曾 君，吳本清△，李 嵐，高國蘭，鄭 義，楊江濤，楊菊紅，林列坤，梁 欣，王長山

1.中國科學院大學深圳醫(yī)院(光明)醫(yī)學實驗中心，廣東深圳 518107；2.廣東省深圳市人民醫(yī)院產(chǎn)科，廣東深圳 518020；3.深圳愛灣醫(yī)學檢驗實驗室，廣東深圳 518107

珠蛋白生成障礙性貧血，是一組嚴重影響人體健康的隱性遺傳性血液系統(tǒng)疾病，主要發(fā)病原因是患者攜帶有缺陷的血紅蛋白基因，導致血紅蛋白合成異常，引起患者貧血表現(xiàn)及其他病理狀態(tài)，其發(fā)病機制在國內(nèi)外被廣泛研究[1-2]。根據(jù)珠蛋白生成障礙性貧血患者的基因異常類型，可分為α-珠蛋白生成障礙性貧血和β-珠蛋白生成障礙性貧血，部分患者合并攜帶α和β兩種珠蛋白生成障礙性貧血基因。本研究采用先進的膜條導流雜交技術檢測珠蛋白生成障礙性貧血基因，分析珠蛋白生成障礙性貧血患者基因分布特征，以輔助珠蛋白生成障礙性貧血臨床診斷，探索防治策略。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2016年12月至2019年12月在中國科學院大學深圳醫(yī)院(光明)醫(yī)學實驗中心進行珠蛋白生成障礙性貧血基因突變檢測的3 891例就診者為研究對象，其中男1 358例，女2 533例；年齡為出生1 d至90歲，平均(25.64±10.69)歲。該研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審核通過，并在研究對象簽署知情同意書后開展珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測。

1.2方法

1.2.1血液樣本DNA提取 使用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管采集研究對象2 mL外周血，應用廈門至善生物有限公司提供的磁珠法核酸提取試劑盒在全自動核酸提取儀上提取DNA，嚴格按照試劑盒說明書及儀器操作步驟開展提取實驗。為鑒定儀器提取DNA的質(zhì)量，利用超微量紫外分光光度計測定提取DNA的吸光度比值A260/A280和濃度，A260/A280在1.6～2.0且濃度大于50 ng/mL時進行下一步實驗，未達到上述條件的樣本重新提取DNA。

1.2.2基因檢測 珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測采用潮州凱普生物化學有限公司提供的珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測試劑盒，運用膜條導流雜交技術檢測3種缺失型α-珠蛋白生成障礙性貧血和3種突變型α-珠蛋白生成障礙性貧血及19種突變型β-珠蛋白生成障礙性貧血。檢測過程嚴格按照試劑盒說明書操作。

2 結(jié) 果

在3 891例研究對象中檢出珠蛋白生成障礙性貧血基因變異1 910例，占比49.09%；其中α-珠蛋白生成障礙性貧血1 135例，占比29.17%；β-珠蛋白生成障礙性貧血697例，占比17.91%；αβ-復合型珠蛋白生成障礙性貧血78例(2.00%)。珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測結(jié)果及頻率分布見表1～3。

表1 α-珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測結(jié)果及頻率分布

續(xù)表1 α-珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測結(jié)果及頻率分布

表2 β-珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測結(jié)果及頻率分布

表3 αβ-復合型珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測結(jié)果分布

3 討 論

本研究應用先進膜條導流雜交技術一次性檢測患者攜帶的珠蛋白生成障礙性貧血基因。膜條導流雜交技術是近年來發(fā)展起來的可對核酸進行高通量快速檢測的技術，此技術集合了PCR、導流雜交及基因芯片技術。一張基因膜條同時檢測6種α-珠蛋白生成障礙性貧血和19種β-珠蛋白生成障礙性貧血，可大幅度提高研究的檢測通量及工作效率。本研究中，深圳地區(qū)α-珠蛋白生成障礙性貧血發(fā)生主要的基因型是--SEA/αα和-α3.7/αα，其發(fā)生頻率分別為17.68%和4.19%，其他α-珠蛋白生成障礙性貧血基因發(fā)生頻率均小于4%；β-珠蛋白生成障礙性貧血發(fā)生主要基因型是CD41-42，其發(fā)生頻率為7.76%，與同類研究結(jié)果相似[3-5]。

本研究發(fā)現(xiàn)，αβ-復合型珠蛋白生成障礙性貧血基因患者78例，其發(fā)生率為2.00%(78/3 891)，與曾祥興等[6]研究廣東河源地區(qū)的結(jié)果相近。其中CD41-42與--SEA/αα復合型珠蛋白生成障礙性貧血患者共16例，占復合型珠蛋白生成障礙性貧血總數(shù)的20.51%(16/78)。通過對深圳地區(qū)αβ-復合型珠蛋白生成障礙性貧血基因型分析，與CD41-42及--SEA/αα相關的復合型珠蛋白生成障礙性貧血共42例，占復合型珠蛋白生成障礙性貧血總數(shù)的53.85%(42/78)。對于αβ-復合型珠蛋白生成障礙性貧血基因患者，由于αβ-珠蛋白生成障礙性貧血基因的同時缺失或突變，致使αβ-珠蛋白的合成達到平衡，從而使得患者的臨床貧血癥狀相對較輕，故在珠蛋白生成障礙性貧血常規(guī)篩查時容易漏診，但該類患者由于攜帶αβ-復合型珠蛋白生成障礙性貧血基因，在產(chǎn)前篩查中應重點防控，預防該類患者婚育導致重型珠蛋白生成障礙性貧血患兒出生[7-9]。在臨床實際工作中，αβ-復合型珠蛋白生成障礙性貧血基因發(fā)生機制較為復雜，而且β-珠蛋白生成障礙性貧血的臨床表型會掩蓋α-地貧的表型[10]，因此對于血液學篩查一定要同時進行αβ-復合型珠蛋白生成障礙性貧血基因的檢測，可以有效防止復合型珠蛋白生成障礙性貧血漏診。

本研究應用膜條導流雜交技術檢測患者珠蛋白生成障礙性貧血基因型，研究了珠蛋白生成障礙性貧血基因型的分布情況，基因突變類型及其流行病學特征，明確了深圳地區(qū)珠蛋白生成障礙性貧血的基因突變譜，為珠蛋白生成障礙性貧血的產(chǎn)前診斷提供了科學依據(jù)，且可促進深圳地區(qū)珠蛋白生成障礙性貧血的有效防治，對提高深圳地區(qū)的人口質(zhì)量有重要意義。