王晨晨，杜朝，郭學(xué)玲，張曦月，王英澤

0 引言

免疫細(xì)胞是腫瘤微環(huán)境的重要組成部分，在腫瘤免疫治療中起著關(guān)鍵作用。其中浸潤(rùn)于腫瘤微環(huán)境中的巨噬細(xì)胞，稱(chēng)為腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（tumour-associated macrophages,TAMs），是微環(huán)境中數(shù)量最豐富的一類(lèi)免疫細(xì)胞[1]。TAMs參與腫瘤血管生成，基質(zhì)細(xì)胞重塑，維持微酸、低氧、高壓等特殊狀態(tài)調(diào)控，在腫瘤發(fā)生、生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移等過(guò)程中扮演重要角色。同時(shí)，TAMs通過(guò)增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的遺傳不穩(wěn)定性、滋養(yǎng)腫瘤干細(xì)胞、促進(jìn)浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移等方面影響腫瘤的臨床治療效果[2]，是促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)的關(guān)鍵驅(qū)動(dòng)力。此外，腫瘤組織中巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)程度與患者預(yù)后不良有關(guān)，TAMs數(shù)量與患者生存時(shí)間呈負(fù)相關(guān)[3]。隨著對(duì)TAMs與惡性腫瘤復(fù)雜關(guān)系的深入了解，TAMs已經(jīng)成為臨床癌癥診斷和治療的重要靶點(diǎn)。

TAMs與癌癥轉(zhuǎn)移、免疫抑制和腫瘤持續(xù)生長(zhǎng)密切相關(guān)。目前，已有多種策略應(yīng)用于靶向TAMs的免疫治療中，例如抑制免疫檢查點(diǎn)、RNA干擾（RNAi）的免疫治療-化療聯(lián)合療法、放射療法以及基于TAMs的免疫療法與其他療法的聯(lián)合治療等。常見(jiàn)的靶向TAMs的抗癌藥物主要是通過(guò)阻斷其促腫瘤信號(hào)通路來(lái)發(fā)揮作用，如集落刺激因子-1受體（colony stimulating factor 1 receptor,CSF-1R）靶向藥物，PD-1/PD-L1、CD47免疫檢查點(diǎn)抑制劑等[4]。雖然該類(lèi)藥物在部分腫瘤（如黑色素瘤等）治療中獲得了突破性進(jìn)展，降低了惡化和死亡風(fēng)險(xiǎn)，但在實(shí)體瘤治療中，由于腫瘤微環(huán)境的組分復(fù)雜性以及藥物本身存在的響應(yīng)性差、易耐藥等缺陷，嚴(yán)重影響了其治療效果[5]。因此，如何提高腫瘤免疫治療效果且降低藥物不良反應(yīng)成為了當(dāng)前免疫治療的關(guān)鍵問(wèn)題。近年來(lái)，基于納米載藥體系在腫瘤免疫治療方面的巨大潛力，納米藥物得到了研究者的高度關(guān)注。納米載藥體系具備獨(dú)特的理化性質(zhì)，可通過(guò)提高載藥量、修飾靶向基團(tuán)、改變藥物分布等，實(shí)現(xiàn)快速透過(guò)生物屏障、有效增強(qiáng)腫瘤免疫原性、促進(jìn)腫瘤免疫治療效果并降低免疫毒性[6]?，F(xiàn)已有近20種納米藥物獲得美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（Food and Drug Administration,FDA）批準(zhǔn)用于腫瘤免疫治療，如白蛋白結(jié)合型紫杉醇（albumin-bound paclitaxel），氧化鐵磁性納米顆粒（magnetic iron oxide nanoparticles）等[7]。因此，納米載藥體系用于腫瘤免疫治療具有廣闊的應(yīng)用前景[8-9]。

