李春麗，孟憲華，尚賢毅，趙婭敏，楊軍麗*

1.西北民族大學化工學院，甘肅省高校環(huán)境友好復合材料及生物質利用省級重點實驗室，甘肅 蘭州 730000

2.中國科學院蘭州化學物理研究所，中國科學院西北特色植物資源化學重點實驗室，甘肅省天然藥物重點實驗室，甘肅 蘭州 730000

3.隴南市富民產(chǎn)業(yè)發(fā)展有限公司，甘肅 隴南 746000

花椒ZanthoxylumbungeanumMaxim.是蕓香科（Rutaceae）花椒屬ZanthoxylumL.植物，在我國各地均有分布。其干燥成熟果皮，民間稱作大紅袍，作為傳統(tǒng)中藥已被收入《中國藥典》2020年版[1]，具有溫中止痛，殺蟲止癢的功效，其主要成分包括揮發(fā)油、生物堿、香豆素、黃酮、木脂素和其他微量化合物[2]?；ń凡粌H用作調(diào)味料[4]，也具有廣泛的藥用價值，可治療濕疹、腹瀉和嘔吐[5]，減輕上腹疼痛[6]等。前期本課題組從花椒醋酸乙酯部位分離得到1個新骨架化合物bungsteroid A[7]，對人肝癌細胞HepG2，人乳腺癌細胞MCF-7和人宮頸癌細胞HeLa具有抑制活性，半數(shù)抑制濃度（IC50）值分別為（56.3±1.1）、（64.2±0.9）、（74.2±1.3）μmol/L；從青花椒中分離得到12個酚類化學成分，5個化合物具有一定的ABTS+自由基清除的活性，其中熊果苷的抗氧化活性與維生素C（VC）相當[8]。故繼續(xù)對花椒極性部位進行化學成分研究，以期能分離得到抗氧化作用更強的酚類化學成分。

本研究從花椒果皮中分離鑒定1個新化合物花椒酚A（bungphenol A），以及13個已知化合物，分別為苔黑酚（orcinol，2）、1-甲氧基-7R,8S-二羥基苯丙醇（1-methoxy-7R,8S-dihydroxyl-phenylpropanol，3）、咖啡酸甲酯（methylcaffeate，4）、沒食子甲酯（methylgallate，5）、3-甲基-2-烯丁醇-1-葡萄糖苷（3-methyl-but-2-en-1-yl-β-D-glucopyranoside，6）、腺苷（adenosine，7）、紫花前胡苷（marmesinin，8）、blumenol C glucoside（9）、(6R,9S)-3-氧-α-紫羅蘭醇-β-D-吡喃葡萄糖苷[(6R,9S)-3-oxo-α-ionol-β-D-glucopyranoside，10]、長壽花糖苷（roseoside，11）、丁香樹脂酚-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（syringaresinol-4′-O-β-D-glucoside，12）、(+)-南燭木樹脂酚 [(+)-lyoniresinol，13]、異落葉松脂素（isolariciresinol，14）。其中化合物12首次從花椒中分離得到，化合物1～5、7～10和14首次從花椒屬植物中分離得到。ABTS+和DPPH自由基清除實驗表明，化合物2、4、5和12～14具有較好的抗氧化活性，其中化合物13和14的ABTS+自由基清除活性IC50分別為5.7和11.0 μmol/L，與陽性對照Vc（IC50＝6.4 μmol/L）相當。化合物4、5和13的DPPH自由基清除活性IC50分別為61.2、19.8、101.0 μmol/L，與陽性對照Vc（IC50＝53.0 μmol/L）相當。

1 儀器與材料

Bruker Avance III-400核磁共振儀（Bruker公司，德國），Bruker microTOF-Q II高分辨質譜儀（Bruker公司，德國），IFS120HR 670 FT-IR紅外光譜儀（Bruker公司，德國）Lambda 35紫外-可見分光光度計（Perkin Elmer公司，美國），IP-digi300/2旋光儀（上海儀邁儀器科技有限公司），半制備高效液相色譜儀（江蘇漢邦科技有限公司），柱色譜硅膠、薄層色譜硅膠（GF254，青島海洋化工廠），MCI和Sephadex LH-20（YMC，日本），D101大孔吸附樹脂（西安藍曉科技新材料股份有限公司）。

