王會(huì)新，馮旭，侯曉雯

沈陽醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，沈陽 110034

長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）是一類轉(zhuǎn)錄本長(zhǎng)度大于200 nt、位于細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)、缺乏明顯的開放閱讀框、沒有蛋白質(zhì)編碼能力的RNA分子。大量的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示，lncRNA參與基因組印跡、組蛋白修飾、染色質(zhì)重構(gòu)等多個(gè)生物學(xué)過程。lncRNA的異常表達(dá)可能會(huì)影響機(jī)體的生長(zhǎng)、發(fā)育、細(xì)胞凋亡、腫瘤細(xì)胞形成等多種生物過程，進(jìn)而導(dǎo)致疾病的出現(xiàn)，尤其是腫瘤的發(fā)生。H19是最早發(fā)現(xiàn)的一種lncRNA，長(zhǎng)度為2660 bp。有研究采用lncRNADisease2.0版數(shù)據(jù)庫(kù)檢索與H19相關(guān)的腫瘤，結(jié)果顯示，H19與乳腺癌、結(jié)直腸癌、卵巢癌、肺癌、甲狀腺癌、胃癌等多種腫瘤有關(guān)，表達(dá)失調(diào)的H19可作為腫瘤促進(jìn)或抑制因子。目前，關(guān)于H19與惡性腫瘤預(yù)后的研究較少且結(jié)論尚不一致。本研究釆用Meta分析的方法對(duì)已發(fā)表的研究H19與惡性腫瘤患者預(yù)后關(guān)系的文獻(xiàn)進(jìn)行綜合分析，旨在為探討H19與惡性腫瘤患者預(yù)后的關(guān)系提供更客觀的循證醫(yī)學(xué)依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 檢索策略

在PubMed、EMBASE、中國(guó)知網(wǎng)、萬方數(shù)據(jù)庫(kù)、維普數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行檢索，檢索日期截至2020年8月31日。檢索關(guān)于H19與惡性腫瘤預(yù)后關(guān)系的已發(fā)表文獻(xiàn)，中文檢索詞為“H19”“癌”“惡性腫瘤”“生存”“預(yù)后”“復(fù)發(fā)”，英文檢索詞為“l(fā)ong noncoding RNA H19”“H19”“cancer”“carcinoma”“prognosis”“prognostic”“survival”“outcome”“recurrence”，根據(jù)不同數(shù)據(jù)庫(kù)的特征分別進(jìn)行主題詞聯(lián)合自由詞、關(guān)鍵詞綜合檢索。限制搜索的文獻(xiàn)語言為英文和中文。

1.2 文獻(xiàn)納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

文獻(xiàn)納入標(biāo)準(zhǔn)：①關(guān)于惡性腫瘤的研究，對(duì)H19的表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)，并提出H19定量檢測(cè)方法；②明確提出了H19高表達(dá)與低表達(dá)的界定標(biāo)準(zhǔn)；③具有預(yù)后生存指標(biāo)，如總生存期（overall survival，OS）、無 病 生 存 期（disease-free survival，DFS）、無復(fù)發(fā)生存期（relapse-free survival，RFS）、無進(jìn)展生存期（progression-free survival，PFS）等；④能夠獲取風(fēng)險(xiǎn)比（hazard ratio，HR）及其95%置信區(qū)間（confidence interval，CI）；⑤能夠獲取研究人群、隨訪時(shí)間等研究信息；⑥同一研究者發(fā)表文章中的重復(fù)數(shù)據(jù)，選取樣本量大或最新的文獻(xiàn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①摘要、綜述、病例報(bào)道、薈萃分析；②重復(fù)發(fā)表、重復(fù)收錄的文獻(xiàn)；③以細(xì)胞、動(dòng)物等為研究對(duì)象的文獻(xiàn)；④信息不完整的文獻(xiàn)。

1.3 數(shù)據(jù)提取及文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)價(jià)

由兩名研究者獨(dú)立進(jìn)行數(shù)據(jù)提取及文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)價(jià)，按照納入和排除標(biāo)準(zhǔn)篩選文獻(xiàn)并提取相關(guān)資料，若出現(xiàn)分歧，則由兩名研究者共同討論，必要時(shí)請(qǐng)第三位研究者參與討論并得出統(tǒng)一結(jié)果。按照文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)價(jià)量表——Newcastle-Ottawa量表（Newcastle-Ottawa scale，NOS）對(duì)納入的文獻(xiàn)進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。評(píng)分≥6分認(rèn)為納入的文獻(xiàn)質(zhì)量較高。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用Review Manager 5.3軟件進(jìn)行Meta分析。依據(jù)統(tǒng)計(jì)量

