王杰偉，吳艷輝，孫萬(wàn)東，何艷玲

（北京陸橋技術(shù)股份有限公司，中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院，北京 100123）

近些年，隨著國(guó)家對(duì)食品質(zhì)量管控的日趨嚴(yán)格，在食品檢測(cè)行業(yè)，作為必檢項(xiàng)目食品中菌落總數(shù)指標(biāo)[1]檢測(cè)量激增，菌落總數(shù)是衡量食品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)之一，為食品樣品的衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。依據(jù)GB 4789.2-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定》標(biāo)準(zhǔn)，食品微生物菌群數(shù)量的檢測(cè)方法為平板培養(yǎng)法[2]，整體檢測(cè)流程費(fèi)時(shí)費(fèi)力，微生物菌落計(jì)數(shù)測(cè)試片檢測(cè)法是一種新型檢測(cè)方法，它是以凝膠、無(wú)紡布和濾紙3種主流載體替代瓊脂作為培養(yǎng)基載體培養(yǎng)微生物的一種檢測(cè)新技術(shù)。測(cè)試片作為在傳統(tǒng)瓊脂平板計(jì)數(shù)法基礎(chǔ)上經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)化和改進(jìn)，形成的一種新型檢測(cè)方法，是微生物快速檢測(cè)方法發(fā)展的趨勢(shì)，測(cè)試方法的接受度逐年上升[3]。

國(guó)內(nèi)對(duì)于菌落總數(shù)測(cè)試片的研究以無(wú)紡布體系為主，隨著研究的不斷深入，無(wú)紡布體系菌落色素?cái)U(kuò)散、菌落顯色不清晰或連成片[4]，有的需要借助壓板固定菌落生長(zhǎng)區(qū)等缺點(diǎn)，以及與傳統(tǒng)方法相比計(jì)數(shù)結(jié)果偏低[5]的問(wèn)題逐漸顯露，因此，無(wú)紡布應(yīng)用于菌落總數(shù)測(cè)試片還需進(jìn)一步改善，目前并尚無(wú)理想改進(jìn)方案。

本研究針對(duì)無(wú)紡布載體測(cè)試片的弊端，進(jìn)行冷水可溶凝膠測(cè)試片的研制。冷水可溶凝膠作為一種親水膠體，在適當(dāng)?shù)呐浔认驴商峁┹^好的固化粘合作用[6]，可起到替代瓊脂粉的效果，因此相比無(wú)紡布體系菌落測(cè)試片，凝膠體系菌落測(cè)試片可為微生物提供與GB 4789.2-2016傾注培養(yǎng)法更為接近的生長(zhǎng)環(huán)境，從而得到更為準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果。本文以GB 4789.2-2016平板計(jì)數(shù)培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，使冷水可溶凝膠替代瓊脂粉，進(jìn)行凝膠體系菌落總數(shù)測(cè)試片的研究。

1 材料與方法

1.1 主要試劑和材料

1.1.1 主要試劑

腦心浸液肉湯（BHI）、平板計(jì)數(shù)瓊脂由北京陸橋技術(shù)股份有限公司提供；3M Petrifilm菌落總數(shù)測(cè)試片購(gòu)自3M中國(guó)有限公司；2,3,5-三苯基氯化四氮唑（TTC）購(gòu)自SIGMA公司；瓜爾膠、聚丙烯酸鈉、黃原膠、卡拉膠、高吸水樹(shù)脂（SAP）、丙酮酸鈉購(gòu)自阿拉丁試劑有限公司；聚對(duì)苯二甲酸乙二醇酯（PET）膜、聚乙烯膜、聚丙烯膜購(gòu)自上海晶華膠粘新材料股份有限公司；紙基膠板購(gòu)自上海金標(biāo)生物科技有限公司。

1.1.2 菌株

大腸埃希氏菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC6538、銅綠假單胞菌ATCC10104、阪崎克羅諾桿菌ATCC29544、單增李斯特氏菌ATCC19111購(gòu)自美國(guó)菌種保藏中心；枯草芽孢桿菌CMCC63501購(gòu)自中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏中心。

