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頭部電針對(duì)腦梗死大鼠尿液代謝組學(xué)影響的研究*

2021-05-13 13:27:16路思宇王東巖楊海永麻聰聰趙亞楠
針灸臨床雜志 2021年4期
關(guān)鍵詞:代謝物電針尿液

路思宇,王東巖,楊海永,麻聰聰,陳 崇,趙亞楠

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué),黑龍江 哈爾濱 150040;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院,黑龍江 哈爾濱 150001)

腦卒中是全球范圍內(nèi)引起死亡和殘疾的主要原因。我國(guó)中風(fēng)發(fā)病率因人口老齡化的加劇逐年升高,其中,缺血性卒中,即腦梗死,占70%以上[1]。隨著腦卒中防治手段的逐步發(fā)展,腦梗死的死亡率已有所下降。然因其殘存神經(jīng)功能缺損患者的數(shù)量仍居高不下,致使患者因肢體和心理障礙難以適應(yīng)并回歸社會(huì),對(duì)患者及其家庭產(chǎn)生巨大負(fù)擔(dān)。尋找有效的治療方法是腦梗死一項(xiàng)亟待解決的問題。目前,臨床上治療腦梗死主要通過藥物(包括溶栓治療)、針灸和推拿等中醫(yī)療法以及康復(fù)治療、手術(shù)等。電針作為腦缺血的有效治療手法,已得到學(xué)者們的廣泛證實(shí)[2-3],但其具體的治療機(jī)制尚未闡明。代謝組學(xué)是研究生命系統(tǒng)被干擾后(如病理生理刺激或基因改變)其代謝產(chǎn)物的種類、數(shù)量與其變化規(guī)律的一門跨領(lǐng)域?qū)W科[4]。代謝組學(xué)通過對(duì)生物樣本中代謝產(chǎn)物的快速、全面分析來闡明其生理或病理途徑[5]。與基因組、轉(zhuǎn)錄組或蛋白質(zhì)組的底物不同,代謝組的產(chǎn)物包含了大量化學(xué)性質(zhì)不同的化合物,如氨基酸、神經(jīng)遞質(zhì)、鹽、酸和脂類等[6]。這使得代謝組學(xué)可以采用自上而下的策略,從代謝網(wǎng)絡(luò)的最終產(chǎn)物反映生物體的功能,并從整體的角度理解外在干預(yù)對(duì)于整個(gè)系統(tǒng)的代謝造成的影響。這種性質(zhì)與中醫(yī)的整體觀念相互契合,對(duì)于中醫(yī)證候、預(yù)防醫(yī)學(xué)、療效評(píng)價(jià)和針灸等循證醫(yī)學(xué)的科學(xué)表達(dá)提供了良好契機(jī)[7]。代謝組學(xué)也可以通過分析代謝紊亂和腦梗死之間的內(nèi)在聯(lián)系,得出腦梗死的相關(guān)代謝產(chǎn)物及通路,進(jìn)而揭示其致病的內(nèi)在靶點(diǎn)。

本實(shí)驗(yàn)采用超高效液相色譜與四級(jí)桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜(UPLC-Q-TOF-MS)對(duì)MCAO模型大鼠尿液進(jìn)行非靶向代謝組學(xué)研究,探究腦梗死大鼠尿液中代謝標(biāo)志物的變化。并通過對(duì)標(biāo)志物代謝通路的分析,探究電針治療腦梗死的作用靶點(diǎn)和代謝途徑。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器

乙腈(德國(guó)Merck公司);甲醇(Sigma公司);乙酸銨(Sigma公司);AB Triple TOF 5600/6600質(zhì)譜儀(美國(guó)Waters公司);Agilent 1290 Infinity LC超高壓液相色譜儀(美國(guó)Waters公司);ACQUITY UPLC BEH Amide色譜柱(美國(guó)Waters公司);低溫高速離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf公司);生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)BL-420F(成都泰盟軟件有限公司);電子天平(德國(guó)Siemens公司);針灸針(貴州安迪藥械有限公司);MCAO栓線2432-A4(北京百農(nóng)科技有限公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組

造模前2周進(jìn)行大鼠的左前肢抓取預(yù)訓(xùn)練,每日1次,每次20 min[8]。將36只大鼠隨機(jī)分為3組:空白組、模型組和電針組,每組各12只。

