袁 博，胡俊輝

（南京航空航天大學(xué) 機(jī)械結(jié)構(gòu)力學(xué)及控制國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南京210016）

0 引 言

隨著生物技術(shù)的發(fā)展，各類微生物可以為我們提供諸如生物藥品、生物化學(xué)試劑、生物柴油、生物催化劑、生物敏感材料［1?2］等生物產(chǎn)品。因?yàn)榻^大部分有用的細(xì)胞產(chǎn)物都位于細(xì)胞內(nèi)部，所以需要使用一定的手段對(duì)細(xì)胞產(chǎn)物進(jìn)行釋放。利用某些方法對(duì)生物細(xì)胞的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜進(jìn)行破碎，從細(xì)胞內(nèi)部釋放產(chǎn)物的過程被稱為細(xì)胞破碎。常見的細(xì)胞破碎方法按照是否利用機(jī)械作用力，可分為機(jī)械破碎法（如珠磨法、高壓均質(zhì)法、超聲處理法等）和非機(jī)械破碎法（如酶處理法、化學(xué)試劑法、微波處理法等）［3?5］。在機(jī)械破碎法中，超聲破碎法因?yàn)槟芴幚淼蛣┝繕悠?、操作?jiǎn)便、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單可靠等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室的細(xì)胞破碎。

超聲破碎的設(shè)備具有多種形狀和工作方式，按照破碎設(shè)備與樣品是否直接接觸，可以分為接觸式和非接觸式兩種［6］。接觸式超聲破碎儀通常采用帶有變幅桿結(jié)構(gòu)的換能器，將變幅桿的端部伸入被破碎樣品的溶液或懸濁液中，變幅桿端部振動(dòng)在液體中產(chǎn)生的超聲波對(duì)細(xì)胞進(jìn)行破碎。接觸式破碎儀的局限性在于：與被破碎樣品相接觸的變幅桿端部會(huì)造成交叉污染，在破碎細(xì)菌與病毒時(shí)產(chǎn)生感染性氣霧；而其優(yōu)點(diǎn)在于聲輻射端面與液體樣品直接接觸，超聲處理的效率較高。最初的非接觸式超聲破碎儀使用貼有超聲換能器的水槽，把盛有被破碎樣品溶液或懸濁液的密封試管浸入開啟了超聲的水槽中，進(jìn)行破碎工作。由于超聲波會(huì)在試管壁發(fā)生反射并在水中發(fā)生衰減，故該方法的能量利用效率低、破碎效果差。為解決非接觸式超聲破碎儀的這些問題，美國(guó)Covaris公司在2019年提出了利用設(shè)置在水槽底部的高頻聚焦型超聲換能器進(jìn)行非接觸式破碎的方法，該方法能有效提高超聲系統(tǒng)的破碎效果。

為了進(jìn)一步提升超聲系統(tǒng)的破碎效果，本文提出了一種以周期性齒槽結(jié)構(gòu)為聲輻射單元的非接觸式超聲破碎儀，并對(duì)其樣機(jī)性能進(jìn)行了測(cè)試與分析。該破碎儀的特點(diǎn)是在普通的水槽式破碎儀中增加了一個(gè)周期性齒槽結(jié)構(gòu)，作為聲輻射單元。以螺旋藻作為被破碎對(duì)象進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：齒槽結(jié)構(gòu)的超聲破碎儀破碎性能優(yōu)于非齒槽結(jié)構(gòu)的超聲破碎儀。有限元聲場(chǎng)分析表明：這個(gè)結(jié)構(gòu)具有一定的聲能匯聚效果，在槽中會(huì)產(chǎn)生較大的聲壓，進(jìn)而提升超聲破碎的破碎效果。

1 超聲破碎儀的主體結(jié)構(gòu)

本文的非接觸式超聲破碎儀的主體結(jié)構(gòu)如圖1（a）所示。整體分為4個(gè)部分，從下往上分別是換能器、水槽、齒槽結(jié)構(gòu)的聲輻射單元、試管支架，實(shí)際樣機(jī)如圖1（b）所示。工作時(shí)水槽中充滿水，作為聲介質(zhì)。最底部是頻率為33.3 kHz的夾心式超聲換能器，換能器上方粘有一個(gè)由不銹鋼制作的水槽，尺寸如圖1（c）所示。水槽長(zhǎng)90 mm，寬80 mm，高50 mm，由厚度為1 mm的不銹鋼板構(gòu)成。水槽底面上方粘接了鋁合金材質(zhì)的周期性齒槽結(jié)構(gòu)作為聲輻射單元，其尺寸如圖1（d）所示。為了能利用齒的縱向振動(dòng)對(duì)齒間的水進(jìn)行勵(lì)振，采用三角形齒。1.5 mL規(guī)格的尖頭離心管作為樣品試管，其材質(zhì)是聚丙烯塑料。