花椒樣品2006年采自于甘肅省隴南市，由中國科學院蘭州化學物理研究所戚歡陽副研究員鑒定為花椒Z.bungeanumMaxim.的果皮。樣品（HJ-TS-201604）保存于中國科學院蘭州化學物理研究所中國科學院西北特色植物資源化學重點實驗室甘肅省天然藥物重點實驗室。

2 提取與分離

取干燥、粉碎的花椒果皮（5.0 kg），加10倍量70%乙醇在室溫下浸泡提取3次（3×50 L，7 d/次），濾過，濾液合并，減壓蒸干得干浸膏1.2 kg。浸膏加水（2 L）混勻后分別用等體積的二氯甲烷、醋酸乙酯、正丁醇萃取3次（3×2 L），分別合并萃取液，濃縮干燥，得二氯甲烷相（253 g）、醋酸乙酯相（215 g）、正丁醇相（262 g）和水相（470 g）。正丁醇相（Fr.C，262 g），經(jīng)硅膠柱色譜（200～300目，1000 g），以二氯甲烷-甲醇（30∶1→0∶1）梯度洗脫，得到15個組分（Fr.C1～C15）。Fr.C2（155 mg）經(jīng)硅膠柱色譜（1.5 g），以二氯甲烷-醋酸乙酯（15∶1）洗脫，得到化合物1（17.0 mg）。Fr.C3（85 mg）用半制備HPLC（30%甲醇洗脫，體積流量4 mL/min）分離得到化合物3（12.0 mg，tR＝9.0 min）。Fr.C4（125 mg）用硅膠柱色譜（100 g），以二氯甲烷-甲醇（10∶1）洗脫，得到7個組分（Fr.C4-1～C4-7）。Fr.C4-5 和Fr.C4-6分別用半制備HPLC（40%甲醇洗脫，體積流量4 mL/min）分離得到化合物9（16.0 mg,tR＝9.0 min）、11（1.5 mg，tR＝12.5 min）和10（9.2 mg，tR＝20.6 min）。Fr.C5（255 mg）MCI柱色譜（50%甲醇洗脫）得到7個組分（Fr.C5-1～C5-7）。Fr.C5-2 用半制備HPLC（40%甲醇-水洗脫，體積流量4 mL/min）分離得到化合物7（2.5 mg，tR＝3.5 min）。Fr.5-5用半制備HPLC（20%甲醇洗脫，體積流量4 mL/min）分離得到化合物4（21.0 mg，tR＝12.0 min）。Fr.C5-6 用半制備HPLC（25%甲醇洗脫，體積流量4 mL/min）分離得到化合物8（11.0 mg，tR＝16.9 min）。Fr.C7（250 mg）用硅膠柱色譜（1.0 g），以二氯甲烷-甲醇（10∶1→2∶1）梯度洗脫，得到8個組分（Fr.C7-1～C7-8）。Fr.C7-3用RP-18反相硅膠柱色譜（70%甲醇洗脫）得到6個組分，其中Fr.C7-3-4進一步用半制備HPLC（20%甲醇洗脫，體積流量4 mL/min）分離得到化合物2（2.0 mg，tR＝12.8 min）。Fr.7-3-5用半制備HPLC（30%甲醇洗脫，體積流量4 mL/min）分離得到化合物5（12.0 mg，tR＝10.8 min）和6（10.0 mg，tR＝14.3 min）。Fr.C7-6用制備HPLC（20%甲醇洗脫，體積流量4 mL/min）分離得到4個組分，其中Fr.C7-6-1進一步用半制備HPLC（40%甲醇洗脫，體積流量4 mL/min）分離得到化合物12（2.5 mg，tR＝14.1 min）。Fr.C8（310 mg）用MCI柱色譜（30%甲醇洗脫）得到4個組分，其中Fr.C8-3進一步用半制備HPLC（35%甲醇洗脫，體積流量4 mL/min）分離得到化合物13（14.0 mg，tR＝15.1 min）和14（4.0 mg，tR＝16.3 min）。