1.4 造模

運(yùn)用線栓法制備大腦中動(dòng)脈梗阻(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)大鼠模型。先進(jìn)行稱重,后采用100 g/L水合氯醛(3.5 mL/kg)腹腔注射麻醉,將頸部正中部位剃毛并消毒,開長(zhǎng)度約1~2 cm的切口,逐層剝離,輕輕撕開動(dòng)脈鞘,分離右側(cè)頸總、頸內(nèi)和頸外動(dòng)脈,于血管分叉近端結(jié)扎頸外動(dòng)脈,遠(yuǎn)端結(jié)扎頸總動(dòng)脈,在分叉處下方夾閉,于下方開一切口,緩慢插入栓線并固定,去動(dòng)脈夾,使栓線進(jìn)入頸內(nèi)動(dòng)脈至約18 mm,固定并減除多余結(jié)扎線,沖洗切口縫合并消毒[9]。將術(shù)后大鼠放置于環(huán)境清潔舒適的鼠籠內(nèi),于白熾燈下加熱保暖,在2 h后評(píng)估是否造模成功[10]。

1.5 電針治療方法

選取百會(huì)穴(兩耳尖連線與頭正中線相交處)、前神聰穴(兩耳尖連線與頭正中線相交處前5 mm)[11],針刺時(shí)向病灶側(cè)透刺15 mm,頻率刺激器選擇連續(xù)波,刺激頻率2 Hz,電流1 mA,每日1次,每次20 min,連續(xù)治療14 d。其余各組與電針組同一時(shí)間進(jìn)行綁縛。

1.6 行為學(xué)評(píng)分

1.6.1 Zea-Longa評(píng)分 大鼠蘇醒后2 h采用Zea-Longa評(píng)分[12]對(duì)其神經(jīng)功能缺損情況進(jìn)行評(píng)價(jià),大鼠得分越高神經(jīng)功能缺損越嚴(yán)重。排除0分和4分的大鼠,將1~3分大鼠納入后續(xù)實(shí)驗(yàn)。見表1。

表1 Zea-Longa評(píng)分

1.6.2 Ludmila Belayev評(píng)分 采用Ludmila Belayev 12分評(píng)分法[13],分別在治療后1 d、3 d、5 d、7 d和14 d對(duì)大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分。Ludmila Belayev 評(píng)分法包括姿勢(shì)反射實(shí)驗(yàn)和肢體放置實(shí)驗(yàn)兩部分。

1.6.2.1 姿勢(shì)反射測(cè)驗(yàn) 0:無明顯神經(jīng)功能缺失;1:梗死對(duì)側(cè)肢體屈曲;2:側(cè)推試驗(yàn)陽性。

媽媽印象最深刻的就是吃紅薯,她告訴我,早上吃的是“整豬整羊”,意思是光吃蒸紅薯,中午是“芝麻拌糖”,意思是在飯上蒸一點(diǎn)紅薯,晚上則是“吹吹打打”,吃的是煨紅薯,需要拍灰吹打……

1.6.2.2 肢體放置試驗(yàn) 包括視覺亞實(shí)驗(yàn)、觸覺亞實(shí)驗(yàn)和本體覺亞實(shí)驗(yàn)。視覺亞實(shí)驗(yàn):即前方刺激,實(shí)驗(yàn)者將動(dòng)物握于手中,使其前爪懸空,自桌面上方10 cm處向桌面緩慢斜線靠近(此時(shí)桌子位于大鼠前方),大鼠正常反應(yīng)為前肢即刻抓向桌面,損傷大鼠則表現(xiàn)為肢體反應(yīng)延遲。0:動(dòng)物肢體放置反應(yīng)正常;1:反應(yīng)延遲但不超過2 s;2:反應(yīng)延遲且超過2s。側(cè)方刺激,此時(shí)桌子位于動(dòng)物側(cè)方,其余實(shí)驗(yàn)方法及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)同前方刺激。觸覺亞實(shí)驗(yàn):將動(dòng)物雙眼遮住,并使其前爪懸空,此時(shí)大鼠既看不見,也不能用胡須觸及桌面,用其前爪背側(cè)輕觸桌面,刺激深度僅達(dá)皮膚和毛發(fā)。動(dòng)物反應(yīng)及評(píng)分同視覺亞實(shí)驗(yàn),觸覺刺激同樣分前方及側(cè)方刺激。本體覺亞實(shí)驗(yàn):操作及評(píng)分同觸覺亞實(shí)驗(yàn),僅刺激深度不同。本體覺亞實(shí)驗(yàn)給予前爪較大壓力,刺激深達(dá)肌肉及關(guān)節(jié)。該亞實(shí)驗(yàn)只有前方刺激。