1 腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞

巨噬細(xì)胞是先天性免疫的重要組成部分，隨著對(duì)其功能的深入研究，越來(lái)越多的證據(jù)表明巨噬細(xì)胞在腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。根據(jù)表型和功能的不同，活化的巨噬細(xì)胞可分為M1型和M2型，其極化方向受所處微環(huán)境的調(diào)控，如組織微環(huán)境、外部因素和炎性反應(yīng)因子等均可對(duì)巨噬細(xì)胞進(jìn)行不同形式的激活[10]。促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)的巨噬細(xì)胞為M2表型，在正常組織中具有修復(fù)損傷與抑制炎性反應(yīng)的功能。抑制腫瘤生長(zhǎng)的巨噬細(xì)胞為M1表型，能夠誘導(dǎo)炎性反應(yīng)，激活免疫應(yīng)答殺傷腫瘤細(xì)胞[11]。在腫瘤發(fā)生過(guò)程中，TAMs往往能夠刺激血管生成，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移、侵襲，介導(dǎo)腫瘤免疫逃逸。在腫瘤轉(zhuǎn)移部位中，TAMs促進(jìn)腫瘤細(xì)胞外滲、存活和后續(xù)活動(dòng)。此外，腫瘤組織中TAMs的浸潤(rùn)程度往往與患者的預(yù)后不良相關(guān)。因此，針對(duì)TAMs的腫瘤免疫療法引起了人們的廣泛關(guān)注[4,12]。

2 腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的促腫瘤機(jī)制

2.1 低氧微環(huán)境誘導(dǎo)M2型TAMs

由于腫瘤組織的急速增殖和擴(kuò)張，腫瘤微環(huán)境處于缺氧狀態(tài)。巨噬細(xì)胞被招募至腫瘤區(qū)域后，低氧微環(huán)境通過(guò)激活多種胞內(nèi)信號(hào)途徑，如低氧誘導(dǎo)因子（hypoxia inducible factor,HIF）途徑、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）途徑和核轉(zhuǎn)錄因子（NFκB）途徑等，使VEGF與嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子（Eotaxin）等細(xì)胞因子在腫瘤組織中富集，誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化為M2型。M2型TAMs進(jìn)一步產(chǎn)生趨化因子CCL2（C-C motif chemokine 2）、CCL5（C-C motif chemokine 5）或巨噬細(xì)胞集落刺激因子-1（macrophage colony stimulating factor-1,CSF-1）等因子參與免疫抑制，為血管生成、腫瘤的轉(zhuǎn)移擴(kuò)散等提供了重要基礎(chǔ)[13-14]。

2.2 TAMs參與血管生成

為適應(yīng)腫瘤微環(huán)境中營(yíng)養(yǎng)和氧氣供應(yīng)的減少，維持腫瘤細(xì)胞高增殖率所需的能量和結(jié)構(gòu)改變，TAMs經(jīng)歷了一系列變化，刺激血管生成，促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)[15]。腫瘤組織缺氧致使血管生成因子和抗血管生成因子失衡，腫瘤組織血管生成紊亂。因此，與正常血管相比，腫瘤血管往往具有異常、不成熟和易滲漏等特性[16]。

腫瘤血管生成是一個(gè)由腫瘤細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞共同協(xié)調(diào)的過(guò)程，需要基底膜的降解以及內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移。通過(guò)協(xié)調(diào)二者之間的相互作用，TAMs參與了血管生成這一過(guò)程。首先，TAMs分泌基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases,MMPs）和組織蛋白酶（cathepsins）降解基底膜；其次，分泌促血管生成因子，如VEGF、血小板衍生生長(zhǎng)因子（platelet derived growth factor,PDGF），堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（basic fibroblast growth factor,b-FGF）和趨化因子CCL2、CXCL8，提供維持腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)與擴(kuò)散所需的血管網(wǎng)絡(luò)；最后，VEGF-A和CCL2等因子可招募單核細(xì)胞，它們的表達(dá)量與TAMs積聚程度及某些腫瘤的血管發(fā)達(dá)程度呈正相關(guān)[15,17]。此外，一種表達(dá)酪氨酸激酶受體Tie-2的單核細(xì)胞亞群（Tie2-expressing monocytes,TEMs）近年來(lái)逐漸受到人們關(guān)注，Biel等發(fā)現(xiàn)其可誘導(dǎo)血管生成[18]。血管生成素1（angiopoietin-1,Ang-1）為T(mén)ie-2的配體，血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)Ang-1致使TEMs沿著血管表面排列，TEMs合成Wnt-7b蛋白靶向血管內(nèi)皮細(xì)胞，最終刺激內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生VEGF，誘導(dǎo)血管生成[19-21]。綜上所述，TAMs與腫瘤衍生的血管生成因子協(xié)同促進(jìn)新生血管的形成，是腫瘤血管生成與細(xì)胞增殖的重要前提。

