賴可元，黃凱月，周忠江，張 鵬

（1.南方醫(yī)科大學(xué)檢驗與生物技術(shù)學(xué)院，廣州 510000；2.南方醫(yī)院輸血科，廣州 510000；3.南方醫(yī)院心內(nèi)科，廣州 510000；4.南方醫(yī)院檢驗科，廣州 510000）

脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2（lipoprotein-associated ph?ospholipase A2，Lp-PLA2）是一個具有重大臨床應(yīng)用價值的嶄新生物學(xué)標(biāo)志物。作為冠狀動脈粥樣硬化性心臟?。ü谛牟。┖腿毖阅X卒中的獨立風(fēng)險因素［1-2］，Lp-PLA2已被國內(nèi)外多家權(quán)威協(xié)會與相關(guān)組織寫入專家建議與臨床指南［3-5］，成為臨床常規(guī)檢測的指標(biāo)。但由于性別與種族等因素的差異，試劑廠商說明書設(shè)定的參考區(qū)間與文獻(xiàn)報道的參考區(qū)間并不適用于所有人群。本研究以美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）的C28-A3文件［6］為指導(dǎo)，基于南方醫(yī)院健康查體人群，建立本實驗室健康人群血清Lp-PLA2活性的參考區(qū)間，以便于進(jìn)一步探討廣州地區(qū)乃至全國的活性參考區(qū)間，同時有益于預(yù)測、診斷及監(jiān)測心腦血管病變。

1 資料和方法

1.1 一般資料

從2019年9月至12月于南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院體檢中心進(jìn)行體檢健康人群中篩選研究對象。篩選標(biāo)準(zhǔn)如下：肝、腎、肺功能指標(biāo)正常；三系血細(xì)胞正常；無高血脂、糖尿病、腫瘤、心腦血管疾病。篩選得417例符合納入標(biāo)準(zhǔn)的參考個體，其中男性納入204例，年齡18～75歲；女性納入213例，年齡18～72歲。再將男性與女性兩組參考個體以年齡段（18～29歲、30～39歲、40～49歲、50歲及以上）分別劃分為4個亞組進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。

1.2 主要儀器與試劑

AU5800型全自動生化分析儀（美國貝克曼庫爾特公司），Lp-PLA2速率法試劑盒及其配套校準(zhǔn)品、質(zhì)控品（重慶中元生物技術(shù)有限公司）。

1.3 方 法

1.3.1 標(biāo)本采集 采集對象前一天避免飲酒、劇烈運動、高糖高脂飲食，采血前需空腹8 h或以上。自肘靜脈采集靜脈血3 mL，于采血1 h以內(nèi)離心處理（3 000 r/min，離心10 min），分離出500 μL血清于-20 ℃存放。室溫復(fù)溶至少40 min，輕輕顛倒混勻后完成檢測。標(biāo)本均無溶血、黃疸和脂濁。

1.3.2 檢測方法 按照本實驗室全自動生化分析儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP）進(jìn)行操作。檢測原理：標(biāo)本中的Lp-PLA2與試劑中的底物發(fā)生水解反應(yīng)，水解釋出的4-硝基苯酚引起激發(fā)波長405 nm處吸光度變化，經(jīng)過測量一定時間內(nèi)吸光度變化速率，計算標(biāo)本中Lp-PLA2的活性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

使用SPSS 21.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。以CLSI的C28-A3文件為指導(dǎo)，用Dixon法剔除離群值。用Kolmogorov-Smironov法進(jìn)行正態(tài)性檢驗，P＞0.05表示數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布。用兩兩獨立樣本t檢驗判斷不同性別間差異是否存在統(tǒng)計學(xué)意義。加以用Z檢驗法計算判斷是否需要以性別分組。用單因素方差分析（ANOVA）分別判斷不同性別各年齡段間差異是否存在統(tǒng)計學(xué)意義。用百分位數(shù)法以P2.5、P97.5為雙側(cè)界限建立參考區(qū)間。以P＜0.05表示差異存在統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2活性結(jié)果離群值檢驗及正態(tài)性檢驗

本次研究除去離群值后，得參考個體417例。總體數(shù)據(jù)經(jīng)檢驗為正態(tài)分布，且男女分組資料均為正態(tài)分布（P＞0.05）。

2.2 不同性別人群脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2活性分布情況

男性Lp-PLA2活性明顯高于女性，且兩性別組間差異存在統(tǒng)計學(xué)意義（t=9.33，P＜0.01）。計算得Z值9.32，Z*值3.96，Z值＞Z*值，應(yīng)按性別分組建立參考區(qū)間，見表1。

表1 男性與女性Lp-PLA2活性分布情況

2.3 不同年齡段人群脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2活性分布情況及比較

男性組Lp-PLA2活性較穩(wěn)定，單因素方差分析得男性亞組之間差異不存在統(tǒng)計學(xué)意義（F=1.48，P=0.22），因此男性組可合并建立參考區(qū)間。而女性Lp-PLA2活性隨著年齡增加顯著上升，單因素方差分析得女性4個亞組間差異存在統(tǒng)計學(xué)意義（F=5.52，P＜0.05）。經(jīng)兩兩比較得女性相鄰年齡段間（18～29歲與30～39歲、30～39歲與40～49歲、40～49歲與50～72歲）差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。但40～72歲女性LP-PLA2活性明顯高于18～39歲女性，經(jīng)t檢驗得差異存在統(tǒng)計學(xué)意義（t=4.07，P＜0.01）。因此女性按年齡分為18～40歲與40～72歲兩組建立參考區(qū)間。見表2，圖1。

