黃培芝，劉靈芝，汪 柳，趙鋼艷，吳 芳，何樹光

湖南中醫(yī)藥高等?？茖W校附屬第一醫(yī)院檢驗科，湖南株洲 412000

肝細胞肝癌(HCC)是常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，我國每年因肝癌死亡人數(shù)達35.81萬人，HCC病死率達25.85/100 000[1]。雖然近年來外科手術(shù)、介入栓塞術(shù)等新的治療手段提高了臨床治療HCC的療效，改善了HCC患者的生存預后，但由于患者早期臨床表現(xiàn)不明顯，一旦出現(xiàn)肝區(qū)疼痛、鞏膜黃染、消瘦等表現(xiàn)時已處于中晚期，失去最佳手術(shù)時機[2]。甲胎蛋白(AFP)是常用的診斷HCC的腫瘤標志物，但臨床上發(fā)現(xiàn)約40%的HCC患者AFP無異常變化，并且AFP在肝炎、肝硬化，以及睪丸癌等惡性腫瘤中也會出現(xiàn)表達升高的現(xiàn)象[3]。因此，深入探討HCC的疾病發(fā)生、發(fā)展機制，尋找能夠早期診斷并具有較高特異度的血清腫瘤標志物具有重要意義?；|(zhì)細胞衍生因子-1(SDF-1)又稱CXCL12，位于10q11.21，編碼蛋白屬于基質(zhì)細胞衍生的α趨化因子家族成員，可充當G蛋白偶聯(lián)受體、趨化因子受體4的配體，參與胚胎發(fā)育、免疫監(jiān)視及腫瘤生長和轉(zhuǎn)移等多種病理、生理過程[4]。有研究表明，腫瘤中存在SDF-1異常高表達的現(xiàn)象，并且能夠分泌到患者外周血中，檢測患者外周血SDF-1水平有利于腫瘤的早期診斷及預后判斷[5]。單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)也稱CCL2，基因位于17q12，該基因編碼蛋白屬于趨化因子CC亞家族成員，結(jié)構(gòu)上具有兩個相鄰的半胱氨酸殘基，能與趨化因子受體CCR2和CCR4結(jié)合，對單核細胞和嗜堿性粒細胞具有趨化活性，參與免疫調(diào)節(jié)和炎性反應過程。有研究表明，腫瘤中MCP-1的異常表達升高能夠作為旁分泌生長因子促進腫瘤細胞的增殖，誘導腫瘤血管的新生，導致腫瘤的惡性進展[6]。目前，關(guān)于SDF-1、MCP-1在肝癌患者血清中的表達水平及意義的相關(guān)報道較少，本研究通過分析SDF-1、MCP-1在肝癌患者血清中的表達，探討二者的臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年4月至2020年4月本院診治的179例HCC患者納入HCC組，其中男99例，女80例；年齡34～73歲，平均(43.6±6.2)歲；腫瘤最大徑<3 cm者96例，≥3 cm者83例；腫瘤TNM分期Ⅰ～Ⅱ期126例，Ⅲ～Ⅳ期53例；腫瘤分化：高中分化104例，低分化75例；伴遠處轉(zhuǎn)移25例，無遠處轉(zhuǎn)移154例；AFP<400 ng/mL者101例，≥400 ng/mL者78例。納入標準：(1)HCC的診斷參考2015年《原發(fā)性肝癌規(guī)范化病理診斷指南》診斷標準[7]。(2)HCC患者均為首次診治，既往未接受過其他治療。(3)患者無嚴重肝腎功能障礙。排除標準：(1)合并肝膿腫、結(jié)核分枝桿菌感染等。(2)梅毒螺旋體抗體陽性。(3)合并自身免疫性疾病。68例肝良性病變患者納入病例對照組，其中男41例，女27例；年齡33～77歲，平均(41.5±6.2)歲。62例體檢健康人員作為健康對照組，其中男35例，女27例；年齡32～78歲，平均(44.5±7.2)歲。3組間性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。本研究經(jīng)本院醫(yī)學倫理委員會審核批準后進行，患者及家屬對本研究知情同意并已簽字。