1.2 方法

1.2.1 菌懸液的制備

分別挑取上述試驗(yàn)菌株的單菌落接種于腦心浸液肉湯中，于36 ℃培養(yǎng)24 h。取1 mL菌液加入9 mL無(wú)菌生理鹽水中混合均勻，即為10-1稀釋液，重復(fù)上述操作將菌液稀釋至適宜稀釋度，得到菌落總數(shù)處于102CFU/mL的各標(biāo)準(zhǔn)菌株菌懸液；將大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌與枯草芽孢桿菌四種標(biāo)準(zhǔn)菌株菌懸液各取2 mL混合，得到混合菌液。

1.2.2 測(cè)試片的制備

測(cè)試片上層覆膜為PET塑料膜，底板為200 g防水型背膠相紙，將培養(yǎng)基各組分混合均勻后添加于測(cè)試片底板培養(yǎng)區(qū)域。

1.2.3 菌落總數(shù)測(cè)試片覆膜的確定

分別選用厚度為0.2 mm的聚乙烯膜、聚丙烯膜、PET膜作為覆膜，使用200 g/m2紙基膠板作為下基材。按照38.5 g/L BHI（本研究后續(xù)試驗(yàn)中BHI添加量均為38.5 g/L），卡拉膠15 g/L的添加量混合均勻，涂布于基材上制成菌落總數(shù)測(cè)試片，接種銅綠假單胞菌菌液，于36 ℃培養(yǎng)24 h觀察菌落狀態(tài)。

1.2.4 菌落總數(shù)測(cè)試片培養(yǎng)基組分的確定

1.2.4.1 冷水可溶凝膠的篩選

冷水可溶凝膠的篩選參照Ren[7]等的相關(guān)信息，選擇瓜爾膠、聚丙烯酸鈉、黃原膠、卡拉膠進(jìn)行試驗(yàn)。將各冷水可溶凝膠均按照15 g/L的添加量，分別與BHI培養(yǎng)基進(jìn)行混合，均勻添加至測(cè)試片培養(yǎng)區(qū)域，接種枯草芽孢桿菌菌液，于36 ℃培養(yǎng)24 h。綜合測(cè)試片理化與微生物生長(zhǎng)狀態(tài)篩選冷水可溶凝膠。

1.2.4.2 單因素-正交實(shí)驗(yàn)確定培養(yǎng)基組分

（1）TTC添加量水平的確定[8,9]

分別將0.006、0.007、0.008、0.009與0.01 g/L TTC與BHI培養(yǎng)基，15 g/L復(fù)合凝膠（黃原膠：卡拉膠=1:1，下同），0.05 g/L SAP以及1.5 g/L丙酮酸鈉混合后均勻添加至測(cè)試片培養(yǎng)區(qū)域，接種1 mL混合菌液于37 ℃培養(yǎng)24 h統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)量。

（2）SAP添加量水平的確定

分別將0.03、0.04、0.05、0.06和0.07 g/L SAP與BHI培養(yǎng)基、復(fù)合凝膠、0.008 g/L TTC以及1.5 g/L丙酮酸鈉混合后均勻添加至測(cè)試片培養(yǎng)區(qū)域，接種1 mL混合菌液，于37 ℃培養(yǎng)24 h后統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)量。

（3）丙酮酸鈉添加量水平的確定

分別將0.5、1.0、1.5、2.0與2.5 g/L丙酮酸鈉與BHI培養(yǎng)基，復(fù)合凝膠，0.008 g/L TTC以及0.05 g/L SAP混合后均勻添加至測(cè)試片培養(yǎng)區(qū)域，接種1 mL混合菌液，于37 ℃培養(yǎng)24 h后統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)量。

（4）培養(yǎng)基組分最優(yōu)組合的確定

在上述試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，根據(jù)所確定的TTC添加量范圍（0.007 L、0.008、0.009 g/L）、SAP添加量范圍（0.04、0.05、0.06 g/L）以及丙酮酸鈉添加量范圍(1.0、1.5、2.0 g/L)，進(jìn)行三因素三水平正交試驗(yàn)，以確定三種關(guān)鍵組分在培養(yǎng)基中的最優(yōu)組合。

1.2.5 冷水可溶性凝膠比例的確定

按照15 g/L的總凝膠添加量，黃原膠與卡拉膠復(fù)配比例分別為9:1、8:2、7:3、6:4、5:5，與優(yōu)化后的培養(yǎng)基混合后均勻添加至測(cè)試片培養(yǎng)區(qū)域，接種1 mL混合菌液，于37 ℃培養(yǎng)24 h后觀察測(cè)試片理化狀態(tài)并統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)量。

