袁 甜

(丹東市漁業(yè)發(fā)展服務中心，遼寧 丹東118000)

縊蟶(Sinonovacula constricta)在遼寧省丹東地區(qū)俗稱“小人仙”，主要分布在中國、日本和朝鮮等國的沿海地區(qū)。縊蟶作為中國四大海水養(yǎng)殖貝類之一，養(yǎng)殖歷史悠久?？O蟶營埋棲生活，具有生長快、產(chǎn)量高、味道鮮美且營養(yǎng)豐富的特點，深得廣大消費者的喜愛。因縊蟶的濾食性特點，在北方海水池塘養(yǎng)殖中常將縊蟶作為底層貝類與魚、蝦、海蜇等經(jīng)濟生物進行混養(yǎng)。隨著縊蟶養(yǎng)殖規(guī)模的擴大、密度的增加，生長緩慢、死亡等現(xiàn)象日趨嚴重，這就直接導致了養(yǎng)殖戶經(jīng)濟收入的下降甚至虧損。本文對海水池塘養(yǎng)殖縊蟶進行病原研究，旨在通過本研究查找死亡原因，“對癥下藥”盡早預防，提高縊蟶產(chǎn)量和減少養(yǎng)殖戶經(jīng)濟損失。

一、材料與方法

1.試驗材料

選取丹東東港縊蟶海水養(yǎng)殖池塘5口，池塘分布在4個沿海鄉(xiāng)鎮(zhèn)，平均面積為5.3公頃、水深1.8米，池底為泥沙底，含泥量為80%左右，利用池底10%面積做的蟶田進行縊蟶養(yǎng)殖，縊蟶放苗時間相同，苗種來源一致。養(yǎng)殖模式為縊蟶、中國對蝦、海蜇混養(yǎng)。在縊蟶易發(fā)病季節(jié)即7－9月，平均每10天采集縊蟶樣品1次，采集數(shù)量為150枚。感染試驗用健康縊蟶取自東港某健康養(yǎng)殖場。

2.試驗方法

(1)測量及解剖鏡下觀察。將采集回實驗室的縊蟶稱重、測量，并在解剖鏡下觀察，記錄體重以及鏡檢狀態(tài)。

(2)細菌分離。取有病癥的活縊蟶，在無菌條件下用一次性無菌接種針取縊蟶鰓、外套膜和消化道，劃線在TSC和TCBS培養(yǎng)基上培養(yǎng)，25℃恒溫培養(yǎng)24小時，挑取優(yōu)勢單菌落在TSC平板上純化培養(yǎng)后移入試管斜面中保存。

(3)細菌鑒定。生化鑒定選用法國梅里埃生物公司生產(chǎn)的微生物自動分析系統(tǒng)進行生化特征分析。分子生物學鑒定為將分離菌擴增、16s rDNA基因序列測序后進行Blast比對，結果顯示菌株與相應基因相似率達99%。

3.人工感染試驗

選擇健康的縊蟶供感染試驗用。將培養(yǎng)約18小時的供試菌制成菌懸液，離心(3 000轉(zhuǎn)/分)8分鐘，棄上清液，用無菌生理鹽水制成菌懸液。試驗組和對照組水體均為10升，試驗組和對照組縊蟶數(shù)量為50個，試驗組水體中將菌稀釋為約107CFU/毫升，溫度控制在(23±0.5)℃，鹽度20，連續(xù)充氣，觀察縊蟶發(fā)病癥狀及死亡情況。

4.水質(zhì)理化指標的測定

用便攜式水質(zhì)分析儀檢測水溫、溶氧、鹽度、pH，用多參數(shù)水質(zhì)分析儀檢測氨氮、亞硝酸鹽、磷酸鹽、化學耗氧量。

二、結果與分析

1.縊蟶生長情況

根據(jù)3個月的生長跟蹤，5口池塘縊蟶表現(xiàn)出不同的生長情況，9月30日取樣測量情況(表1)可以看出，1號和5號池塘縊蟶長勢良好，2、3、4號池塘縊蟶長勢均表現(xiàn)不佳。并且在跟蹤調(diào)查中發(fā)現(xiàn)2、3、4號池塘縊蟶均有不同程度的發(fā)病以及死亡現(xiàn)象。

表1 縊蟶生長情況

2.分離菌株的檢定

從縊蟶鰓、外套膜、腸道分離得到24株菌株，用全自動細菌分析儀對病原菌初步鑒定，結果分別為殺鮭氣單胞菌、溶藻弧菌。將分離菌擴增、16s rDNA基因序列測序后進行Blast比對，結果顯示菌株與相應基因相似率達99%。

3.人工感染試驗

人工感染24小時后縊蟶開始出現(xiàn)死亡，感染48小時后，溶藻弧菌菌株感染縊蟶死亡率達到100%，殺鮭氣單胞菌菌株感染縊蟶死亡率達到48.8%。感染縊蟶主要表現(xiàn)為閉殼肌松弛、開合無力、對外界刺激反應遲鈍。對每組感染死亡的縊蟶解剖，取鰓、外套膜、腸道分離得到的細菌與感染菌株一致。對照組縊蟶無死亡。

4.水質(zhì)指標和病原菌對縊蟶生長情況的影響

池塘水溫22～28℃、溶氧4.7～5.6毫克/升，但是根據(jù)監(jiān)測顯示2、3、4號塘口氨氮和亞硝酸鹽含量超標(表2)，同時在2、3號塘口分別檢測出殺鮭氣單胞菌和溶藻弧菌。這一檢測結果與縊蟶生長情況吻合，2、3、4號塘口生長不佳，2、3號塘口出現(xiàn)患病死亡縊蟶。

表2 水質(zhì)指標和病原菌對縊蟶生長情況比對

三、討論

縊蟶作為海水池塘底層養(yǎng)殖的主要品種，其產(chǎn)量的多少決定了池塘的經(jīng)濟效益，通過3個月的生長跟蹤發(fā)現(xiàn)，水質(zhì)指標中氨氮和亞硝酸鹽反映了池塘水質(zhì)的好壞，同時也是造成縊蟶增減的原因之一，導致縊蟶發(fā)病以及死亡的主要病原菌為殺鮭氣單胞菌和溶藻弧菌。在養(yǎng)殖過程中病害防治應該始終貫徹“預防為主、防治結合”的方式，建議養(yǎng)殖戶堅持每年翻新蟶田，利用冬季充分曬田，選擇優(yōu)質(zhì)蟶苗，適時地進行水質(zhì)調(diào)節(jié)、底質(zhì)改良等。