3 結構鑒定

化合物1：白色粉末（氯仿）；HR-ESI-MS譜給出準分子離子峰m/z375.084 0 [M＋Na]+（計算值為375.083 9，C20H16NaO6）和727.178 8 [2M＋Na]+（計算值為727.178 6，C40H32NaO12），確定化合物1的分子式為C20H16O6。204 (2.36),292 (3.33),333 (3.08)；2958,2916,1741,1723,1634,1600,1499,1450,1371,1331,1260,1211,1169,1140,1037，顯示結構中存在α,β-不飽和酯基和苯環(huán)。NMR譜（表1）低場區(qū)顯示對氧取代的苯環(huán)δH7.56 (2H,d,J=8.4 Hz),7.20 (2H,d,J=8.4 Hz) 和δC132.0 (C),129.2 (2C,CH),122.2(2C,CH),152.4 (C)；1對反式雙鍵δH7.69 (1H,d,J=16.0 Hz),6.40 (1H,d,J=16.0 Hz) 和δC143.9 (CH),117.9 (CH)；1個酯基δC167.4 (C)；1個甲氧基δH3.81(3H,s) 和δC51.7 (CH3)，表明結構中存在4-O-肉桂酸甲酯基團。該基團由HMBC譜給出的是遠程偶合的碳氫相關確定。在HMBC譜（圖1）中，H-2 (δH7.56) 與C-4 (δC152.4)、C-6 (δC129.2)、C-7 (δC143.9) 相關，H-3 (δH7.20) 與C-1 (δC132.0)、C-4、C-5 (δC122.2) 相關，H-5 (δH7.20) 與C-1、C-3 (δC122.2)、C-4相關，H-6 (δH7.56) 與C-2 (δC129.2)、C-4、C-7相關，H-7 (δH7.69) 與C-2、C-6、C-9 (δC167.4) 相關，H-8 (δH6.40) 與C-1、C-9相關，OCH3(δH3.81) 與C-9相關，確證了4-O-肉桂酸甲酯基團的存在。另外，NMR譜（表1）低場區(qū)顯示ABX 取代的苯環(huán)：δH7.09 (1H,s),6.84 (1H,d,J=8.0 Hz),7.07 (1H,d,J=8.0 Hz) 和δC128.5,106.6,148.5,150.2,108.7,125.1，1對反式雙鍵δH7.77 (1H,d,J=16.0 Hz),6.43 (1H,d,J=16.0 Hz) 和δC146.8,114.7；1個酯基δC165.3；1個甲氧基δH3.81 (3H,s) 和δC51.7，1個亞甲二氧基δH6.03 (2H,s) 和δC101.7，結合HMBC譜確定該基團為3′,4′-亞甲二氧基肉桂?；?。在HMBC譜（圖1）中，H-2′ (δH7.09) 與C-4′ (δC150.2)、C-6′ (δC125.1)和C-7′ (δC146.8) 相關，H-5′ (δH6.84) 與C-1′ (δC128.5) 和C-3′ (δC148.5) 相關，H-6′ (δH7.07) 與C-2′ (δC106.6)、C-4′和C-7′相關，H-7′ (δH7.77) 與C-2′、C-6′和C-9′ (δC165.3) 相關，H-8′ (δH6.43) 和C-1′、C-9′相關，亞甲二氧基 (δH6.03,OCHO) 與C-3′和C-4′相關，確證了3′,4′-亞甲二氧基肉桂?；拇嬖?。由此，確定化合物1的結構為4-O-(3′,4′-亞甲二氧基肉桂?；?-肉桂酸甲酯。經(jīng)檢索，為1個新化合物，命名為花椒酚A。

表1 化合物1的1H (400 MHz,CDCl3) 和13C-NMR (100 MHz,CDCl3) 數(shù)據(jù)Table 1 1H-(400 MHz,CDCl3) and 13C-NMR data (100 MHz,CDCl3) for compound 1