1.2.6 菌落總數(shù)測(cè)試片的性能評(píng)價(jià)

本文所研制的菌落總數(shù)測(cè)試片的性能，通過(guò)靈敏度、準(zhǔn)確度兩項(xiàng)指標(biāo)，與GB 4789.2-2016平板計(jì)數(shù)法以及當(dāng)前市場(chǎng)占有率最高的3M Petrifilm測(cè)試片進(jìn)行比對(duì)驗(yàn)證并評(píng)估。

1.2.6.1 靈敏度

將制備好的混合菌液，以生理鹽水進(jìn)行梯度稀釋至10-2~10-7，分別使用測(cè)試片方法、GB 4789.2-2016平板計(jì)數(shù)法以及3M Petrifilm測(cè)試片進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，試驗(yàn)設(shè)置三個(gè)平行，以最低稀釋度的檢測(cè)結(jié)果作為最低檢測(cè)限，以最低檢測(cè)限作為測(cè)試片靈敏度的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。檢測(cè)結(jié)果大于最低檢測(cè)限的為陽(yáng)性，檢測(cè)結(jié)果小于最低檢測(cè)限的為陰性，靈敏度=陽(yáng)性/（陽(yáng)性+陰性）[10]。

1.2.6.2 準(zhǔn)確度檢測(cè)

將6種標(biāo)準(zhǔn)菌菌懸液，以無(wú)菌生理鹽水稀釋至102CFU/mL，同時(shí)選取散裝熟食、散裝糕點(diǎn)、生雞肉、奶粉等菌落總數(shù)相對(duì)較高的市售食品樣品，分別進(jìn)行10-2~10-5稀釋?zhuān)鳂?biāo)準(zhǔn)菌株以及實(shí)際樣品稀釋液均分別使用測(cè)試片方法、GB 4789.2-2016平板計(jì)數(shù)法以及3M Petrifilm測(cè)試片進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，其中實(shí)際樣品檢測(cè)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)處于102CFU/mL稀釋度的結(jié)果。建立標(biāo)準(zhǔn)菌株測(cè)試片法-國(guó)標(biāo)法以及測(cè)試片法3M Petrifilm法檢測(cè)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.7 數(shù)據(jù)處理

本試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SPSS 17.0軟件進(jìn)行處理，靈敏度檢測(cè)數(shù)據(jù)采用t檢驗(yàn)，以p<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；準(zhǔn)確度檢測(cè)采用線性回歸分析以檢驗(yàn)不同方法檢測(cè)結(jié)果的一致性。各組試驗(yàn)均重復(fù)三次，檢測(cè)結(jié)果使用平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。

2 結(jié)果與討論

2.1 覆膜的確定

測(cè)試片的覆膜除作為結(jié)果觀察與計(jì)數(shù)的窗口外，對(duì)于保證測(cè)試片培養(yǎng)區(qū)域的氧氣供應(yīng)起著決定作用。本研究中選用好氧程度較高的銅綠假單胞菌進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明，以聚乙烯和聚丙烯材質(zhì)作為覆膜的測(cè)試片中銅綠假單胞菌生長(zhǎng)狀態(tài)差顯色均過(guò)淺，無(wú)法準(zhǔn)確計(jì)數(shù)，而以PET材質(zhì)作為覆膜的測(cè)試片中菌落生長(zhǎng)良好顯色清晰，說(shuō)明PET材質(zhì)微觀結(jié)構(gòu)有一定程度上利于氧氣自由擴(kuò)散[11]，對(duì)好氧菌的促生長(zhǎng)效果更理想，更為適宜作為測(cè)試片的覆膜材質(zhì)，各種材質(zhì)覆膜制備的測(cè)試片效果見(jiàn)圖1。

圖1 不同上基材制備測(cè)試片的菌落形態(tài)Fig.1 Colony morphology of testing plates prepared by 3 different upper substrates