2.3 TAMs調(diào)控腫瘤轉(zhuǎn)移

腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致癌癥患者死亡的主要原因。大量證據(jù)表明，TAMs的募集與腫瘤細(xì)胞侵襲擴(kuò)散之間存在聯(lián)系。TAMs通過(guò)參與轉(zhuǎn)移前生態(tài)位的形成，促進(jìn)轉(zhuǎn)移部位的擴(kuò)散。此外，在轉(zhuǎn)移部位中，TAMs通過(guò)介導(dǎo)免疫逃逸，促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的外滲和存活[22]。

上皮間質(zhì)表型轉(zhuǎn)換（epithelial-mesenchymal transition,EMT）是原發(fā)性腫瘤進(jìn)行侵襲轉(zhuǎn)移的起始步驟，腫瘤上皮細(xì)胞在EMT過(guò)程中獲得浸潤(rùn)和遷移能力，通過(guò)血液循環(huán)、淋巴管灌注及遠(yuǎn)處遷移等途徑得以生存擴(kuò)散，TAMs參與調(diào)控這一過(guò)程[23]。有研究表明，TAMs分泌的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）可誘發(fā)腫瘤細(xì)胞EMT過(guò)程，如畸胎瘤中，TAMs募集導(dǎo)致TGF-β表達(dá)升高，引發(fā)了腫瘤細(xì)胞EMT過(guò)程，致使腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移[24]。TAMs還可分泌酸性分泌蛋白，如蛋白水解酶、MMPs和絲氨酸蛋白酶等，在這些酶類(lèi)的協(xié)同作用下，基底膜和胞外基質(zhì)被降解，使得腫瘤細(xì)胞從原發(fā)部位向遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移。此外，腫瘤細(xì)胞分泌的CSF-1與巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的表皮生長(zhǎng)因子（epidermal growth factor,EGF）信號(hào)通路能誘導(dǎo)二者在血管周?chē)奂?，引發(fā)腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸[17]。由此可見(jiàn)，TAMs的累積使得腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)，以TAMs為靶點(diǎn)解決腫瘤轉(zhuǎn)移問(wèn)題對(duì)腫瘤免疫治療具有重要意義。

3 納米藥物靶向TAMs的治療策略

3.1 誘導(dǎo)TAMs重極化

腫瘤微環(huán)境中的巨噬細(xì)胞多數(shù)為M2表型，且腫瘤組織內(nèi)部及附近的M2型巨噬細(xì)胞數(shù)量與患者的預(yù)后不良相關(guān)[25]。因此，將M2型TAMs重極化為M1型有利于巨噬細(xì)胞發(fā)揮腫瘤殺傷作用，防止腫瘤轉(zhuǎn)移，改善腫瘤微環(huán)境的免疫抑制狀態(tài)。

圖1 人參衍生納米顆粒(GDNPs)重新編程巨噬細(xì)胞極化[31]Figure 1 Reprogramming macrophage polarization with GDNPs[31]

