趙亞麗

(甘肅省臨洮縣畜牧獸醫(yī)服務(wù)中心衙下畜牧獸醫(yī)站，甘肅 臨洮 730503)

牛結(jié)核病是由牛分枝桿菌引起的一種人畜共患病，該病在世界各地廣泛流行，我國(guó)養(yǎng)牛業(yè)也深受其害。為有效提高牛結(jié)核病的普查效果，提升檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確率。本文就牛結(jié)核病目前最重要的兩種檢測(cè)方法進(jìn)行了研究比較，為牛業(yè)養(yǎng)殖提供了有效參考數(shù)據(jù)，以期能為廣大養(yǎng)殖同行提供參考。

1 試驗(yàn)材料

1.1 試驗(yàn)設(shè)備及材料

試驗(yàn)動(dòng)物：試驗(yàn)所用檢測(cè)樣品來自甘肅地區(qū)的規(guī)模場(chǎng)及散養(yǎng)戶牛群，抽樣方法采取隨機(jī)抽樣。

試驗(yàn)材料：牛結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)所用試劑及材料為牛分枝桿菌提純結(jié)核菌素(PPD)，采購(gòu)自哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司；皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)比較試驗(yàn)(SICTT)，牛型PPD和禽型PPD，由荷蘭Prionics公司提供。

2 試驗(yàn)方法

2.1 牛結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)(PPD)

2.1.1 術(shù)前準(zhǔn)備 對(duì)待檢測(cè)牛只肩胛部進(jìn)行剪毛處理，剪毛面積以直徑約為10 cm。

2.1.2 注射步驟 75%的酒精消毒牛肩胛部剪毛區(qū)域，用電子游標(biāo)卡尺測(cè)量出剃毛處的皮膚厚度，做好數(shù)據(jù)記錄。

2.1.3 注射用量 用注射器在剪毛區(qū)域內(nèi)采用皮內(nèi)注射的方式注射結(jié)核菌素0.1 mL。

2.1.4 結(jié)果判定 注射后72 h，再次測(cè)量皮膚厚度，作好數(shù)據(jù)記錄，并計(jì)算2次測(cè)量的皮膚厚度差值，根據(jù)皮膚厚度增加值進(jìn)行判定。(1)陽(yáng)性反應(yīng)：皮膚厚度差≥4.0 mm。(2)疑似陽(yáng)性：皮膚厚度差≥2.0 mm，但<4.0 mm。(3)陰性反應(yīng)：皮膚厚度差在≤2.0 mm。

2.2 皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)比較試驗(yàn)(SICTT)

2.2.1 術(shù)前準(zhǔn)備 將待檢測(cè)牛只在頸側(cè)中部上1/3處剪毛，并且選兩處間并間隔10～15 cm范圍內(nèi)為宜。

2.2.2 注射步驟 用75%酒精在牛只兩處剪毛區(qū)域進(jìn)行消毒后，分別用注射器向皮內(nèi)注射定量的牛結(jié)核菌素和禽結(jié)核菌素，標(biāo)記注射位置。使用電子游標(biāo)卡尺分別測(cè)量出剪毛處的皮膚厚度，作好數(shù)據(jù)記錄。

2.2.3 注射用量 皮內(nèi)分別注射牛結(jié)核菌素0.1 mL和禽結(jié)核菌素0.1 mL。

2.2.4 結(jié)果判定 注射結(jié)核菌素72 h后，觀察牛只兩處注射部位的炎性反應(yīng)，再次使用電子游標(biāo)卡尺測(cè)量皮膚厚度[1]，根據(jù)皮膚厚度增加值進(jìn)行判定。

牛型PPD 2次的皮膚測(cè)量厚度差，減去禽型PPD 2次的皮膚測(cè)量厚度差，大于4 mm，判定為陽(yáng)性；大于1 mm小于4 mm，判定為可疑；牛型PPD 2次的皮膚測(cè)量厚度差，小于禽型PPD 2次皮膚厚度差，判定為陰性。