2.2 冷水可溶凝膠的篩選

菌落測(cè)試片中冷水可溶凝膠的性能要求包括：結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，不可被液化能力較強(qiáng)的芽孢桿菌所分解液化；復(fù)水后阻隔性強(qiáng)，可阻斷色素在培養(yǎng)體系中的過(guò)度擴(kuò)散，從而使色素聚集于菌落周邊，避免產(chǎn)生色素暈圈，便于計(jì)數(shù)；水?dāng)U散性能理想，樣品稀釋液加入培養(yǎng)區(qū)域后可自由擴(kuò)散至整個(gè)培養(yǎng)區(qū)域且時(shí)間盡量短，方便實(shí)驗(yàn)操作并節(jié)省試驗(yàn)時(shí)間。本試驗(yàn)中選用凝膠液化能力強(qiáng)，菌落色素?cái)U(kuò)散較嚴(yán)重的枯草芽孢桿菌檢測(cè)各種冷水可溶凝膠的穩(wěn)定性，同時(shí)觀察菌落暈圈情況及稀釋液自由擴(kuò)散至整個(gè)培養(yǎng)區(qū)域的時(shí)間。各冷水可溶凝膠培養(yǎng)后的菌落形態(tài)與性能比對(duì)情況見(jiàn)表1與圖2。

表1 各冷水可溶性凝膠性能比對(duì)Table 1 Comparison of cold water soluble gel

本試驗(yàn)表明，四種冷水可溶凝膠制作的測(cè)試片中，菌落數(shù)量及大小差異不大；聚丙烯酸鈉與瓜爾膠穩(wěn)定性較差[12]，對(duì)應(yīng)的測(cè)試片均被嚴(yán)重液化，不適用于作為測(cè)試片中的凝膠組分；卡拉膠有輕微程度的液化以及因菌落色素?cái)U(kuò)散產(chǎn)生的暈圈，稀釋液在測(cè)試片表面擴(kuò)散速度最快；黃原膠擴(kuò)散速度慢[13]，但具有優(yōu)越的穩(wěn)定性以及色素阻隔性能。

本試驗(yàn)所選用的四種冷水可溶凝膠中的任何一種均無(wú)法滿足菌落總數(shù)測(cè)試片對(duì)于凝膠的要求，綜合考慮上述試驗(yàn)中各凝膠的技術(shù)指標(biāo)，水?dāng)U散性能優(yōu)勢(shì)且結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性尚可的卡拉膠，恰好與結(jié)構(gòu)穩(wěn)定但水?dāng)U散性能略有欠缺的黃原膠形成互補(bǔ)，因此本試驗(yàn)選用以黃原膠為主體，同時(shí)添加少量比例的卡拉膠作為復(fù)合凝膠進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)研究。

圖2 不同冷水可溶凝膠制備測(cè)試片的菌落形態(tài)Fig.2 Colony morphology of testing plates prepared by different gel

2.3 培養(yǎng)基組分單因素實(shí)驗(yàn)

TTC作為測(cè)試片中菌落生長(zhǎng)指示劑，相對(duì)于其他指標(biāo)劑靈敏準(zhǔn)確，且常溫下它與菌落形成的顏色在空氣中穩(wěn)定，可長(zhǎng)時(shí)間保存，但濃度過(guò)高時(shí)對(duì)于微生物，尤其是革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌造成較強(qiáng)的抑制，需根據(jù)測(cè)試片菌落顏色清晰且計(jì)數(shù)準(zhǔn)確的實(shí)際需求對(duì)TTC的使用濃度進(jìn)行優(yōu)化[14]。TTC添加量為0.006 g/L時(shí)，菌落顯色略淺尚無(wú)法清晰計(jì)數(shù)，TTC添加量為0.008 g/L時(shí)菌落顯色明顯（見(jiàn)圖3）且未表現(xiàn)出明顯的抑制性，當(dāng)TTC添加量達(dá)到0.01 g/L時(shí)菌落數(shù)量明顯減少，因此確定TTC最佳添加量為0.008 g/L。

SAP親水性強(qiáng)，將其添加于培養(yǎng)基組分中作為分散劑，可顯著提升測(cè)試片的水?dāng)U散速度，但其含量過(guò)高時(shí)也會(huì)對(duì)微生物生長(zhǎng)形成負(fù)作用。不同SAP添加量的測(cè)試片菌落數(shù)量見(jiàn)圖4，SAP添加量越高測(cè)試片水?dāng)U散速度越快，添加量達(dá)到0.07 g/L時(shí)對(duì)微生物表現(xiàn)出一定的抑制性，SAP的最佳添加量為0.05 g/L，此時(shí)測(cè)試片水?dāng)U散速度為3~5 s。

圖3 不同TTC添加量對(duì)菌落顯色狀態(tài)的影響Fig.3 Effect of different TTC concentration on colony chromogenic reation