氧化鐵納米顆粒（Ferumoxytol）是一種超小型順磁性（USPIO）納米顆粒，已被FDA批準(zhǔn)進(jìn)入臨床使用[26]。Zanganeh等研究發(fā)現(xiàn)，氧化鐵納米顆?？纱龠M(jìn)巨噬細(xì)胞向M1型轉(zhuǎn)化，同時(shí)可促進(jìn)Th1型T細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明，氧化鐵納米顆粒可將腫瘤組織中的TAMs由M2型轉(zhuǎn)變?yōu)镸1型，進(jìn)而能顯著抑制小鼠皮下腺癌的生長(zhǎng)[27-28]。此外，Yu等也發(fā)現(xiàn)氧化鐵納米顆粒能夠誘導(dǎo)M2型TAMs重極化，刺激活性氧產(chǎn)生，進(jìn)而發(fā)揮M1型巨噬細(xì)胞的殺傷作用[29]。人參根提取物如人參皂苷、酚類(lèi)和酸性多糖等已被認(rèn)為具有多種藥理特性，包括抗衰老、抗氧化及增強(qiáng)免疫抗癌等作用。近日研究發(fā)現(xiàn)，利用納米載藥體系攜載人參根提取物有望成為腫瘤免疫治療的新型納米藥物[30]。人參衍生納米顆粒（ginseng-derived nanoparticles,GDNPs）重新編程巨噬細(xì)胞極化見(jiàn)圖1。Cao等[31]用超速離心法制備的GNDPs，在體內(nèi)外水平上均可靶向TAMs，通過(guò)TLR4和MyD88信號(hào)通路誘導(dǎo)M2型TAMs極化為M1型，增加腫瘤組織中M1型巨噬細(xì)胞的數(shù)量，抑制小鼠黑色素瘤的生長(zhǎng)。Wu等證明了羧基化多壁碳納米管（MWCNTs-COOH）可通過(guò)TLR-4/NF-κB p65信號(hào)通路，誘導(dǎo)M2型TAMs極化為M1型，阻止肺癌中促癌因子的產(chǎn)生，結(jié)果發(fā)現(xiàn)明顯地減緩了肺癌的侵襲和遷移行為并抑制了腫瘤的生長(zhǎng)[32-33]。乳腺癌4T-1細(xì)胞具有高度侵襲性，可轉(zhuǎn)移至肺、肝及大腦等部位，惡性程度極強(qiáng)，臨床治療困難。Pei等[34]開(kāi)發(fā)了用于共輸送疏水化療藥物紫杉醇（PTX）和生物大分子IL-12的納米顆粒。納米顆粒進(jìn)入腫瘤部位后，顯著抑制了乳腺癌4T-1細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，延長(zhǎng)了小鼠的生存時(shí)間。PTX和IL-12聯(lián)合應(yīng)用可激活T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞釋放IFN-γ，選擇性抑制調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，誘導(dǎo)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞M1型分化，從而改善腫瘤免疫抑制微環(huán)境。膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（glioblastoma,GBM）是一種死亡率很高的惡性腦腫瘤，其顯著特征就是基底膜存在大量巨噬細(xì)胞。Li等[35]利用含阿霉素（DOX）的納米金剛石藥物復(fù)合物（Nano-DOX）調(diào)節(jié)基底膜微環(huán)境，結(jié)果表明Nano-DOX處理的基底膜細(xì)胞能夠?qū)AMs從促GBM表型重新極化為抗GBM表型，從而抑制腫瘤生長(zhǎng)。因此，利用巨噬細(xì)胞的極化能力轉(zhuǎn)變TAMs表型，根據(jù)巨噬細(xì)胞的功能差異調(diào)節(jié)腫瘤免疫微環(huán)境，是納米藥物靶向TAMs發(fā)揮腫瘤免疫治療的有效途徑。

3.2 利用TAMs遞送納米藥物

腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的募集和浸潤(rùn)是實(shí)體瘤的顯著特征，在腫瘤的發(fā)展和轉(zhuǎn)移中起著重要作用。此外，巨噬細(xì)胞具有吞噬功能，便于攜帶納米藥物進(jìn)入腫瘤組織。因此，許多研究人員利用腫瘤組織募集TAMs這一過(guò)程，將藥物加載于巨噬細(xì)胞中，促進(jìn)藥物在腫瘤部位的遞送與滯留，增強(qiáng)藥物的腫瘤殺傷作用。