1.2方法 采集所有研究對象清晨空腹靜脈血5 mL，乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝，室溫靜置1 h，2 500 r/min離心10 min，離心半徑10 cm，吸取上層血清在—80 ℃冰箱保存。通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測各組研究對象血清SDF-1、MCP-1水平。人SDF-1、MCP-1 ELISA檢測試劑盒購自Abcam公司，批號分別為ab100637、ab179886，檢測嚴格按照相關(guān)說明書操作。SDF-1檢測范圍為0.94～6.00 μg/L，MCP-1檢測范圍為4.70～300.00 pg/mL。采用電化學發(fā)光法應用Cobase601電化學發(fā)光免疫分析儀對血清AFP進行檢測，AFP試劑盒購自Roche公司。

2 結(jié) 果

2.1各組血清SDF-1、MCP-1水平比較 3組間血清SDF-1、MCP-1水平比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。HCC組血清SDF-1、MCP-1水平明顯高于病例對照組及健康對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。病例對照組與健康對照組血清SDF-1、MCP-1水平比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組血清SDF-1、MCP-1水平比較

2.2不同特征HCC患者血清SDF-1、MCP-1水平比較 TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、低分化HCC患者血清SDF-1、MCP-1水平明顯高于TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、高中分化HCC患者，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。不同性別、年齡、腫瘤最大徑、血清AFP水平及遠處轉(zhuǎn)移情況患者血清SDF-1、MCP-1水平比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

2.3HCC組患者血清SDF-1與MCP-1水平的相關(guān)性 血清SDF-1與MCP-1水平在HCC患者中的表達呈正相關(guān)(r=0.612，P<0.001)。

表2 不同特征HCC患者血清SDF-1、MCP-1水平比較

2.4血清SDF-1、MCP-1單獨及聯(lián)合檢測對HCC的診斷價值 血清SDF-1、MCP-1單獨診斷時取約登指數(shù)最大時的值作為最佳截斷值，二者同為陽性或陰性時診斷為陽性或陰性，一陰一陽時，陽性診斷參考SDF-1指標(靈敏度較高)，陰性診斷參考MCP-1指標(特異度較高)，并結(jié)合臨床醫(yī)師的觀點綜合判斷。血清SDF-1、MCP-1單獨及聯(lián)合檢測的ROC曲線下面積(AUC)分別為0.839、0.741、0.913，見表3和圖1。

表3 血清SDF-1、MCP-1單獨及聯(lián)合檢測對HCC的診斷價值

圖1 血清SDF-1、MCP-1單獨及聯(lián)合檢測對HCC的診斷價值

3 討 論

肝癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，全球每年新發(fā)病例約78.2萬，死亡例數(shù)約74.5萬，并且肝癌的發(fā)病率有逐漸升高的趨勢，嚴重威脅人類健康[8]。肝癌的病理類型分為HCC、肝內(nèi)膽管細胞癌和混合型3種，其中以HCC最為常見。臨床上HCC的治療包括手術(shù)治療、介入治療、靶向藥物治療及免疫治療等，但部分患者即使經(jīng)積極治療后仍可出現(xiàn)復發(fā)及遠處轉(zhuǎn)移，導致患者預后不佳[9]。因此，有必要研究HCC的發(fā)病機制，尋找新的HCC腫瘤標志物。有學者報道，腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與腫瘤微環(huán)境密切相關(guān)，特別是腫瘤微環(huán)境中的免疫細胞，如T淋巴細胞、巨噬細胞等的功能異?？蓪е履[瘤細胞發(fā)生免疫逃逸，促進腫瘤的發(fā)生和發(fā)展[10]。