圖1 化合物1的HMBC相關 (H→C)Fig.1 Key HMBC correlations (from H to C) of compound 1

化合物2：無色膠狀物；分子式C7H8O2；ESI-MSm/z: 125.1 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz,CD3OD)δ:6.10 (2H,d,J=1.6 Hz,H-4,6),6.05 (1H,s,H-2),2.16 (3H,s,5-OCH3)。上述數(shù)據(jù)與文獻報道一致[9]，故鑒定化合物2為苔黑酚。

化合物3：無色膠狀物；[α]20D–13.2°(c0.28,MeOH)，ESI-MSm/z: 199.1 [M＋H]+，分子式C10H15O4；1H-NMR (400 MHz,CD3OD)δ: 7.31 (2H,d,J=8.0 Hz,H-3,5),6.88 (2H,d,J=8.0 Hz,H-2,6),4.55 (1H,d,J=6.4 Hz,H-7),3.77 (3H,s,1-OCH3),3.72 (1H,ddd,J=6.4,3.6,2.8 Hz,H-8),3.66 (1H,dd,J=11.2,3.6 Hz,H-9a),3.59 (1H,dd,J=11.2,2.8 Hz,H-9b)；13C-NMR (100 MHz,DMSO-d6)δ: 159.2(C-1，C),134.0 (C-4,C),128.0 (C-3,5,CH),113.1(C-2,6,CH),75.2 (C-7,CH),74.4 (C-8,CH),63.1 (C-9,CH2),54.3 (1-OCH3)。上述數(shù)據(jù)與文獻報道一致[10-11]，故鑒定化合物3為1-甲氧基-7R,8S-二羥基苯丙醇。

化合物4：白色粉末；分子式C10H10O4；ESI-MSm/z: 195.1 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz,CD3OD)δ:7.02 (1H,d,J=2.0 Hz,H-2),6.76 (1H,d,J=8.0 Hz,H-5),6.92 (1H,dd,J=8.0,2.0 Hz,H-6),7.52 (1H,d,J=16.0,H-7),6.24 (1H,d,J=16.0,H-7),3.73 (3H,OCH3)。上述數(shù)據(jù)與文獻報道一致[12]，故鑒定化合物4為咖啡酸甲酯。

化合物5：白色粉末；C8H8O5；ESI-MSm/z: 184.0[M＋H]+；1H-NMR (400 MHz,methanol-d4)δ: 7.03(2H,s,H-2,5),3.80 (3H,s,OCH3)。上述數(shù)據(jù)與文獻報道一致[13]，故鑒定化合物5為沒食子甲酯。

化合物6：無色膠狀物；[α]20D＋42.3°(c0.1,MeOH)；分子式C11H20O6；ESI-MSm/z: 271.2 [M＋Na]+；1H-NMR (400 MHz,CD3OD)δ: 5.36 (1H,td,J=6.4,1.2 Hz,H-2),4.32 (1H,dd,J=11.6,6.4 Hz,H-1a),4.27 (1H,d,J=7.6 Hz,H-1′),4.21 (1H,dd,J=11.6,7.6 Hz,H-1b),3.86 (1H,dd,J=12.0,2.0 Hz,H-6′a),3.66 (1H,dd,J=12.0,5.6 Hz,H-6′b),3.23(1H,m,H-5′),3.30 (2H,m,H-3′,4′),3.16 (1H,t,J=8.4 Hz,H-2′),1.75 (3H,s,CH3-4),1.69 (3H,s,CH3-5)。上述數(shù)據(jù)與文獻報道一致[14]，故鑒定化合物6為3-甲基2-烯丁醇-1-葡萄糖苷。