3 結(jié)果與分析

3.1 2018年P(guān)PD與SICTT試驗(yàn)比較結(jié)果

對(duì)被牛結(jié)核病污染的規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)，進(jìn)行隨機(jī)抽樣檢測(cè)569頭。分別按照PPD和SICTT方法進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果見表1。由表1結(jié)果可以看出，可知，經(jīng)PPD檢測(cè)結(jié)果檢出呈陽(yáng)性數(shù)量為6頭，陽(yáng)性檢出率為1.026%，經(jīng)SICTT檢測(cè)結(jié)果檢出呈陽(yáng)性數(shù)量為4頭，陽(yáng)性檢出率為0.703%。如果以SICTT結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，檢出的6頭陽(yáng)性中，敏感率為100%；579頭陰性中，PPD檢出陰性578頭，特異率為99.83%。

表1 PPD與SICTT比較結(jié)果

3.2 2019年P(guān)PD與SICTT試驗(yàn)比較結(jié)果

對(duì)被牛結(jié)核病污染的規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)，進(jìn)行隨機(jī)抽樣檢測(cè)313頭。分別按照PPD和SICTT方法進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果見表2。由表2結(jié)果可以看出，可知，經(jīng)PPD檢測(cè)結(jié)果檢出呈陽(yáng)性數(shù)量為2頭，陽(yáng)性檢出率為0.639%，經(jīng)SICTT檢測(cè)結(jié)果檢出呈陽(yáng)性數(shù)量為1頭，陽(yáng)性檢出率為0.319%。如果以SICTT結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，檢出的1頭陽(yáng)性中，敏感率為100%；312頭陰性中，PPD檢出陰性311頭，特異率為99.68%。

表2 PPD與SICTT比較結(jié)果

4 討 論

2018—2019年，通過這2年在甘肅各地州開展牛結(jié)核病隨機(jī)抽樣監(jiān)測(cè)，同時(shí)有針對(duì)性的對(duì)相關(guān)群體采用國(guó)標(biāo)皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)(PPD)與皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)比較試驗(yàn)(SICTT)，發(fā)現(xiàn)目前牛結(jié)核病多為散發(fā)性流行，流行率總體可以控制。

PPD檢測(cè)法是國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)也被國(guó)際貿(mào)易方指定的檢測(cè)方法之一。但此種方法存在的誤差較大，在大規(guī)模檢測(cè)中，容易出現(xiàn)陽(yáng)性漏檢情況。在實(shí)際檢測(cè)工作中，PPD存在一定的非特異性，受外界環(huán)境及人為因素的影響較為明顯[2]。例如在測(cè)量注射部位的皮膚厚度時(shí)，游標(biāo)卡尺等測(cè)量?jī)x器需要經(jīng)常核校，認(rèn)為有必要時(shí)還應(yīng)多次測(cè)量，陰性結(jié)果，個(gè)別變態(tài)反應(yīng)呈擴(kuò)散狀，表面雖不明顯，但實(shí)際皮膚有增厚反應(yīng)，必須借助游標(biāo)卡尺測(cè)量后再判定。

SICTT檢測(cè)法在歐盟、美國(guó)等國(guó)外一些發(fā)達(dá)國(guó)家已得到廣泛的運(yùn)用。我國(guó)從2013年開始，由國(guó)家農(nóng)業(yè)部門印發(fā)的《國(guó)家動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)與流行病學(xué)調(diào)查計(jì)劃》規(guī)定，對(duì)PPD檢測(cè)呈陽(yáng)性動(dòng)物，要引用γ-干擾素試驗(yàn)或SICTT試驗(yàn)進(jìn)行確診。通過對(duì)PPD和SICTT檢測(cè)結(jié)果對(duì)比時(shí)發(fā)現(xiàn)，比較變態(tài)反應(yīng)可以把一部分禽結(jié)核為陽(yáng)性的牛只排除，在沒有降低敏感性的前提下，還提高了試驗(yàn)的特異性，結(jié)果也非常精確，但該檢測(cè)方法陽(yáng)性檢出率相對(duì)較低，不適于牛結(jié)核病污染場(chǎng)的初期凈化。