸段Papp和Ka的影響（D，n=4）Table 4 Effect of bile on soyasapogenol absorptivity at different Intestines (D, n=4)

注：不同字母表示表觀(guān)滲透系數(shù)Papp和吸收速率常數(shù)Ka的有無(wú)膽汁組間顯著差異，P＜0.05。

苷元 組別 吸收參數(shù) 十二指腸 空腸 回腸 結(jié)腸苷元A有膽汁 Papp*10-5(cm/s) 9.76±0.34a 16.56±0.73a 9.27±1.85a 3.42±0.01b Ka*10-5(s-1) 3.96±0.13a 3.06±0.46a 2.46±0.28a 0.63±0.02a無(wú)膽汁 Papp*10-5(cm/s) 8.60±0.74b 12.90±1.05b 7.21±1.97b 4.47±0.80a Ka*10-5(s-1) 3.03±1.26b 2.34±0.01b 2.60±0.25a 0.91±0.03a有膽汁 Papp*10-5(cm/s) 3.77±0.42a 12.01±0.16a 3.29±1.28a 1.57±0.09a Ka*10-5(s-1) 1.82±0.05a 2.97±0.43a 1.58±0.49a 0.48±0.01a無(wú)膽汁 Papp*10-5(cm/s) 3.09±0.45a 9.67±0.99b 2.54±1.14b 1.80±0.73a Ka*10-5(s-1) 1.73±0.30a 2.30±0.04a 1.68±0.44a 0.68±0.14a苷元B

3 結(jié)論

形態(tài)學(xué)研究顯示，大鼠空腸的結(jié)構(gòu)在灌流2 h和灌流前無(wú)顯著差異，表明在體單向腸灌流模型在實(shí)驗(yàn)期間保持良好的腸道環(huán)境，通過(guò)該模型評(píng)估大豆皂苷苷元A和B時(shí)可行的。在體腸吸收結(jié)果表明，大豆皂苷苷元A和B在不同腸段的吸收能力為：空腸＞十二指腸＞回腸＞結(jié)腸，主要吸收部位為空腸，提示在開(kāi)發(fā)苷元制劑時(shí)，可考慮空腸特定靶向產(chǎn)品，以提高苷元的生物利用度；苷元A的在體腸滲透和吸收能力均具有顯著的濃度依賴(lài)性，推測(cè)其吸收機(jī)制為被動(dòng)擴(kuò)散；而苷元B滲透參數(shù)隨濃度變化明顯，吸收情況的濃度依賴(lài)性不顯著，提示苷元B的吸收機(jī)制不是簡(jiǎn)單的被動(dòng)擴(kuò)散，可能還存在跨膜、載體蛋白等多種形式的結(jié)合方式；內(nèi)源物膽汁對(duì)苷元A和B的吸收起促進(jìn)作用，且主要作用于腸部上端。本研究為苷元以后的深度開(kāi)發(fā)利用提供了科學(xué)依據(jù)。