M1型巨噬細(xì)胞具有植入腫瘤組織的能力，能通過(guò)吞噬作用攝取足夠的納米藥物進(jìn)行腫瘤治療，不少研究人員利用原代M1型巨噬細(xì)胞將納米藥物送入膠質(zhì)瘤中。Pang等[36]將含有DOX的聚丙交酯-乙交酯共聚物納米顆粒（DOX@NPs）與M1型巨噬細(xì)胞共孵育，制備了M1型巨噬細(xì)胞負(fù)載的DOX@NPs系統(tǒng)（DOX@M1-NPs）。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，M1型巨噬細(xì)胞負(fù)載顆粒后仍保持良好的趨瘤能力，并能有效攜帶顆粒進(jìn)入腫瘤組織。體內(nèi)結(jié)果表明，DOX@M1-NPs相較于游離納米藥物在腫瘤部位分布范圍更廣。該納米系統(tǒng)中，M1型巨噬細(xì)胞能與腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生良好的細(xì)胞相互作用，促進(jìn)NPs向腫瘤組織的滲透，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，延長(zhǎng)患者的中位生存期。為了進(jìn)一步提高納米藥物的生物相容性和腫瘤治療效果，各種納米藥物/巨噬細(xì)胞聯(lián)合光熱治療、光聲治療等模式不斷涌現(xiàn)。巨噬細(xì)胞遞送納米藥物用于腫瘤的光熱治療見(jiàn)圖2。Qiang等[37]將負(fù)載DOX的還原氧化石墨烯（rGO）加載到小鼠巨噬細(xì)胞系（RAW264.7）中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)RAW264.7細(xì)胞在體內(nèi)外對(duì)小鼠前列腺癌細(xì)胞（RM-1)的趨瘤能力均無(wú)明顯變化，巨噬細(xì)胞內(nèi)的PEG-BPEI-rGO具有良好的光熱轉(zhuǎn)換性能，促使DOX快速釋放，提高了殺瘤效果。Chiu等[38]利用巨噬細(xì)胞遞送載有DOX的金納米棒-白蛋白核殼納米顆粒（NR@DOX:SA）用于腫瘤的光熱治療。負(fù)載納米藥物的巨噬細(xì)胞利用腫瘤募集作用將納米藥物運(yùn)送到腫瘤組織，從而實(shí)現(xiàn)了高效的藥物特異性遞送與可控釋放。與游離納米藥物相比，巨噬細(xì)胞遞送有效地提高了藥物分布的均勻性和腫瘤滯留能力，改善了腫瘤光熱治療的效果。此外，巨噬細(xì)胞攜帶納米藥物還具有跨越生理屏障的優(yōu)勢(shì)，在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中，向腫瘤細(xì)胞輸送治療藥物的一個(gè)主要障礙是血腦屏障。Pall等[39]利用巨噬細(xì)胞運(yùn)送金納米顆粒穿過(guò)該屏障，加速了GBM細(xì)胞的死亡，增強(qiáng)了腫瘤治療效果。

圖2 利用巨噬細(xì)胞負(fù)載的DOX/PEGBPEI-rGO納米藥物進(jìn)行靶向腫瘤的藥物遞送及可控釋放示意圖 [37]Figure 2 Schematic illustration of tumortargeted drug delivery and controlled release of DOX/PEG-BPEI-rGO nanomedicine by macrophages[37]

3.3 靶向TAMs成像

盡管我國(guó)在癌癥治療領(lǐng)域取得了重大進(jìn)展，但仍有眾多患者在確診時(shí)已處于中晚期，且伴有轉(zhuǎn)移率高、侵襲性強(qiáng)、死亡率高等臨床特點(diǎn)。因此，開(kāi)發(fā)新的診斷方式對(duì)提高臨床治療效果十分重要。目前，納米顆粒已廣泛應(yīng)用于腫瘤成像當(dāng)中，在磁共振成像（MRI）、正電子發(fā)射斷層掃描（PET)等診斷方法中均發(fā)揮了重要作用[40]。由于巨噬細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境中的高水平浸潤(rùn)及其在腫瘤發(fā)展進(jìn)程中的重要作用，且TAMs免疫反應(yīng)可影響抗癌納米藥物的體內(nèi)遞送效果，越來(lái)越多的研究人員開(kāi)始利用納米成像技術(shù)精準(zhǔn)靶向TAMs、追蹤TAMs動(dòng)態(tài)變化[41]。