化合物7：白色粉末；[α]20D?40°(c0.1,MeOH)；C10H13N5O4；HR-ESI-MSm/z: 290.085 6 [M＋Na]+(計算值290.086 0，C10H13N5O4Na)；1H-NMR (400 MHz,CD3OD)δ: 8.30 (1H,s,H-2),8.17 (1H,s,H-8),5.95 (1H,d,J=6.4 Hz,H-1′),4.73 (1H,dd,J=6.4,5.2 Hz,H-2′),4.31 (1H,dd,J=5.2,2.4 Hz,H-3′),4.16 (1H,brd,J=2.4 Hz,H-4′),3.88 (1H,dd,J=12.8,2.4 Hz,H-5′a),3.74 (1H,dd,J=12.8,2.4 Hz,H-5′b)；13C-NMR (100 MHz,CD3OD)δ: 157.6 (C-6,C),153.5 (C-2,CH),150.1 (C-4,C) ,142.0 (C-8,CH),121.1 (C-5,C),91.3 (C-1′,CH),88.2 (C-4′,CH),75.5(C-2′,CH),72.7 (C-3′,CH),63.5 (C-5′,CH2)。上述數(shù)據(jù)與文獻報道一致[15]，故鑒定化合物7為腺苷。

化合物8：白色粉末；[α]20D＋26.1°(c0.5,MeOH)；C20H24O9；ESI-MSm/z: 409.1 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ: 6.23 (1H,d,J=9.2 Hz,H-3),7.95 (1H,d,J=9.2 Hz,H-4),7.49 (1H,s,H-5),6.83 (1H,s,H-8),4.84 (1H,t,J=4.8 Hz,H-2′),3.17 (2H,dd,J=15.6,4.8 Hz,H2-3′),1.24 (3H,s,CH3-5′),1.27 (3H,s,CH3-6′),4.41 (1H,d,J=7.6 Hz,H-1′′),2.84～4.50 (6H,m,2′′～5′′,6′′a,6′′b),3.86(1H,dd,J=12.0,2.0 Hz,H-6′a),3.65 (1H,dd,J=12.0,5.6 Hz,H-6′a)；13C-NMR (100 MHz,DMSO-d6)δ: 161.0 (C-2,C),112.7 (C-3,CH),145.2 (C-4,CH),124.4 (C-5,CH),126.1 (C-6,C),163.6 (C-7,C),97.3(C-8,CH),155.5 (C-9,C),111.8 (C-10,C),90.6 (C-2′,CH),29.3 (C-3′,CH2),77.4 (C-4′,C),23.0 (C-5′,CH3),23.6 (C-6′,CH3),97.8 (C-1′′,CH),74.0 (C-2′′,CH),77.0 (C-3′′,CH),70.6 (C-4′′,CH),77.4 (C-5′′,CH),61.4 (C-6′′,CH2)。上述數(shù)據(jù)與文獻報道一致[16]，故鑒定化合物8為紫花前胡苷。

化合物9：無色膠狀物；[α]20D＋21.9°(c0.1,MeOH)；分子式C19H32O7；ESI-MSm/z: 373.2 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ: 1.97 (1H,d,J=17.2 Hz,H-2a),2.47 (1H,d,J=17.2 Hz,H-2b),5.79 (1H,s,H-4),1.96 (1H,m,H-6),1.64 (1H,m,H-7a),1.79 (1H,m,H-7b),1.62 (1H,m,H-8a),1.65(1H,m,H-8b),3.80 (1H,m,H-9),1.24 (3H,d,J=6.0 Hz,CH3-10),1.00 (3H,s,CH3-11),1.08 (3H,s,CH3-12),2.03 (3H,s,CH3-13),4.31 (1H,d,J=7.6 Hz,H-1′),3.10～3.49 (4H,m,H-2′～5′),3.66 (1H,dd,J=12.0,4.0 Hz,H-6a′),3.85 (1H,d,J=12.0 Hz,H-6b′)；13C-NMR (100 MHz,DMSO-d6)δ: 37.4 (C-1,C),48.1 (C-2,CH2),202.4 (C-3,C),125.4 (C-4,CH),169.9 (C-5,C),52.5 (C-6,CH),26.6 (C-7,CH2),37.4(C-8,CH2),77.8 (C-9,CH),21.9 (C-10,CH3),29.0(C-11,CH3),27.5 (C-12,CH3),25.0 (C-13,CH3),104.0 (C-1′,CH),75.3 (C-2′,CH),78.2 (C-3′,CH),71.7 (C-4′,CH),77.6 (C-5′,CH),62.8 (C-6′,CH2)。上述數(shù)據(jù)與文獻報道一致[17]，故鑒定化合物9為blumenol C glucoside。