1.7 尿液樣品收集與制備

治療14 d后,收集空白組、假手術(shù)組和電針組大鼠尿液各1 mL,3 000 r/min離心10 min后取上清液0.5 mL,儲(chǔ)存于-80℃中備用。從-80℃中取出樣本,于4℃中緩慢溶解,分別取各組樣本100 μL,加入400 μL預(yù)冷的甲醇乙腈溶液(1∶1),渦旋60 s,-20℃放置1 h沉淀蛋白,14 000 rcf,4℃離心20 min,取上清冷凍干燥,進(jìn)行UPLC/MS分析。

1.8 色譜質(zhì)譜條件

1.8.1 色譜 色譜柱(1.7 μm, 2.1 mm×100 mm)柱溫為25℃,流速為0.3 mL/min。流動(dòng)相由A(水+25 mM乙酸銨+25 mM氨水)和B(乙腈)組成。梯度洗脫程序:0~0.5 min,95% B;0.5~7 min,B從95%線性變化至65 %;7~8 min,B從65%線性變化至40%;8~9 min,B維持在40%;9~9.1 min,B從40%線性變化至95%;9.1~12 min,B維持在95%。整個(gè)分析過程中樣品置于4℃自動(dòng)進(jìn)樣器中。

1.8.2 質(zhì)譜 在電噴霧電離(ESI)正離子和負(fù)離子模式下進(jìn)行質(zhì)譜分析。ESI源條件:Ion Source Gas1(Gas1): 40, Ion Source Gas2(Gas2): 80, Curtain gas(CUR): 30, source temperature: 650℃,正負(fù)兩種離子模式IonSapary Voltage Floating (ISVF)±5000 V;樣本的二級(jí)質(zhì)譜通過高靈敏度數(shù)據(jù)相關(guān)采集模式獲取,正負(fù)兩種模式去簇電壓:±60 V,碰撞能量:(35±15)eV,數(shù)據(jù)相關(guān)采集設(shè)置為排除4 Da內(nèi)的同位素,每循環(huán)監(jiān)測(cè)候選10個(gè)離子。數(shù)據(jù)采集是按Mass Range進(jìn)行分段,50~300,290~600,590~900,890~1 200,從而擴(kuò)大二級(jí)譜圖的采集率,每個(gè)方法每段采集4個(gè)重復(fù)。

1.9 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析

首先將原始數(shù)據(jù)通過ProteoWizard轉(zhuǎn)換為通用數(shù)據(jù)格式(mzXML)文件,然后采用XCMS程序(http://metlin.scripps.edu/download/)對(duì)代謝物離子峰進(jìn)行提取、檢測(cè)和對(duì)齊,得出可視化數(shù)據(jù)矩陣,包括樣品名稱、保留時(shí)間、m/z和峰面積。采用SIMCA軟件(v.12.0)對(duì)上述數(shù)據(jù)進(jìn)行無監(jiān)督主成分分析(PCA),有監(jiān)督偏最小二乘法判別分析(PLS-DA)和正交偏最小二乘法判別分析(OPLS-DA)等多維統(tǒng)計(jì)分析。再采用SPSS 25.0 軟件進(jìn)行單變量統(tǒng)計(jì)分析。根據(jù)從UPLC-Q/TOF-MS獲取的總離子流色譜圖(Total ion chromatogram, TIC)得到分子質(zhì)量,結(jié)合MS/MS信息,在人類代謝組學(xué)數(shù)據(jù)庫(Human Metabolome Database, HMDB) (http://www.hmdb.ca/)及KEGG數(shù)據(jù)庫(http://www.kegg.jp/kegg/pathway.html)進(jìn)行檢索和比較分析。

2 結(jié)果

2.1 電針對(duì)大鼠行為學(xué)的影響

造模后各時(shí)間點(diǎn),與空白組比較,模型組和電針組評(píng)分均顯著升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。隨著模型組缺血時(shí)間的延長(zhǎng),評(píng)分逐漸下降,表明腦缺血具有一定程度的自愈能力。造模后第1、3天,與模型組比較,電針組評(píng)分無顯著改變,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);造模后第5、7、14 天,與模型組比較,電針組評(píng)分顯著下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。此表明隨著缺血時(shí)間的延長(zhǎng),模型組神經(jīng)功能改善不明顯,而電針組在5 d后顯著好轉(zhuǎn)。見表2、圖1。

