平新亮 林 媚 王天玉 徐程楠 姚周麟 張偉清 馮先橘

（浙江省柑桔研究所，浙江臺(tái)州318020）

多菌靈是一種廣譜性殺菌劑，對(duì)多種作物上由真菌（如半知菌、多子囊菌）引起的病害有防治效果[1～2]。多菌靈因其較好的防治效果和實(shí)惠售價(jià)廣泛應(yīng)用于柑橘種植、貯存過(guò)程。溫州蜜柑是我國(guó)柑橘罐頭的生產(chǎn)原料，我國(guó)柑橘罐頭主要出口市場(chǎng)是美國(guó)和日本，占比高達(dá)70%。美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局 （FDA）從2011年開始對(duì)食品中多菌靈農(nóng)藥殘留的限量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行修改，針對(duì)柑橘類產(chǎn)品多菌靈殘留限量小于0.01 mg/kg[3～4]，遠(yuǎn)低于國(guó)際食品法典委員會(huì)（CAC）規(guī)定的1 mg/kg、日本3 mg/kg以及我國(guó)5 mg/kg 的限量標(biāo)準(zhǔn)[5]。2016年我國(guó)有出口美國(guó)的柑橘罐頭被FDA 檢出多菌靈農(nóng)藥殘留超標(biāo)而退貨。為應(yīng)對(duì)美國(guó)貿(mào)易壁壘、破解多菌靈農(nóng)藥殘留超標(biāo)難題，本文對(duì)嘧霉胺替代多菌靈在柑橘貯藏期使用的安全性及防治效果進(jìn)行了研究。

一、材料與方法

（一）供試藥劑50%多菌靈可濕性粉劑，江蘇藍(lán)豐生物化工股份有限公司生產(chǎn)； 400 g/L 嘧霉胺懸浮劑，德國(guó)拜耳公司生產(chǎn)； 色譜乙腈，霍尼韋爾公司生產(chǎn)； N－丙基乙二胺固相吸附劑 （PSA）、石墨化炭黑 （GCB）、十八烷基硅膠 （C18），美國(guó)安捷倫科技有限公司生產(chǎn)。

（二）主要儀器氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用儀（GCMS）7890A－5975C（美國(guó)安捷倫科技有限公司）；液相色譜 （LC）1200 （美國(guó)安捷倫科技有限公司）；旋渦混勻器IKA MS3 （德國(guó)IKA）；高速離心機(jī)ANKE TDL－40B （上海安亭科學(xué)儀器廠）；氮吹儀N－EVAP111TM111（美國(guó)ORGANOMATION 公司），勻漿儀FA25（上海弗魯克流體械制造有限公司）。

（三）試驗(yàn)方案試驗(yàn)對(duì)象選擇溫州蜜柑以及紅美人兩個(gè)柑橘品種。依據(jù)農(nóng)藥產(chǎn)品施藥說(shuō)明，嘧霉胺防治灰霉病推薦使用濃度為1000～1500 倍，多菌靈用于水果病害防治推薦制劑用藥量為500～1000 倍，所以試驗(yàn)設(shè)置嘧霉胺1000 倍液、嘧霉胺1500 倍液、多菌靈600 倍液以及空白對(duì)照4 個(gè)處理，每個(gè)處理重復(fù)3 次。

試驗(yàn)浸藥處理： 柑橘裝入浸藥筐中，讓果實(shí)保持浸入藥液1 min 后取出，自然晾干藥液后裝入塑料筐，底部墊上報(bào)紙，置于陰涼通風(fēng)處貯藏[6～7]。

嘧霉胺殘留試驗(yàn)： 浸藥后第0、1、2、3、4、5、7、14、21 d 取樣檢測(cè)柑橘果皮、全果以及果肉中嘧霉胺含量； 多菌靈殘留試驗(yàn)： 浸藥后第1、5、10、14、21、28、35、55 d 取樣檢測(cè)柑橘果皮、全果以及果肉中多菌靈含量； 嘧霉胺與多菌靈處理溫州蜜柑貯藏防效試驗(yàn)： 于浸藥后15、30 和60 d 調(diào)查果實(shí)腐爛率并計(jì)算防治效果。