圖1 非接觸式超聲破碎儀的主體結(jié)構(gòu)與尺寸

由于試管尖端需伸入齒槽中，所以齒間距應(yīng)大于離心管直徑。實(shí)驗(yàn)中離心管的圓柱部分直徑為10 mm，齒和齒之間的寬度設(shè)計(jì)為15 mm。為了使得齒間聲壓較高的區(qū)域能覆蓋試管中被破碎液體的區(qū)域，齒的高度需要大于試管內(nèi)液體的高度。實(shí)驗(yàn)中尖頭離心管的錐形部分高度是15 mm，齒的高度設(shè)計(jì)為20 mm。為了便于在齒間發(fā)生足夠強(qiáng)的聲空化，選用工作頻率在30 kHz附近的低頻換能器。

2 工作聲場(chǎng)的有限元分析

為了確認(rèn)周期性齒槽結(jié)構(gòu)的聲聚焦性能，我們利用COMSOL有限元軟件對(duì)破碎儀的主體結(jié)構(gòu)進(jìn)行了振動(dòng)與聲場(chǎng)分析。首先，基于破碎儀主體結(jié)構(gòu)的尺寸與材料，建立了如圖2（a）和圖2（b）所示的三維物理模型，用于對(duì)壓電?固體振動(dòng)?聲的耦合場(chǎng)進(jìn)行有限元分析。壓電片材質(zhì)為PZT?4，相鄰壓電片的極化方向相反。換能器的前后端蓋材質(zhì)分別為鋼和鋁，水槽材質(zhì)為不銹鋼（SUS304），齒形結(jié)構(gòu)的材質(zhì)為鋁合金（2024）。水槽中水域的高度為30 mm。有限元模型中的邊界條件設(shè)定如下：水和空氣的界面為軟聲場(chǎng)邊界，水和水槽的接觸界面為聲?結(jié)構(gòu)耦合邊界，固體和空氣的接觸界面為自由振動(dòng)邊界，如圖2（c）所示。有限元模型的網(wǎng)格剖分情況如圖3所示，單元形狀為自由剖分四面體，對(duì)聲場(chǎng)和勵(lì)振面附近的求解區(qū)域進(jìn)行細(xì)化剖分。計(jì)算中，工作頻率為32.7 kHz，施加于壓電片兩端的電壓為80 V。

圖2 超聲破碎儀的物理模型

圖3 超聲破碎儀的網(wǎng)格劃分

基于上述模型計(jì)算得到的水槽中的聲壓分布如圖4所示。由圖4（a）可知，在3個(gè)槽的中間部位都存在一些聲壓較大的區(qū)域。破碎儀的中間截面如圖4（b）所示。由圖4（b）可知，在3個(gè)槽的中心位置均存在聲壓較大的區(qū)域，且中間槽內(nèi)的聲壓大于兩側(cè)的聲壓。圖4（c）表示3個(gè)槽內(nèi)部長(zhǎng)度方向（x軸方向）的聲壓分布情況。由圖4（c）可知，中間槽的最大聲壓處位于槽的中心位置且其幅值較大，而兩側(cè)槽的聲壓較大的位置處同樣位于槽的中心位置，但其幅值比中間槽的大約低三分之一。因此，中間槽及兩側(cè)齒槽的中心位置時(shí)都可以用于非接觸式破碎。

圖4 聲場(chǎng)分布

3 螺旋藻破碎實(shí)驗(yàn)

選擇上海光語生物科技有限公司提供的GY?D18螺旋藻作為被破碎樣品。實(shí)驗(yàn)的主要設(shè)備有：自制的帶有齒槽結(jié)構(gòu)的非接觸式超聲破碎儀，其齒寬為10 mm，齒高為20 mm，齒間距為15 mm，水槽長(zhǎng)寬高分別為90 mm、80 mm、50 mm，工作頻率31.03 kHz；自制的無齒槽結(jié)構(gòu)的超聲破碎儀，其水槽長(zhǎng)寬高同樣分別為90 mm、80 mm、50 mm，工作頻率為32.90 kHz；用于觀察破碎實(shí)驗(yàn)結(jié)果的顯微鏡（Keyence VHX?1000），使用200倍光學(xué)放大倍數(shù)；使用1.5 mL規(guī)格的的尖底聚丙烯塑料試管。