表2 各組大鼠Ludmila Belayev評(píng)分的比較

圖1 電針對(duì)腦梗死大鼠行為學(xué)影響變化示意圖

2.2 大鼠尿液代謝組學(xué)結(jié)果分析

2.2.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量控制 各組大鼠尿液樣本通過UHPLC-Q-TOF MS處理分析后,得到每個(gè)樣品的質(zhì)譜圖,通過對(duì)質(zhì)譜圖離子的重疊比較,得出各組樣品的總離子流譜圖(TIC)。其中橫坐標(biāo)表示時(shí)間,縱坐標(biāo)表示離子強(qiáng)度值。結(jié)果顯示,正負(fù)離子模式下大鼠各組尿液樣本中各色譜峰的響應(yīng)強(qiáng)度和保留時(shí)間基本重疊,說明實(shí)驗(yàn)過程中儀器導(dǎo)致的誤差較小,數(shù)據(jù)可靠。見圖2。

圖2 正負(fù)離子模式尿液QC樣本總離子流圖

2.2.2 總體樣本主成分分析 采用XCMS軟件對(duì)正負(fù)離子模式下尿液代謝物的離子峰進(jìn)行提取,將所有尿液樣本和QC樣本所提取得到的峰經(jīng)過Pareto-scaling軟件處理得到總體樣本的PCA模型。通過主成分分析可知,各組之間有分離趨勢(shì),空白組與模型組沿t[2]軸分離,說明兩組尿液的代謝物之間存在一定差異。而電針組分布基本介于空白組與模型組之間,說明電針治療可以發(fā)生代謝物的改變,且有回調(diào)的趨勢(shì)。見圖3。

注:uB:空白組;uC:模型組;uD:電針組。

2.2.3 空白組與模型組的尿液代謝物比較 比較空白組與模型組尿液樣本的PLS-DA得分圖,結(jié)果顯示正離子模式下R2Ycum=0.906,Q2cum=0.629,負(fù)離子模式下R2Ycum=0.923,Q2cum=0.605,兩組樣本分別組內(nèi)聚攏,組間明顯分離,表明模型穩(wěn)定可靠。通過對(duì)數(shù)據(jù)的進(jìn)一步分析,比較空白組與模型組兩組尿液樣本OPLS-DA的得分圖,結(jié)果顯示正離子模式下R2Ycum=0.906,Q2cum=0.655;負(fù)離子模式下R2Ycum=0.923,Q2cum=0.628,以兩組代謝樣本的主成分作為參考, 空白組與模型組組內(nèi)聚集,組間沿t0[1]軸明顯分離,兩組尿液樣本中代謝產(chǎn)物存在顯著性差異,能夠被明顯區(qū)分,說明MCAO損傷導(dǎo)致大鼠體內(nèi)代謝功能紊亂,尿液中代謝物的含量發(fā)生改變。見圖4~5。

注:uB:空白組;uC:模型組。

注:圖uB:空白組;uC:模型組。

2.2.4 模型組與電針組的尿液代謝物比較 比較模型組與電針組尿液樣本的PLS-DA得分圖,結(jié)果顯示正離子模式下R2Ycum=0.874,Q2cum=0.533,負(fù)離子模式下R2Ycum=0.874,Q2cum=0.537,表明模型穩(wěn)定可靠,但組間分離不夠明顯,所以通過OPLS-DA對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行進(jìn)一步分析。比較模型組與電針組兩組尿液樣本OPLS-DA的得分圖,結(jié)果顯示正離子模式下R2Ycum=0.814,Q2cum=0.599;負(fù)離子模式下R2Ycum=0.814,Q2cum=0.577,以兩組代謝樣本的主成分作為參考,模型組與電針組組內(nèi)聚集,組間沿t0[1]軸明顯分離,兩組尿液樣本中代謝產(chǎn)物存在顯著性差異,能夠被明顯區(qū)分,說明電針治療導(dǎo)致大鼠體內(nèi)代謝功能和代謝物的含量發(fā)生改變。見圖6~7。

注:uC:模型組;uD:電針組。

注:uC:模型組;uD:電針組。

2.2.5 差異代謝物和代謝途徑的篩選 通過空白組與模型組間篩選出具有的差異代謝物,進(jìn)一步通過多維統(tǒng)計(jì)分析VIP>1與單變量統(tǒng)計(jì)分析P value<0.05作為篩選標(biāo)準(zhǔn),篩選出MCAO模型大鼠尿液差異代謝標(biāo)志物95個(gè),其中,上調(diào)的有65個(gè),下調(diào)的有30個(gè)。再對(duì)電針組與模型組的代謝物進(jìn)行篩選,并結(jié)合MCAO模型組大鼠差異代謝物的信息,篩選出電針干預(yù)后回調(diào)的代謝物39個(gè),其中上調(diào)的代謝物有11個(gè),下調(diào)的代謝物有28個(gè)。差異代謝物基本信息見表3。

