楊 柳 洪永貴 胡彥偉 郭君蘭

(安陽市腫瘤醫(yī)院腫瘤內(nèi)科 安陽 455000)

食管癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，全世界每年約有30萬人死于該病。我國是食管癌高發(fā)地，每年病死人數(shù)可達(dá)15萬左右，其中太行山脈一帶，即林州市又為全國發(fā)病率之最[1]。目前關(guān)于食管癌發(fā)病機(jī)制考慮與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)相關(guān)。EMT是腫瘤侵襲過程中的核心事件，侵襲性較低的上皮表型細(xì)胞轉(zhuǎn)化為侵襲性較高的間質(zhì)表型細(xì)胞是導(dǎo)致食管癌發(fā)生侵襲與轉(zhuǎn)移的主要因素[2]。華蟾素作為中藥抗腫瘤的重要成員，已被廣泛應(yīng)用于消化道腫瘤的治療。現(xiàn)今已有大量基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)證實(shí)[3]，華蟾素可以通過對多種分子信號傳導(dǎo)通路的影響，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、分化，并誘導(dǎo)其凋亡，顯著降低瘤細(xì)胞的增殖及遠(yuǎn)處侵襲能力，對多種中晚期腫瘤均有顯著的療效，并能減輕癌痛，緩解終末期病人痛苦，與化療聯(lián)合使用，增加了抗腫瘤療效，同時(shí)降低化療毒副反應(yīng)。人端粒酶由人端粒逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)，人端粒酶RNA組(hTR)及人端粒酶相關(guān)蛋白(hTEP1)組成[4]。由此可知，人端粒逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)是食管癌侵襲轉(zhuǎn)移的重要分子蛋白酶。本文收集2018年9月～2019年9月我院食管癌中應(yīng)用華蟾素聯(lián)合化療及單純化的患者的外周血，利用RT-PCR法檢測食管癌患者外周血中的人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)mRNA陽性表達(dá)率，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集安陽市腫瘤醫(yī)院在2018年9月～2019年9月收治的30例華蟾素注射液聯(lián)合化療的食管癌患者作研究資料。聯(lián)合組男17例(56.6%)，女13例(43.4%)，中位年齡64歲(42～90歲)。并隨機(jī)收集同一時(shí)期單純化療的食管癌患者30例作對照組。對照組男18例(60%)，女12例(40%)，中位年齡61歲(38～87歲)。兩組資料在性別、年齡、分期上無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

1.2 方法

收集兩組病例：(1)一般情況包括年齡、性別、分期；(2)兩組資料1周期治療后外周血中的人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERTmRNA)水平。

外周血(hTERTmRNA)檢測方法：(1)收集兩組病人治療1周期治療后的外周靜脈血5ml，抗凝處理(EDTANA2)；(2)采用RT-PCR法行mRNA檢測提取；(3)提取出mRNA含量在紫外分光度計(jì)上測定260nm和280nm的吸光度值，并計(jì)算260/280的值和RNA的濃度；(4)根據(jù)hTERT-mRNA的引物進(jìn)行mRNA擴(kuò)增；(5)利用熒光定量分析hTERT-mRNA的含量(用拷貝數(shù)/ml表示)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS13.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，兩組計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

聯(lián)合用藥組外周血 hTERT MRNA陽性率53.3%(16/30)，單純化療組為86.7%(26/30)，聯(lián)合用藥組與化療組比較明顯降低(P<0.05)，見表1。

表1 食管癌外周血hTERT mRNA表達(dá)與臨床相關(guān)參數(shù)的關(guān)系[n(%)]

3 討論

食管癌是危害安陽地區(qū)民眾健康的重要?dú)⑹?，但目前其治療效果尚不盡如人意。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，食管癌手術(shù)治療的5年生存率小于30%，放療的5年生存率小于20%，而晚期食管癌化療的5年生存率不足5%。因此積極尋找新的治療手段和治療模式是提高生存率的重中之重。

端粒酶是一種具有逆轉(zhuǎn)錄活性的核糖核蛋白。目前研究提示，它與腫瘤的增值、分化和衰老有密切關(guān)系，與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，可以作為診斷腫瘤轉(zhuǎn)移及預(yù)后的指標(biāo)。華蟾素作為中藥抗腫瘤的重要成員，已被廣泛應(yīng)用于消化道腫瘤的治療[5]。華蟾素通過影響hTERT-mRNA表達(dá)水平，從而降低腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的研究目前尚無相關(guān)報(bào)道。本研究補(bǔ)充了相關(guān)研究的空白，實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示華蟾素聯(lián)合化療組外周血中hTERT MRNA陽性率53.3%(16/30)，單純化療組為86.7%(26/30)。實(shí)驗(yàn)證明，華蟾素聯(lián)合化療較單純化療組，其外周血中hTERT mRNA的陽性表達(dá)率明顯降低。因此，華蟾素聯(lián)合化療能更好抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展，降低腫瘤侵襲力，提高患者療效，同時(shí)降低化療毒副反應(yīng)，改善患者預(yù)后。由上述數(shù)據(jù)分析可知，食管癌患者血漿中hTERT mRNA的表達(dá)與性別及年齡無關(guān)，與臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況相關(guān)[6]。因此臨床上通過檢測外周血中hTERT mRNA，對食管癌早期診斷，近期療效及預(yù)后判斷均有一定提示作用。

綜上所述，本課題通過研究華蟾素聯(lián)合化療對食管癌患者外周血內(nèi)hTERT-mRNA表達(dá)水平的差異性，探討華蟾素聯(lián)合化療對腫瘤侵襲能力及臨床預(yù)后的影響，從而為提高食管癌治療效果和改善患者生活質(zhì)量尋求更多治療方法。華蟾素注射液聯(lián)合化療提高了食管癌患者生活質(zhì)量，減輕了化療痛苦，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，延長了生存期，臨床應(yīng)用安全有效，值得為臨床所推廣。