TAMs的群體數(shù)量可以影響癌癥治療效果，特別是在納米藥物的腫瘤免疫治療方面。臨床前與臨床數(shù)據(jù)均表明，TAMs密度的定量測(cè)量有助于了解腫瘤免疫環(huán)境和預(yù)測(cè)治療效果，但量化TAMs數(shù)量及分析其體內(nèi)分布十分困難。許多納米藥物雖被用于TAMs的成像當(dāng)中，但大多數(shù)存在靶向性不足或難以滲透腫瘤深部的問(wèn)題。Kim等[42]開(kāi)發(fā)了一種銅標(biāo)記的多聚葡萄糖納米顆粒（Macrin），該納米顆粒可用于TAMs的正電子發(fā)射斷層掃描定量成像。其中，交聯(lián)葡聚糖及其衍生物組成的聚葡萄糖納米藥物對(duì)巨噬細(xì)胞具有顯著的親和力，能夠解決藥物靶向性差的問(wèn)題。故Macrin具有良好的生物降解性和安全性，并且能最大限度地積聚在TAMs中，因此，Macrin成像能夠更為精準(zhǔn)地量化TAMs，并為治療決策提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。吲哚菁綠(ICG)是一種臨床批準(zhǔn)的近紅外熒光成像劑，同時(shí)也是一種良好的光熱劑。然而，由于ICG存在水溶條件與光照條件下穩(wěn)定性差、體內(nèi)滯留時(shí)間短、缺乏腫瘤特異性等缺點(diǎn)，使其在腫瘤診療應(yīng)用中受到影響。Wan等[43]利用藻藍(lán)蛋白（CPC）負(fù)載ICG，構(gòu)建了CPC-ICG的非共價(jià)偶聯(lián)物(ICG@CPC）。CPC不僅具有生物安全性好、水溶性強(qiáng)、發(fā)光強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，而且可通過(guò)清道夫受體A（SR-A）介導(dǎo)的內(nèi)吞作用與TAMs特異性結(jié)合，靶向腫瘤部位。與游離ICG相比，ICG@CPC具有更高的光穩(wěn)定性和暗穩(wěn)定性、特異的腫瘤靶向性，同時(shí)將光熱轉(zhuǎn)換效率提高了3倍，見(jiàn)圖3[43-44]。這些結(jié)果表明，ICG@CPC作為用于腫瘤精確診斷和治療的納米光敏劑具有廣闊的應(yīng)用前景。

腫瘤微環(huán)境中TAMs的評(píng)估對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的診斷及患者的預(yù)后判斷十分重要。Karimian-Jazi等[45]以一種雙峰熒光標(biāo)記的氧化鐵納米顆粒，通過(guò)MRI和多光子顯微鏡（MR-MPM)將小鼠膠質(zhì)母細(xì)胞瘤微環(huán)境中天然免疫細(xì)胞的動(dòng)力學(xué)可視化，分析了巨噬細(xì)胞攝取納米藥物的過(guò)程。該方法實(shí)現(xiàn)了在同一動(dòng)物中通過(guò)MRI和MR-MPM追蹤免疫細(xì)胞，為研究腫瘤微環(huán)境中的免疫細(xì)胞動(dòng)態(tài)、干預(yù)腫瘤的免疫治療提供了支持。納米二氧化硅（SNPs）具有良好的生物相容性和生物降解性，但由于SNPs缺乏熒光光譜，因此，在作為可降解成像劑的應(yīng)用方面受到限制。Yoo等[46]利用正硅酸乙酯和3-氨基丙基三甲氧基硅烷通過(guò)人工產(chǎn)生光學(xué)活性缺陷中心來(lái)水熱合成熒光SNPs，使二氧化硅成功地用作癌細(xì)胞與TAMs的熒光探針，為腫瘤的診斷提供了新策略。綜上可知，使用納米藥物靶向TAMs的腫瘤成像技術(shù)有助于了解腫瘤免疫環(huán)境和預(yù)測(cè)治療結(jié)果，為腫瘤的診斷和治療開(kāi)辟了新途徑。