在破碎過程中，試管插入破碎儀的試管支架。超聲換能器輸入的電功率為20 W，超聲信號(hào)的開啟和關(guān)閉時(shí)間分別為10 s／10 s，破碎時(shí)間從3 min至21 min，每隔3 min取樣并用顯微鏡進(jìn)行觀察統(tǒng)計(jì)。對(duì)于顯微鏡拍攝的圖象，利用圖象處理方法對(duì)目標(biāo)樣品進(jìn)行測(cè)量。其主要步驟（如圖5所示）包括：利用Canny算子進(jìn)行邊緣檢測(cè)獲得二值化圖象；使用輪廓檢測(cè)方法獲得被檢測(cè)物體的位置和尺寸信息；最終對(duì)圖象中的細(xì)胞碎片進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，獲得細(xì)胞碎片尺寸分布圖。

圖5 圖象處理步驟

圖6（a）所示出的是破碎之前樣品螺旋藻的顯微鏡照片和長(zhǎng)度分布圖?？梢园l(fā)現(xiàn)，未被破碎的螺旋藻長(zhǎng)度從100μm至700μm不等，主要長(zhǎng)度分布在150μm至450μm之間。圖6（b）是使用齒槽結(jié)構(gòu)的超聲破碎儀進(jìn)行12 min破碎以后螺旋藻碎片的顯微鏡照片及其長(zhǎng)度分布圖，細(xì)胞碎片的尺寸范圍在5μm～40μm之間，主要長(zhǎng)度分布在5μm～25μm之間。圖6（c）是傳統(tǒng)破碎儀在工作12 min后的破碎結(jié)果，其碎片尺寸在5μm～170μm之間，其中主要長(zhǎng)度分布在10μm～80μm之間。因此，在其他條件相同的情況下，齒槽結(jié)構(gòu)超聲破碎儀產(chǎn)生的碎片尺寸要明顯小于傳統(tǒng)破碎儀的碎片尺寸，齒槽結(jié)構(gòu)超聲破碎儀具有更強(qiáng)的破碎效果。

圖6 齒槽結(jié)構(gòu)超聲破碎儀與傳統(tǒng)超聲破碎儀的破碎效果比較（左邊為顯微鏡照片，右邊為尺寸分布圖）

圖7所示出的是被處理樣品平均長(zhǎng)度和40μm以下碎片占比隨聲輻射時(shí)間的變化。由圖7（a）可以發(fā)現(xiàn)：使用齒槽結(jié)構(gòu)聲輻射單元時(shí)，通過3 min的聲輻射，被處理樣品的平均長(zhǎng)度就到達(dá)了20μm左右，在接下來的時(shí)間，平均長(zhǎng)度隨時(shí)間變化非常?。ㄍＡ粼?2μm左右）；而對(duì)于不使用齒槽結(jié)構(gòu)的破碎儀，破碎過程相對(duì)緩慢很多，在9 min的聲輻射以后，長(zhǎng)度下降開始緩慢趨于平穩(wěn)，長(zhǎng)度減小的速度開始下降（停留在30μm左右）。由圖7（b）可以發(fā)現(xiàn)：使用齒槽結(jié)構(gòu)聲輻射單元時(shí)，40μm以下碎片占比同樣在3 min到達(dá)90%，后續(xù)增長(zhǎng)緩慢（停留在94%左右）；而不使用齒槽結(jié)構(gòu)時(shí)，40μm以下碎片占比的增速到9分鐘以后才明顯下降（停留在78%左右）。由于實(shí)驗(yàn)中兩種超聲破碎儀的功率都是20 W，因此使用齒槽結(jié)構(gòu)聲輻射單元會(huì)顯著提升破碎效率與效果。

圖7 齒槽結(jié)構(gòu)超聲破碎儀與傳統(tǒng)超聲破碎儀的特性對(duì)比

4 結(jié) 語

根據(jù)仿真和實(shí)驗(yàn)結(jié)果，得出如下結(jié)論：

1）本文的周期性齒槽結(jié)構(gòu)聲輻射單元具有一定的聲能聚集功能，可以在齒間產(chǎn)生較大的聲壓區(qū)域。

2）和傳統(tǒng)的非接觸式超聲破碎儀相比，基于周期性齒槽結(jié)構(gòu)聲輻射單元的超聲破碎儀的破碎效率更高，破碎效果更佳。

綜上所述，在非接觸式超聲破碎中，使用周期性齒槽結(jié)構(gòu)聲輻射單元有利于提高聲能利用率與破碎能力。