I

的大小判斷各研究間的異質(zhì)性，

I

＞50%時(shí)，表明各研究間存在異質(zhì)性，采用隨機(jī)效應(yīng)模型；反之，采用固定效應(yīng)模型。合并效應(yīng)量選擇HR及其95%CI，采用

Z

檢驗(yàn)分析HR值的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。以

P

＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用敏感性分析評(píng)估Meta分析結(jié)果的穩(wěn)定性，通過漏斗圖檢測(cè)是否存在發(fā)表偏倚。

2 結(jié)果

2.1 文獻(xiàn)篩檢結(jié)果

按照檢索策略共檢索出文獻(xiàn)1022篇，剔除重復(fù)發(fā)表、綜述、摘要、病例報(bào)道、非預(yù)后相關(guān)和與惡性腫瘤無關(guān)等文獻(xiàn)817篇，閱讀全文，排除無生存結(jié)局相關(guān)指標(biāo)的文獻(xiàn)189篇，最終納入16篇文獻(xiàn)。

2.2 納入文獻(xiàn)的基本特征

共納入16篇文獻(xiàn)，樣本量為1741例，發(fā)表時(shí)間為2013—2020年，包含9種腫瘤類型。16篇文獻(xiàn)結(jié)局指標(biāo)中均包括OS，2篇文獻(xiàn)結(jié)局指標(biāo)中包括DFS，2篇文獻(xiàn)結(jié)局指標(biāo)中包括RFS。本研究納入的HR值及95%CI均為多因素分析的結(jié)果。NOS評(píng)分最低為6分，最高為8分。檢測(cè)方法均為定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction，qRT-PCR）。（表1）

表1 納入文獻(xiàn)的基本特征

2.3 Meta分析結(jié)果

2.3.1 H19表達(dá)水平與惡性腫瘤患者OS的關(guān)系在符合納入標(biāo)準(zhǔn)的研究中，以O(shè)S為研究終點(diǎn)的樣本量共1741例。結(jié)果表明，H19表達(dá)與惡性腫瘤患者的OS有關(guān)，H19高表達(dá)是惡性腫瘤患者預(yù)后的不利因素（HR=1.69，95%CI：1.46～1.95，

P

＜0.05）。（圖 1）

圖1 H19與惡性腫瘤患者OS關(guān)系的Meta分析結(jié)果

2.3.2 H19表達(dá)水平與消化系統(tǒng)惡性腫瘤患者OS的關(guān)系 為了解不同類型惡性腫瘤中H19表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系以及探索異質(zhì)性的來源，本研究進(jìn)一步將腫瘤類型分為消化系統(tǒng)惡性腫瘤與其他系統(tǒng)惡性腫瘤并進(jìn)行亞組分析，結(jié)果顯示，H19表達(dá)是消化系統(tǒng)惡性腫瘤患者預(yù)后的不利因素，H19低表達(dá)消化系統(tǒng)惡性腫瘤患者的OS長(zhǎng)于H19高表達(dá)患者（HR=1.63，95%CI：1.32～2.02，

P

＜0.05）。（圖2）

圖2 H19與消化系統(tǒng)和其他系統(tǒng)惡性腫瘤患者OS關(guān)系的Meta分析結(jié)果

納入的文獻(xiàn)中，4篇為結(jié)直腸癌研究，2篇為肝癌研究，2篇為胃癌研究，1篇為膽囊癌研究。進(jìn)一步對(duì)這4種消化系統(tǒng)惡性腫瘤患者預(yù)后與H19表達(dá)的關(guān)系進(jìn)行亞組分析，結(jié)果顯示，H19低表達(dá)結(jié)直腸癌患者的OS長(zhǎng)于H19高表達(dá)患者（HR=2.69，95%CI：1.12～6.45，

P

＜0.05）；未發(fā)現(xiàn)H19表達(dá)與肝癌、胃癌和膽囊癌患者OS有關(guān)。（圖 3）

圖3 H19與結(jié)直腸癌、肝癌、胃癌、膽囊癌患者OS關(guān)系的Meta分析結(jié)果

2.4 H19表達(dá)與惡性腫瘤患者OS 關(guān)系的亞組分析結(jié)果

為進(jìn)一步探索異質(zhì)性的來源，本研究將所納入文獻(xiàn)按照不同的樣本量、研究對(duì)象國(guó)籍及NOS評(píng)分進(jìn)行亞組分析，結(jié)果顯示，依據(jù)文獻(xiàn)質(zhì)量（即NOS評(píng)分）進(jìn)行亞組分析的