通過比較分析空白組與模型組、模型組與電針組大鼠尿液的差異代謝物,發(fā)現(xiàn)回調(diào)的39個(gè)差異代謝物主要參與腦組織的能量代謝、氨基酸代謝、脂質(zhì)代謝和神經(jīng)遞質(zhì)代謝等。通過KEGG數(shù)據(jù)庫分析這些代謝物主要參與的代謝通路有檸檬酸循環(huán)、精氨酸代謝、嘌呤代謝、谷氨酸代謝、精氨酸和脯氨酸代謝、苯丙氨酸代謝、牛磺酸和次?;撬岽x及神經(jīng)遞質(zhì)代謝等。

3 討論

頭部腧穴是腦缺血臨床治療中的常用穴、首選穴。本研究選取百會(huì)穴、前神聰穴進(jìn)行治療,百會(huì)穴位于督脈,《難經(jīng)》曰其為“陽脈之?!薄!稌?huì)元針灸學(xué)》曰:“百會(huì)者,五臟六腑奇經(jīng)三陽百脈之所會(huì),故名百會(huì)?!鼻吧衤斞樗纳衤斞ㄖ?,是經(jīng)外奇穴,其與百會(huì)同位于巔頂,可“清利頭目,醒腦開竅”。兩穴又均位于腦部,腦為“髓海”“元神之府”。因此,針刺百會(huì)、前神聰穴可通陽助陽、益氣生髓。從解剖的角度看,百會(huì)穴為頂中線與頂顳后斜線的起點(diǎn),前神聰穴為頂顳前斜線的起點(diǎn),頂顳前斜線與頂顳后斜線為大腦皮層頂葉與顳葉的投影區(qū),頂顳前斜線對(duì)應(yīng)中央前回司運(yùn)動(dòng),頂顳后斜線對(duì)應(yīng)中央后回司感覺,針刺此區(qū)域可能促進(jìn)大腦中動(dòng)脈供血,達(dá)到激發(fā)患者感覺、運(yùn)動(dòng)中樞功能的目的。

表3 各組間尿液差異代謝物基本信息

電針組在治療后行為學(xué)評(píng)分明顯優(yōu)于模型組,說明電針治療對(duì)腦梗死大鼠具有顯著療效。通過代謝組學(xué)的檢測(cè)方法,進(jìn)一步比較了各組間的差異代謝物及代謝途徑。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),大鼠腦梗死后,代謝物質(zhì)的改變可以通過電針治療發(fā)生回調(diào),使疾病病程發(fā)生改變,達(dá)到康復(fù)的目的。

3.1 能量代謝

正常情況下大鼠腦組織的能量代謝主要為有氧代謝,在有氧條件下糖酵解生成的丙酮酸在線粒體內(nèi)發(fā)生三羧酸循環(huán)(Tricarboxylic acid cycle, TCA)生成CO2。當(dāng)腦梗死發(fā)生時(shí),由于腦供血受阻,TCA因底物缺乏而受到抑制,導(dǎo)致能量合成受阻[14],糖酵解生成的丙酮酸發(fā)生氧化磷酸化,在乳酸脫氫酶的作用下形成乳酸(DL-lactate)[15-16]。通過對(duì)比,空白組與模型組大鼠體內(nèi)尿液代謝物,發(fā)現(xiàn)模型組乳酸水平較空白組明顯升高,說明腦梗死后腦組織能量供應(yīng)發(fā)生改變,有氧糖酵解減少,無氧糖酵解增加。電針組尿液中的乳酸水平較模型組顯著下降,說明電針干預(yù)能夠改善腦組織TCA循環(huán)的能量供應(yīng)模式,促進(jìn)腦梗死后腦組織的能量供應(yīng),使糖酵解模式發(fā)生轉(zhuǎn)變,這可能是由于電針促進(jìn)腦組織血流、加快缺血區(qū)的血液供應(yīng)所導(dǎo)致的。蘋果酸(Citramalic acid)為TCA 循環(huán)的中間產(chǎn)物,神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中含有蘋果酸脫氫酶,一部分丙酮酸能夠通過蘋果酸代謝進(jìn)行供能[17],蘋果酸的含量在模型組中顯著降低,電針組中明顯回調(diào),提示蘋果酸對(duì)腦梗死大鼠具有一定的腦保護(hù)作用。