微生物在正常生長(zhǎng)過(guò)程中因需氧代謝會(huì)生成過(guò)氧化氫等有毒代謝產(chǎn)物[15]，丙酮酸鈉在酸性條件下分解產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸一方面可進(jìn)行三羧酸循環(huán)產(chǎn)生能量，供微生物合成代謝酶分解過(guò)氧化氫，同時(shí)還可直接還原過(guò)氧化氫解除其毒害作用。因此丙酮酸鈉對(duì)于促進(jìn)微生物生長(zhǎng)，修復(fù)損傷菌有著重要作用。由圖4可知當(dāng)丙酮酸鈉添加量達(dá)到1.5 g/L后，菌落數(shù)量趨于平穩(wěn)，因此確定丙酮酸鈉的添加量為1.5 g/L。

2.4 培養(yǎng)基組分最優(yōu)組合的確定

根據(jù)1.2.4.2中確定的三種關(guān)鍵組分添加量范圍，進(jìn)行三因素三水平正交試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表2，影響培養(yǎng)基效果關(guān)鍵組分主次順序?yàn)锳(丙酮酸鈉)>B(TTC)>(SAP)，最佳水平組合為C3A2B2，即三種組分的最優(yōu)組合方式為T(mén)TC 0.008 g/L，SAP 0.05 g/L，丙酮酸鈉2.0 g/L。按照最優(yōu)組合再次進(jìn)行驗(yàn)證，菌落總數(shù)為213 CFU/mL，與表2中試驗(yàn)5結(jié)果相符。

表2 培養(yǎng)基關(guān)鍵組分正交試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Orthogonal test results of the key components

表3 不同冷水可溶凝膠復(fù)配比例測(cè)試片效果Table 3 Effect of different cold water soluble gel ratio testing plate

表4 菌落總數(shù)測(cè)試片靈敏度檢測(cè)Table 4 Sensitivity detection of testing plate

2.5 冷水可溶凝膠比例的確定

不同黃原膠與卡拉膠比例下測(cè)試片水?dāng)U散速度、培養(yǎng)基液化情況、菌落色素?cái)U(kuò)散情況與菌落數(shù)量見(jiàn)表3，黃原膠與卡位膠比例為9:1與8:2時(shí)，測(cè)試片培養(yǎng)基無(wú)液化以及菌落色素?cái)U(kuò)散，但相比于9:1時(shí)水?dāng)U散速度6~7 s，8:2水?dāng)U散速度可達(dá)到3~4 s，此優(yōu)勢(shì)相當(dāng)于在實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中縮短了整體檢測(cè)周期，尤其在樣品量大時(shí)此優(yōu)勢(shì)更為明顯；黃原膠與卡位膠比例為7:3時(shí)，隨著卡拉膠比例的增加，測(cè)試片出現(xiàn)了5%左右的液化，雖然此時(shí)水?dāng)U散速度也有了小幅度增加，但僅為改善0.2~0.3 s水?dāng)U散性能而犧牲掉5%液化并非理想的選擇；黃原膠與卡位膠比例為6:4以及5:5時(shí)測(cè)試片液化比例已經(jīng)較高，因此將黃原膠:卡拉膠為8:2作為冷水可溶凝膠復(fù)配比例。

2.6 性能評(píng)價(jià)

2.6.1 靈敏度檢測(cè)

靈敏度試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4，本文所研制的菌落總數(shù)測(cè)試片、國(guó)標(biāo)方法以及3M Petrifilm測(cè)試片的檢測(cè)限均為2 CFU/mL。本文所研制的菌落總數(shù)測(cè)試片與國(guó)標(biāo)方法對(duì)菌落數(shù)量為30~300之間的可計(jì)數(shù)樣本進(jìn)行計(jì)數(shù)與分析，t=2，p=0.18>0.05，說(shuō)明菌落總數(shù)測(cè)試片與國(guó)標(biāo)方法檢測(cè)結(jié)果無(wú)差異顯著性。

2.6.2 準(zhǔn)確度檢測(cè)

使用菌落總數(shù)測(cè)試片與GB 4789.2-2016傾注法對(duì)各標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行菌落總數(shù)檢測(cè)，兩種檢測(cè)方法的線性相關(guān)曲線見(jiàn)圖5，由本試驗(yàn)結(jié)果可知，菌落總數(shù)測(cè)試片與國(guó)標(biāo)方法檢測(cè)結(jié)果具有良好的線性關(guān)系，R2達(dá)到0.994，表明兩種檢測(cè)方法對(duì)于包括標(biāo)準(zhǔn)菌株與實(shí)際樣品在內(nèi)所有樣本的計(jì)數(shù)結(jié)果無(wú)差異顯著性。