化合物10：無色膠狀物；[α]20D＋38.0°(c0.3,MeOH)；分子式C19H30O7；ESI-MSm/z: 371.2 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz,CD3OD)δ: 2.05 (1H,d,J=16.8 Hz,H-2a),2.48 (1H,d,J=16.8 Hz,H-2b),5.88(1H,s,H-4),2.69 (1H,d,J=9.2 Hz,H-6),5.75 (1H,dd,J=15.2,9.2 Hz,H-7b),5.58 (1H,dd,J=15.2,7.2 Hz,H-8),4.47 (1H,brt,J=6.4 Hz,H-9),1.28 (3H,d,J=6.4 Hz,CH3-10),0.98 (3H,s,CH3-11),1.02 (3H,s,CH3-12),1.98 (3H,s,CH3-13),4.28 (1H,d,J=7.6 Hz,H-1′),3.10～3.49 (4H,m,2′～5′),3.62 (1H,dd,J=11.6,6.4 Hz,H-6a′),3.84 (1H,dd,J=11.6,2.0 Hz,H-6b′)；13C-NMR (100 MHz,CD3OD)δ: 37.2(C-1,C),48.5 (C-2,CH2),202.0 (C-3,C),126.2 (C-4,CH),165.7 (C-5,C),56.9 (C-6,CH),131.2 (C-7,CH),137.0 (C-8,CH),74.8 (C-9,CH),22.2 (C-10,CH3),27.4 (C-11,CH3),28.0 (C-12,CH3),23.9 (C-13,CH3),101.2 (C-1′,CH),75.0 (C-2′,CH),78.4 (C-3′,CH),71.7 (C-4′,CH),78.2 (C-5′,CH),62.9 (C-6′,CH2)。上述數(shù)據(jù)與文獻報道一致[18]，故鑒定化合物10為(6R,9S)-3-氧-α-紫羅蘭醇-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物11：無色膠狀物；[α]20D＋49.9°(c0.2,MeOH)；分子式C19H30O8；ESI-MSm/z: 387.2 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz,CD3OD)δ: 2.16 (1H,d,J=17.2 Hz,H-2a),2.61 (1H,d,J=17.2 Hz,H-2b),5.86(1H,s,H-4),5.85 (1H,d,J=15.6,Hz,H-7),5.72(1H,dd,J=15.2,7.2 Hz,H-8),4.53 (1H,dd,J=7.2,6.4 Hz,H-9),1.27 (3H,d,J=6.4 Hz,CH3-10),1.01(3H,s,CH3-11),1.03 (3H,s,CH3-12),1.94 (3H,s,CH3-13),4.26 (1H,d,J=7.6 Hz,H-1′),3.16 (1H,dd,J=7.6,8.8 Hz,H-2′),3.18 (1H,dd,J=8.8,7.6 Hz,H-3′),3.25 (1H,t,J=7.6 Hz,H-4′),3.24 (1H,m,H-5′),3.62 (1H,dd,J=12.0,6.4 Hz,H-6a′),3.84 (1H,dd,J=11.6,1.6 Hz,H-6b′)；13C-NMR (100 MHz,CD3OD)δ: 42.4 (C-1,C),50.8 (C-2,CH2),201.3(C-3,C),127.1 (C-4,CH),167.1 (C-5,C),80.0 (C-6,C),133.7 (C-7,CH),133.8 (C-8,CH),74.6 (C-9,CH),22.2 (C-10,CH3),23.5 (C-11,CH3),24.7 (C-12,CH3),19.6 (C-13,CH3),101.3 (C-1′,CH),75.0 (C-2′,CH),78.4 (C-3′,CH),71.7 (C-4′,CH),78.2 (C-5′,CH),62.8 (C-6′,CH2)。上述數(shù)據(jù)與文獻報道一致[19]，故鑒定化合物11為長壽花糖苷。