表2 不同年齡段血清Lp-PLA2活性分布情況

圖1 男性與女性各年齡段血清Lp-PLA2活性結(jié)果比較

2.4 建立脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2活性參考區(qū)間

根據(jù)C28-A3文件，以百分位數(shù)法（P2.5、P97.5為雙側(cè)限）得到本實驗室健康人群Lp-PLA2活性參考區(qū)間：男性為316.03～687.70 U/L，18～39歲與40～72歲女性分別為230.64～574.39 U/L、269.18～637.87 U/L。

3 討論

Lp-PLA2主要由血管內(nèi)膜中的巨噬細(xì)胞和肥大細(xì)胞合成與分泌，與低密度脂蛋白（LDL）或高密度脂蛋白（HDL）結(jié)合存在，參與動脈粥樣硬化的形成并誘導(dǎo)粥樣斑塊不穩(wěn)定性增加［7］。作為目前唯一緊密反映血管內(nèi)壁炎癥的生物標(biāo)志物，LP-PLA2不僅能預(yù)測、診斷心腦血管病變，還可以作為治療相關(guān)疾病的主要靶點［8］，具有極為重要的臨床意義。

由此，為了更快速更準(zhǔn)確地預(yù)測及診斷心血管疾病，建立正確且適用的LP-PLA2活性參考區(qū)間不失為研究著手點。參考區(qū)間是臨床工作者們分析檢驗結(jié)果的重要參考，并以此指導(dǎo)臨床工作。但是由于不同種族、年齡、性別、居住地等因素的影響［9］，試劑說明書中的參考區(qū)間并不一定適合本地人群。所以各臨床實驗室不能套用文獻(xiàn)或說明書中的參考區(qū)間，而是要通過驗證后確定參考區(qū)間的適用性，更要在條件允許下建立適合于本實驗室乃至本地區(qū)的參考區(qū)間。

本研究于南方醫(yī)院收集417例符合篩選標(biāo)準(zhǔn)的廣州地區(qū)健康人群標(biāo)本，進(jìn)行數(shù)據(jù)對比分析后由此建立LP-PLA2活性參考區(qū)間。檢測結(jié)果顯示，男性Lp-PLA2活性較穩(wěn)定，且各年齡段間差異無統(tǒng)計學(xué)意義，因此可合并建立參考區(qū)間。女性Lp-PLA2活性隨著年齡增長呈升高趨勢，40～72歲女性Lp-PLA2活性顯著高于18～40歲女性。該現(xiàn)象提示LP-PLA2活性可能與內(nèi)分泌相關(guān)，需要進(jìn)一步研究。根據(jù)CLSI C28-A3指導(dǎo)，本次實驗建立了本實驗室Lp-PLA2活性參考區(qū)間：男性為316.03～687.70 U/L，18～39歲、40～72歲女性分別為230.64～574.39U/L與269.18～637.87 U/L。

根據(jù)報道，我國多個實驗室已調(diào)查了適用于當(dāng)?shù)氐腖P-PLA2活性參考區(qū)間。如上海［10］地區(qū)（男性為219～694 U/L，18～49歲、50～89歲女性分別為204～651 U/L、217～686 U/L）、長沙［11］地區(qū)（男性為217～761 U/L，18～39歲、40～86歲女性分別為168～566 U/L、為203～702 U/L）。研究結(jié)果間存在差異，可能是由于參考個體所處地區(qū)不同，由此氣候等生活環(huán)境不同。也有可能是飲食等生活作息習(xí)慣不同的影響，需要進(jìn)一步探究各地區(qū)參考區(qū)間能否轉(zhuǎn)換。已有文獻(xiàn)表明LP-PLA2活性與人體總能量攝入（如吸煙年限）有關(guān)［12］，應(yīng)作相關(guān)研究進(jìn)一步討論。根據(jù)調(diào)查，本研究中納入的參考個體多為廣州地區(qū)企業(yè)的務(wù)工人員，具有一定生活時限性，即使無法確認(rèn)其籍貫，但能代表本地區(qū)的表觀健康人群。體檢人員應(yīng)照本院要求進(jìn)行體檢準(zhǔn)備，并在采樣前進(jìn)行二次確認(rèn)，但難以確保所有受檢個體嚴(yán)格遵循要求操作，具有局限性。本研究得到的參考區(qū)間適用于本實驗室，但是否適用于廣州地區(qū)其余實驗室或全國實驗室，需要進(jìn)一步的驗證。且由于本研究樣本量較少，還應(yīng)擴(kuò)大樣本收集數(shù)量與范圍，增加研究數(shù)據(jù)。

對于無癥狀高危人群的篩查，目前常用傳統(tǒng)危險因素模型進(jìn)行心腦血管疾病風(fēng)險預(yù)測，但由于個體差異，模型預(yù)測存在固有缺陷。在此之上結(jié)合LP-PLA2活性檢驗結(jié)果，篩查結(jié)果將會更為準(zhǔn)確。對于發(fā)生了血栓事件的患者，LP-PLA2的檢測有助于再發(fā)風(fēng)險評估與危險分級，有利于個性化治療。