SDF-1基因位于人類10號染色體，其編碼蛋白是一種趨化因子，主要由骨髓基質(zhì)細胞分泌，具有促進骨髓、血管、淋巴管生成的作用。研究表明，乳腺癌、前列腺癌等腫瘤中存在SDF-1表達水平升高的現(xiàn)象，其能夠通過結(jié)合其配體CXCR4，促進腫瘤的惡性進展，與患者的不良預后密切相關(guān)[11]。本研究結(jié)果顯示，HCC組血清SDF-1水平明顯高于病例對照組及健康對照組，其機制可能與轉(zhuǎn)錄后表達調(diào)控異常有關(guān)。有學者報道，腫瘤中微小RNA-137表達水平降低，導致其SDF-1信使RNA的穩(wěn)定性升高，促進腫瘤細胞SDF-1的表達水平升高[11]。此外，TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、低分化HCC患者血清SDF-1、MCP-1水平明顯高于TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、高中分化HCC患者，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，表明SDF-1的高表達可能參與促進HCC中腫瘤細胞的惡性進展。有研究結(jié)果顯示，腫瘤細胞中SDF-1能夠通過自分泌或旁分泌的方式，與細胞表面的CXCR4配體結(jié)合，進而激活細胞內(nèi)核因子κB信號通路，促進下游癌基因如c-myc的表達，導致腫瘤細胞過度增殖[12-13]。此外，SDF-1還可通過激活蛋白激酶B，抑制促凋亡因子如Bax的表達，促進抗凋亡基因如Bcl-2等的表達，抑制腫瘤細胞的程序性細胞死亡，導致腫瘤的分期升高[14-15]。

MCP-1基因位于人類17號染色體，其編碼蛋白包括76個氨基酸，可由正常組織細胞、內(nèi)皮細胞及免疫細胞等分泌產(chǎn)生。近年來研究表明，在膠質(zhì)瘤、前列腺癌等腫瘤中均存在MCP-1表達升高的現(xiàn)象，其能夠結(jié)合其配體CCR2，促進腫瘤細胞內(nèi)磷脂酰肌醇3激酶的磷酸化激活，導致腫瘤細胞的無限增殖[16-17]。本研究結(jié)果顯示，HCC組血清中MCP-1表達明顯高于病例對照組及健康對照組。分析其原因，可能是腫瘤微環(huán)境中的腫瘤相關(guān)巨噬細胞釋放MCP-1增多，導致血清中MCP-1水平升高，MCP-1 能夠招募大量單核細胞進入腫瘤組織，形成免疫抑制的微環(huán)境，促進腫瘤的惡性進展[18]。此外，HCC組患者血清MCP-1的表達與腫瘤TNM分期關(guān)系密切，其原因可能是MCP-1能結(jié)合腫瘤細胞表面的CXCR4，激活蛋白激酶B信號通路，促進下游c-myc等癌基因的表達，導致腫瘤細胞的惡性增殖，引起腫瘤分期升高[19]。此外，腫瘤細胞分泌的MCP-1能夠趨化單核巨噬細胞進入腫瘤組織局部，進而分泌產(chǎn)生血管內(nèi)皮生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子β等，促使腫瘤細胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，導致HCC細胞的遷移、侵襲等生物學過程[20]。本研究進一步分析血清SDF-1、MCP-1表達對HCC的診斷價值，結(jié)果表明SDF-1與MCP-1聯(lián)合檢測診斷HCC的靈敏度為82.1%，高于二者單獨檢測。以往研究表明，AFP對肝癌診斷的靈敏度為70%～80%，特異度為70%～90%。雖然本研究SDF-1、MCP-1單一指標診斷HCC的特異度并不優(yōu)于AFP，但SDF-1、MCP-1聯(lián)合檢測的靈敏度明顯升高，表明聯(lián)合檢測血清SDF-1與MCP-1水平有可能成為潛在的HCC診斷標志物，值得臨床深入研究。本研究中，HCC患者血清中SDF-1與MCP-1水平呈顯著正相關(guān)(r=0.612，P<0.001)。有學者報道，腫瘤處于一種缺氧的微環(huán)境中，腫瘤細胞缺氧導致缺氧誘導因子1A(HIF-1A)表達水平升高，HIF-1A能夠直接結(jié)合SDF-1、MCP-1的啟動子區(qū)，促進兩者的表達[21]。但HCC中SDF-1與MCP-1的相互作用機制有待深入研究。

綜上所述，HCC患者血清SDF-1、MCP-1表達上調(diào)，二者水平呈顯著正相關(guān)。HCC患者血清SDF-1、MCP-1水平與腫瘤TNM分期及腫瘤分化程度關(guān)系密切。聯(lián)合檢測血清SDF-1、MCP-1可能成為新的診斷HCC的方法。