化合物12：黃色膠狀物；[α]20D–19.2°(c0.1,MeOH)；分子式C28H36O13；ESI-MSm/z: 581.2 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz,CD3OD)δ: 6.71 (2H,s,H-2,6),4.76 (1H,d,J=3.2 Hz,H-7),3.14 (1H,m,H-8),3.91 (1H,d,J=6.0 Hz,H-9a),4.28 (1H,d,J=8.4 Hz,H-9b),6.65 (2H,s,H-2′,6′),4.71 (1H,d,J=3.6 Hz,H-7′),3.14 (1H,m,H-8′),(1H,d,J=6.0 Hz,H-9′a),4.28 (1H,d,J=8.4 Hz,H-9′b),3.85 (6H,s,3,5-OCH3),3.84 (6H,s,3′,5′-OCH3),4.85 (1H,m,H-1′′),3.46 (1H,m,H-2′′),3.40 (2H,m,H-3′′,4′′),3.19 (1H,m,H-5′′),3.77 (1H,d,J=12.0 Hz,H-6′′a),3.65 (1H,dd,J=12.0,5.2 Hz,H-6′′b)；13C-NMR (100 MHz,CD3OD)δ: 139.6 (C-1,C),104.9 (C-2,CH),154.4 (C-3,C),135.6 (C-4,C),154.4 (C-5,C),104.9(C-6,CH),87.2 (C-7,CH),55.5 (C-8,CH),72.9 (C-9,CH2),56.8 (2-OCH3),133.1 (C-1′,C),104.6 (C-2′,CH),149.4 (C-3′,C),135.6 (C-4′,C),149.4 (C-5′,C),104.6 (C-6′,CH),87.6 (C-7′,CH),55.7 (C-8′,CH),72.9 (C-9′,CH2),57.1 (2-OCH3),105.4 (C-1′′,CH),75.7 (C-2′′,CH),77.8 (C-3′′,CH),71.4 (C-4′′,CH),78.4 (C-5′′,CH),62.6 (C-6′′,CH2)。上述數(shù)據(jù)與文獻報道一致[20]，故鑒定化合物12為長壽花糖苷。

化合物13：無色膠狀物；[α]20D＋35.6°(c0.1,MeOH)；C22H28O8；ESI-MSm/z: 421.2 [M＋H]+；1HNMR (400 MHz,CD3OD)δ: 6.51 (1H,s,H-8),6.31(2H,s,H-2′,6′),4.24 (1H,d,J=5.6 Hz,H-4),3.78(3H,s,7-OCH3),3.66 (6H,s,3′,5′-OCH3),3.59 (1H,dd,J=14.0,4.8 Hz,H-2aa),3.43 (3H,m,H2-3a,2ab),3.30 (3H,s,5-OCH3),2.64 (1H,dd,J=14.8,4.8 Hz,H-1a),2.51 (1H,dd,J=14.8,11.2 Hz,H-1b),1.89 (1H,m,H-3),1.56 (1H,m,H-2)；13C-NMR (100 MHz,CD3OD)δ: 130.2 (C-9,C),126.2 (C-10,C),147.7 (C-5,C),138.9 (C-6,C),148.6 (C-7,C),107.7(C-8,CH),33.6 (C-1,CH2),40.9 (C-2,CH),66.8(C-2a,CH2),139.3 (C-1′,C),106.8 (C-2′,6′,CH),149.0 (C-3′,5′,C),134.5 (C-4′,C),42.3 (C-4,CH),49.0 (C-3,CH),64.1(C-3a,CH2),60.1 (5-OCH3),56.6(7-OCH3),56.7 (3′,5′-OCH3)。上述數(shù)據(jù)與文獻報道一致[21-22]，故鑒定化合物13為(＋)-南燭木樹脂酚。