（四）嘧霉胺殘留檢測(cè)方法

1.樣品處理。準(zhǔn)確稱取柑橘樣品10 g，加入20 mL 正己烷∶乙酸乙酯 （1∶1），加入1 g NaCl，4 g MgSO4，勻漿30 s，4000 r/min 離心3 min。移取上清液10～15 mL 至離心管； 加入100 mgPSA、100 mgC18、100 mg GCB、150 mgMgSO4旋渦混勻30 s，過(guò)膜，進(jìn)行GC－MS 測(cè)定[8～9]。

2.氣相色譜條件。采用不分流進(jìn)樣； 載氣為氦氣，純度≥99.999%，恒流模式，載氣流量為1 mL/min，進(jìn)樣口溫度為250℃； 毛細(xì)管柱為VF 1701 （30 m×0.25 mm i.d.×0.25 μm d.f）； 程序升溫，初溫50℃保持1 min，以20℃/min 升至170℃保持1 min，以10℃/min 升至270℃保持7 min；進(jìn)樣量為1 μL。

3.質(zhì)譜條件。電離方式為電子轟擊電離（EI），電子轟擊源能量70 eV，離子源溫度230℃，四極桿溫度為150℃； GC－MS 接口溫度為280℃。選擇離子監(jiān)測(cè)方式（SIM）：選擇1 個(gè)定量離子198，2個(gè)定性離子199 和200。

（五）多菌靈殘留檢測(cè)方法

1.樣品處理。準(zhǔn)確稱取柑橘樣品10 g 至50 mL 離心管中，加入5 mL 鹽酸（0.1 mol/L）和10 mL乙腈，勻漿，超聲10 min，用氫氧化鈉 （1 mol/L，約0.7 mL）調(diào)節(jié)pH 值至7.5 左右； 加入5 g 氯化鈉，搖勻并離心10 min，取上清液1 mL 加入吸附劑（50 mgPSA+50 mgC18），過(guò)0.22μm 膜，進(jìn)樣。

2.液相色譜條件。色譜柱為Agilent C18 不銹鋼柱（4.6×250 mm i.d.，5 μm）；流動(dòng)相A 為乙腈，B為10 mmol/L 乙酸銨； 流速為1 mL/min； 采用梯度洗脫，0～8.5 min，A 為20%～42%，8.5～15 min，A 為42%～70%，15～21 min，A 為70%～20%，進(jìn)樣量為20 μL； 柱溫為35℃； 檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm； 以保留時(shí)間定性，外標(biāo)法峰面積定量。

二、結(jié)果與分析

圖1 紅美人經(jīng)1000 倍嘧霉胺浸藥后的殘留動(dòng)態(tài)

圖2 溫州蜜柑經(jīng)1000 倍嘧霉胺浸藥后的殘留動(dòng)態(tài)

圖3 紅美人經(jīng)1500 倍嘧霉胺浸藥后的殘留動(dòng)態(tài)

圖4 溫州蜜柑經(jīng)1500 倍嘧霉胺浸藥后的殘留動(dòng)態(tài)

（一）經(jīng)浸藥后的紅美人及溫州蜜柑嘧霉胺殘留動(dòng)態(tài)紅美人、溫州蜜柑經(jīng)嘧霉胺浸藥后，其全果和果皮中嘧霉胺殘留動(dòng)態(tài)曲線如圖1～圖4 所示。結(jié)果表明，經(jīng)嘧霉胺1000 倍液與1500 倍液處理后，紅美人和溫州蜜柑果實(shí)中嘧霉胺殘留動(dòng)態(tài)趨勢(shì)相似，浸藥后前5 d，嘧霉胺快速降解，之后進(jìn)入緩慢降解過(guò)程，最終穩(wěn)定在1 個(gè)較低濃度。嘧霉胺在柑橘中的農(nóng)藥殘留主要集中在果皮中，且紅美人果皮中嘧霉胺含量顯著高于溫州蜜柑，其中，紅美人果皮中嘧霉胺含量約為全果的7 倍，而溫州蜜柑果皮中嘧霉胺含量約為全果含量的5 倍； 浸藥后的紅美人及溫州蜜柑全果嘧霉胺含量處于較低含量水平，其最高含量小于0.5 mg/kg，全果中嘧霉胺降解規(guī)律與果皮中嘧霉胺含量變化曲線一致； 紅美人、溫州蜜柑經(jīng)1000 倍嘧霉胺浸藥后，果肉中嘧霉胺含量始終低于0.01 mg/kg。