3.4 阻止TAMs腫瘤內(nèi)募集

腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)與腫瘤的發(fā)展密切相關(guān)。但目前TAMs募集的機(jī)制尚不明確[47]。Fernández等[48]以氧化鈰納米顆粒（CeO2NPs）處理肝癌模型小鼠，研究了CeO2NPs對(duì)腫瘤進(jìn)展和動(dòng)物存活的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，氧化鈰納米顆粒積聚于肝臟，通過(guò)減少巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)和抑制炎性反應(yīng)相關(guān)基因的表達(dá)，抑制了腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)并提高了肝癌模型小鼠的生存率，證明了巨噬細(xì)胞數(shù)量與小鼠生存率成負(fù)相關(guān)。

圖3 ICG@CPC靶向TAMs的多模成像及光熱效應(yīng)示意圖[43]Figure 3 Schematic illustration of TAMs-targeted multimodal imaging and photothermal effect of ICG@CPC[43]

此外，趨化因子CSF-1、VEGF參與了巨噬細(xì)胞募集，其中趨化因子CCL2是將這些免疫細(xì)胞募集到腫瘤和其他組織中的關(guān)鍵介質(zhì)[49]。通過(guò)干擾關(guān)鍵信號(hào)通路（如CCL2-CCR2）阻斷單核細(xì)胞向腫瘤組織的募集是改善腫瘤微環(huán)境與治療腫瘤的有效途徑。Shen等[50]制備了siRNA包被的納米粒子（CNP/siCCR2），發(fā)現(xiàn)CNP/siCCR2能夠更有效地抑制單核細(xì)胞CCR2的表達(dá)。更重要的是，通過(guò)阻斷單核細(xì)胞向腫瘤組織的募集，CNP/siCCR2可以改變腫瘤免疫微環(huán)境，抑制原發(fā)性腫瘤的生長(zhǎng)，減少腫瘤轉(zhuǎn)移，顯示出了有效的抗腫瘤作用。

4 結(jié)語(yǔ)與展望

盡管腫瘤微環(huán)境中存在多種免疫細(xì)胞，但TAMs的獨(dú)特功能使其成為了近年來(lái)腫瘤免疫治療的研究熱點(diǎn)。TAMs在腫瘤生長(zhǎng)中具有雙重性功能，主要分為促瘤的M2型和抑瘤的M1型兩種亞型，M2型主要參與腫瘤血管生成、調(diào)控腫瘤轉(zhuǎn)移，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展，同時(shí)M2型可以被誘導(dǎo)重極化為M1型。因此，靶向TAMs的治療策略有望成為腫瘤免疫治療的重要手段。面對(duì)復(fù)雜的腫瘤免疫微環(huán)境，納米載藥體系在腫瘤免疫治療領(lǐng)域中展示出了巨大的研究?jī)?yōu)勢(shì)。眾多納米載藥體系可根據(jù)需要改變尺寸大小或修飾靶向基團(tuán)獲得不同的理化性質(zhì)，進(jìn)而更加快速地滲透屏障并精準(zhǔn)靶向TAMs，發(fā)揮更高效的抗癌效果。此外，納米載藥體系還可解決雙藥或多藥共輸送的問(wèn)題，有助于加強(qiáng)藥物間的協(xié)同治療作用。

目前，納米載藥體系靶向TAMs治療雖在動(dòng)物水平上取得了較好的效果，但由于巨噬細(xì)胞表型及功能的多樣性，使得不同表型的巨噬細(xì)胞對(duì)藥物所產(chǎn)生的免疫應(yīng)答存在差異性，容易導(dǎo)致抗癌效果的不穩(wěn)定性。另外，部分無(wú)機(jī)納米顆粒在應(yīng)用中仍存在生物不相容性和安全性等問(wèn)題，而以生物來(lái)源的納米顆粒作為載藥體系有望解決如上問(wèn)題。因此，實(shí)現(xiàn)納米藥物的精準(zhǔn)靶向性與改善生物相容性將為今后納米載藥體系的開(kāi)發(fā)提供更為高效、安全的策略。同時(shí)，還需對(duì)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的極化機(jī)制進(jìn)行更深入的研究，以開(kāi)發(fā)出更穩(wěn)定、安全、高效的腫瘤免疫診療新模式。