化合物14：無色膠狀物；[α]20D–72.1°(c0.3,MeOH)；C20H24O6；ESI-MSm/z: 361.2 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz,CD3OD)δ: 1.75 (1H,brt,J=10.0 Hz,H-3),2.00 (1H,m,H-2),2.77 (2H,d,J=7.6 Hz,H-1a),3.39 (1H,dd,J=4.0,11.2 Hz,H-2ab),3.66(1H,brd,J=11.2 Hz,H-2aa),3.66 (3H,m,H2-3a,1b),3.77 (3H,s,3′-OMe),3.80 (3H,s,7-OMe),6.17(1H,s,H-8),6.60 (1H,dd,J=8.0,1.6 Hz,H-6′),6.65(1H,s,H-5),6.66 (1H,d,J=1.6 Hz,H-2′),6.73 (1H,d,J=8.0 Hz,H-5′)；13C-NMR (100 MHz,CD3OD)δ:33.6 (C-1,CH2),40.0 (C-2,CH),48.0 (C-3,CH),48.1(C-4,CH),56.3 (3′-OMe),56.4 (3-OMe),62.2 (C-3a,CH2),65.9 (C-2a,CH2),112.4 (C-5,CH),113.8 (C-2′,CH),116.0 (C-5′,CH),117.4 (C-8,CH),123.2 (C-6′,CH),129.0 (C-9,C),134.2 (C-10,C),138.6 (C-1′,C),145.3 (C-6,C),146.0 (C-4′,C),147.2 (C-7,C),149.0(C-3′,C)。上述數(shù)據(jù)與文獻報道一致[23-24]，故鑒定化合物14為異落葉松脂素。

4 ABTS+自由基清除活性篩選

實驗采用ABTS+自由基清除法[4]評價花椒13個單體化合物的抗氧化能力。單體化合物和陽性對照Vc分別配制成5.0、1.0、0.5、0.1、0.01、0.001 mmol/mL的溶液，各取50 μL，添加到96孔細胞培養(yǎng)板的各孔中，再分別取150 μL ABTS+溶液，添加到96孔細胞培養(yǎng)板的每個孔中。在室溫下孵育6 min后，檢測734 nm處的吸光度（A），計算清除率和IC50值。

A0、A1和A2分別代表空白溶液的ABTS+溶液的A、測試樣品與ABTS+混合溶液的A和測試樣品的A

IC50值通過Origin 7.0獲得。單體化合物抗氧化活性結果見表2。實驗結果顯示，化合物2、4、5和12～14具有ABTS+自由基清除活性，其中化合物13和14的IC50分別為5.7、11.0 μmol/L，與陽性對照Vc的IC50（6.4 μmol/L）相當。

表2 化合物2、4、5和12～14的ABTS+和DPPH自由基清除活性Table 2 ABTS+ and DPPH radical-scavenging activities of compounds 2,4,5,and 12—14

5 DPPH自由基清除活性篩選

實驗采用DPPH自由基清除法[4,25-26]評價花椒13個單體化合物的抗氧化能力。單體化合物和陽性對照Vc分別配制成10.0、5.0、1.0、0.5、0.1、0.01、0.001 mmol/mL的溶液。各取50 μL，添加到96孔細胞培養(yǎng)板的每個孔中，再分別取130 μL DPPH溶液，添加到96孔細胞培養(yǎng)板的每個孔中。在室溫黑暗處放置30 min，檢測517 nm處的A值，計算清除率和IC50值。自由基清除活性的計算方法同ABTS+自由基清除活性篩選的方法。單體化合物抗氧化活性結果見表2。實驗結果顯示，化合物2、4、5和12～14具有DPPH自由基清除活性，其中化合物4、5和13的DPPH自由基清除活性IC50分別為61.2、19.8、101.0 μmol/L，與陽性對照Vc的IC50（53.0 μmol/L）相當。

6 討論

本實驗從花椒正丁醇部位分離并鑒定了1個新化合物和13個已知化合物，化合物2、4、5和12-14表現(xiàn)了抗氧化能力，ABTS+自由基清除活性結果表明化合物13和14活性最強，與陽性對照Vc的活性相當。DPPH自由基清除活性結果表明化合物4、5和13的活性最強，與Vc的活性相當，因此，化合物13可作為花椒抗氧化活性部位的指標性成分。研究結果豐富了花椒的化學物質基礎資料，為花椒抗氧化物質的研究和應用提供參考。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突