（二）經(jīng)浸藥后的溫州蜜柑果肉中的多菌靈殘留動(dòng)態(tài)經(jīng)多菌靈600 倍液浸藥后，溫州蜜柑果肉中多菌靈殘留動(dòng)態(tài)如圖5 所示，多菌靈在溫州蜜柑果肉中含量呈現(xiàn)先增后減[10]，浸藥后14 d 果肉中多菌靈達(dá)到峰值，隨后逐漸降低，35 d 后進(jìn)入緩慢減少階段，60 d 后果肉中多菌靈含量仍處于相對(duì)較高值，含量為0.116 mg/kg。

圖5 溫州蜜柑經(jīng)多菌靈600 倍液浸藥后的殘留動(dòng)態(tài)

（三）多菌靈與嘧霉胺浸藥處理對(duì)溫州蜜柑及紅美人柑橘的防效溫州蜜柑、紅美人的浸藥防治效果如表1 所示，由結(jié)果可見(jiàn)，溫州蜜柑和紅美人經(jīng)嘧霉胺1000 倍液、嘧霉胺1500 倍液以及多菌靈600 倍液處理后，在藥劑處理30 d 內(nèi)，3 個(gè)處理對(duì)溫州蜜柑均有較好防治效果[11]，其防效比較結(jié)果為嘧霉胺1000 倍液處理＞多菌靈600 倍液處理＞嘧霉胺1500 倍液處理，而3 個(gè)處理的60 d 防治效果均不理想，其中多菌靈600 倍液處理防效相對(duì)較好，防效為52.6%。3 個(gè)處理對(duì)紅美人防治效果不佳，處理后30 d 內(nèi)防效順序?yàn)猷酌拱?000 倍液處理＞嘧霉胺1500 倍液處理＞多菌靈600 倍液處理，60 d 防治效果以多菌靈600 倍液處理相對(duì)較好。

表1 多菌靈與嘧霉胺浸藥處理對(duì)溫州蜜柑及紅美人的防治效果

三、結(jié)論

本研究結(jié)果表明，從柑橘浸藥處理后30 d 內(nèi)的短期保鮮效果看，嘧霉胺1000 倍液處理略好于多菌靈600 倍液處理，各處理在60 d 以上的保鮮效果均不理想。殘留動(dòng)態(tài)試驗(yàn)表明，嘧霉胺在浸藥處理后快速降解，5 d 后其殘留就降到1 個(gè)較低水平，之后進(jìn)入緩慢降解過(guò)程，且各處理的嘧霉胺在果肉中含量均低于0.01 mg/kg； 多菌靈在柑橘果肉中含量呈先增后減，浸藥后14 d 達(dá)到峰值，60 d后果肉中多菌靈含量仍有0.116 mg/kg。

以對(duì)出口美國(guó)柑橘制品規(guī)定的殘留限量應(yīng)低于0.01 mg/kg 為參照，加工用柑橘原材料應(yīng)嚴(yán)禁多菌靈用于保鮮，若使用后可能會(huì)導(dǎo)致多菌靈殘留超標(biāo)。嘧霉胺浸藥處理不僅在30 d 內(nèi)的防治效果優(yōu)于多菌靈，且使用后迅速降解，5 d 后嘧霉胺殘留到達(dá)較低水平，且在果肉中含量始終低于0.01 mg/kg。綜上所述，嘧霉胺可作為替代多菌靈的柑橘短期保鮮農(nóng)藥。