3.2 氨基酸代謝

氨基酸是人體代謝的重要能量來源,一般在體內(nèi)具有兩個(gè)代謝途徑。一條途徑為合成生物體特有的蛋白質(zhì)、多肽或其它含氮物質(zhì)。另一條途徑通過脫氨、轉(zhuǎn)氨或脫羧作用被水解生成α-酮酸、胺類及二氧化碳。腦梗死后大鼠血清代謝物中大量氨基酸含量發(fā)生改變,模型組與空白組相比,3-甲基組氨酸(3-Methylhistidine)、N-乙?;?L-天冬氨酸(N-Acetyl-L-aspartic acid)、左旋瓜氨酸(L-Citrulline)、賴氨酸-亮氨酸(Lys-Leu)、NG, NG-二甲基-L-精氨酸(ADMA)[G,NG-dimethyl-L-arginine(ADMA)]和苯丙氨酸-脯氨酸(Phe-Pro)含量升高,N-乙酰-L-谷氨酸(N-Acetyl-L-glutamate)、N6-甲基-L-賴氨酸(N6-Methyl-L-lysine)和N-乙酰基-L-組氨酸(N-Acetyl-L-Histidine)等氨基酸含量降低。模型組和電針組相比,上述氨基酸均發(fā)生回調(diào)。谷氨酸和天冬氨酸為興奮性氨基酸,是導(dǎo)致缺血性卒中發(fā)生的關(guān)鍵化合物,它參與缺血腦組織細(xì)胞的級(jí)聯(lián)反應(yīng),并影響缺血神經(jīng)元的壞死與凋亡。空白組與模型組相比,模型大鼠尿液代謝物中谷氨酸和天冬氨酸含量明顯升高,而電針組谷氨酸和天冬氨酸的含量發(fā)生回調(diào)。苯丙氨酸是生物體合成蛋白質(zhì)的主要物質(zhì)來源,水解能夠產(chǎn)生延胡索酸參與TCA循環(huán)[18]。本研究發(fā)現(xiàn)尿液樣本中空白組苯丙氨酸的相對(duì)含量較模型組明顯升高,且電針組與模型組相比出現(xiàn)回調(diào),說明苯丙氨酸代謝可能在腦梗死過程中發(fā)揮重要作用。

3.3 脂質(zhì)代謝

花生四烯酸是脂肪酸的代謝產(chǎn)物,它能誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞產(chǎn)生IL-6,并導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)疾病炎癥反應(yīng)[19]。腦梗死后腦血管的通透性增加,引起炎癥介質(zhì)釋放、組織水腫,炎癥介質(zhì)刺激激活細(xì)胞膜上的磷脂酶,導(dǎo)致甘油磷脂發(fā)生水解反應(yīng)產(chǎn)生溶血卵磷脂及花生四烯酸等代謝產(chǎn)物。腦缺血引起腦組織中脂肪酸代謝紊亂,造成腦組織中ATP合成障礙、消耗增加,引起花生四烯酸的代謝紊亂。電針干預(yù)后,大鼠尿液中的鞘磷脂(Sphingomyelin)、磷酸膽堿(Phosphorylcholine)的含量發(fā)生回調(diào)。多種膽堿代謝物含量也出現(xiàn)回調(diào),說明電針干預(yù)能夠促進(jìn)腦梗死大鼠脂質(zhì)代謝趨于正常。

本實(shí)驗(yàn)選取大鼠尿液為研究樣本因其是生物整體代謝網(wǎng)絡(luò)的最終產(chǎn)物,能夠從宏觀角度集中把握病理生理過程對(duì)生物體產(chǎn)生的影響,也恰好與“整體觀念”的思想相契合,且尿液取樣方便、安全無創(chuàng),是基礎(chǔ)研究中良好的體液標(biāo)本。綜上所述,頭部電針對(duì)腦梗死大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)具有明顯的促進(jìn)作用,其機(jī)制可能與電針調(diào)控三羧酸循環(huán)、氨基酸代謝和花生四烯酸代謝等途徑有關(guān),為電針治療腦梗死作用靶點(diǎn)的研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。但電針治療腦梗死的具體機(jī)制還未完全闡明,尿液代謝物樣本也存在一定的不穩(wěn)定性,有待通過其它方法進(jìn)一步研究。

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