I

值均較小，提示文獻(xiàn)質(zhì)量可能是研究的異質(zhì)性來源。（表2）

表2 H19表達(dá)與惡性腫瘤患者OS關(guān)系的亞組分析結(jié)果

2.5 敏感性分析

對(duì)于H19表達(dá)與惡性腫瘤患者OS關(guān)系的研究，逐一剔除各項(xiàng)研究后，并未發(fā)現(xiàn)HR有明顯的改變，說明敏感性較低，結(jié)果較為穩(wěn)定可信。（表3）

表3 H19表達(dá)與惡性腫瘤患者OS關(guān)系的敏感性分析結(jié)果

2.6 發(fā)表偏倚

本研究選擇漏斗圖進(jìn)行發(fā)表偏倚檢測(cè)，結(jié)果顯示，漏斗圖呈不對(duì)稱分布。（圖4）

圖4 H19表達(dá)與惡性腫瘤患者OS 關(guān)系的漏斗圖

3 討論

惡性腫瘤嚴(yán)重威脅著人類的健康，已有研究證明H19在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用，但現(xiàn)有研究結(jié)果并不一致，本研究對(duì)H19與惡性腫瘤患者預(yù)后關(guān)系的文獻(xiàn)進(jìn)行了Meta分析。結(jié)果表明，H19表達(dá)與惡性腫瘤患者的OS有關(guān)，H19高表達(dá)惡性腫瘤患者的OS更短，按照腫瘤類型分亞組進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，H19表達(dá)與結(jié)直腸癌患者的OS有關(guān)。依據(jù)樣本量、研究對(duì)象國(guó)籍、文獻(xiàn)質(zhì)量進(jìn)行亞組分析異質(zhì)性來源，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，依據(jù)文獻(xiàn)質(zhì)量進(jìn)行亞組分析的I值均較小，提示文獻(xiàn)質(zhì)量可能是研究的異質(zhì)性來源。在進(jìn)行漏斗圖分析時(shí)發(fā)現(xiàn)，漏斗圖呈不對(duì)稱性分布，可能與小樣本試驗(yàn)有關(guān)。研究中結(jié)局指標(biāo)為PFS和RFS的文獻(xiàn)均僅有2篇，因此未對(duì)H19與惡性腫瘤患者DFS和RFS的關(guān)系進(jìn)行Meta分析。

本研究結(jié)果提示H19表達(dá)可能與惡性腫瘤患者的預(yù)后有關(guān)，目前關(guān)于H19與惡性腫瘤關(guān)系的機(jī)制主要有以下幾種學(xué)說：增強(qiáng)子競(jìng)爭(zhēng)學(xué)說、差異性甲基化區(qū)域（differentially methylated region，DMR）作用、染色質(zhì)模型、轉(zhuǎn)錄周期學(xué)說，H19還可以通過微小RNA（microRNA，miRNA）形成競(jìng)爭(zhēng)內(nèi)源性RNA調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，參與腫瘤的進(jìn)展。有研究利用Starbase2.0軟件預(yù)測(cè)了與H19相互作用的miRNA，其中包括 miRNA-675、miRNA-196、miRNA-148、miRNA-130、miRNA-18等，這些miRNA已被證實(shí)通過與下游靶基因的結(jié)合廣泛參與惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。本研究再通過生物信息學(xué)在線軟件Co-lncRNA進(jìn)行KEGG pathway預(yù)測(cè)，結(jié)果顯示，與H19相互作用的基因富集通路有N聚糖生物合成通路、ABC轉(zhuǎn)運(yùn)體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、p53信號(hào)通路等。關(guān)于其作用機(jī)制需要進(jìn)一步的研究證實(shí)。

本研究尚存在一些不足之處：首先，不同研究對(duì)H19高表達(dá)的界定標(biāo)準(zhǔn)不一致；其次，納入文獻(xiàn)的數(shù)量較少，僅有16篇，其中包含多種腫瘤類型，只有2篇文獻(xiàn)納入的人群為外國(guó)人群，使研究結(jié)果的適用人群受到一定程度的限制；最后，本研究只納入了英文和中文文獻(xiàn)。因此，期待更多的研究進(jìn)一步探討H19在不同類型惡性腫瘤中的預(yù)后價(jià)值。

綜上所述，惡性腫瘤患者尤其是結(jié)直腸癌患者腫瘤組織中H19表達(dá)上調(diào)與不良預(yù)后有關(guān)。H19可能成為一種新的惡性腫瘤預(yù)測(cè)因子，對(duì)惡性腫瘤的預(yù)后判斷和治療具有一定的指導(dǎo)價(jià)值，但尚需進(jìn)一步前瞻性研究證實(shí)。