圖5 測(cè)試片法與國(guó)標(biāo)法檢測(cè)結(jié)果相關(guān)曲線Fig.5 Linear correlation curve of test results between

圖6 測(cè)試片法與3M檢測(cè)結(jié)果相關(guān)曲線Fig.6 Linear correlation curve of test results between testing plate and national standard method testing plate method and 3M Petrifilm method

測(cè)試片法-3M Petrifilm法的線性相關(guān)曲線見(jiàn)圖6，對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)菌株以及實(shí)際樣品，菌落總數(shù)測(cè)試片與當(dāng)前市場(chǎng)占有率最高的測(cè)試片產(chǎn)品-3M Petrifilm檢測(cè)結(jié)果的線性關(guān)系達(dá)到0.99，說(shuō)明本文所研制的菌落總數(shù)測(cè)試片可應(yīng)用于食品微生物檢測(cè)。

3 結(jié)論

本文以四種食品檢測(cè)中常見(jiàn)的條件致病菌為試驗(yàn)菌株，通過(guò)篩選基材，優(yōu)化培養(yǎng)基干粉的組分，研制菌落總數(shù)測(cè)試片；在優(yōu)化培養(yǎng)基干粉組分這一核心環(huán)節(jié)上，首先通過(guò)理化性狀及菌落生長(zhǎng)狀態(tài)篩選出黃原膠與卡拉膠作為測(cè)試片冷水可溶性凝膠；再通過(guò)單因素-正交實(shí)驗(yàn)確定培養(yǎng)基中關(guān)鍵組分TTC、SAP與丙酮酸鈉的添加量分別為0.008 g/L、0.05 g/L與2.0 g/L；最后確定復(fù)合凝膠內(nèi)黃原膠與卡拉膠的比例為8:2（m/m）。菌落總數(shù)測(cè)試片與國(guó)標(biāo)中平板計(jì)數(shù)法以及3M Petrifilm測(cè)試片進(jìn)行比對(duì)，標(biāo)準(zhǔn)菌株與實(shí)際樣品檢測(cè)線性相關(guān)性均良好，R2均達(dá)到0.99以上，測(cè)試片檢出限可達(dá)2 CFU/mL，靈敏度達(dá)到100%，說(shuō)明本文研制的菌落總數(shù)測(cè)試片可應(yīng)用于食品微生物檢測(cè)領(lǐng)域，同時(shí)對(duì)于不同基質(zhì)的樣品均有較理想的適用性。在食品檢測(cè)行業(yè)精準(zhǔn)高效的發(fā)展趨勢(shì)下，相比于國(guó)標(biāo)方法，測(cè)試片方法具有明顯的優(yōu)勢(shì)，在檢測(cè)流程上省去了培養(yǎng)基制備、高壓、冷卻、倒平板等工序，極大簡(jiǎn)化了檢驗(yàn)流程；在微生物定量結(jié)果準(zhǔn)確性保證上，測(cè)試片法避免了國(guó)標(biāo)傾注法在傾倒培養(yǎng)基時(shí)對(duì)細(xì)菌的熱損傷，同時(shí)適量TTC的加入使得培養(yǎng)后菌落更易識(shí)別，不存在國(guó)標(biāo)平板計(jì)數(shù)法在讀取結(jié)果時(shí)生長(zhǎng)于培養(yǎng)基內(nèi)部的細(xì)菌形態(tài)過(guò)小不易識(shí)別的問(wèn)題；另外測(cè)試片體積極小，便于培養(yǎng)、保存與運(yùn)輸。在檢測(cè)成本方面，雖然測(cè)試片在直接材料成本上高于國(guó)標(biāo)方法，但如考慮到測(cè)試片法無(wú)繁瑣的平板制備工序，節(jié)省人工縮短、總體檢測(cè)周期短從而隱形成本更低，測(cè)試片法在總成本上與國(guó)標(biāo)法差距并不明顯，而且在檢測(cè)量越大時(shí)優(yōu)勢(shì)越明顯。因此本文所研制的測(cè)試片方法在檢測(cè)行業(yè)具有廣闊的應(yīng)用前景。