李富寬，楊 燕，王 慧，呂慎金*，魏萬紅

(1.揚州大學(xué)生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，揚州 225009； 2.臨沂大學(xué)農(nóng)林科學(xué)學(xué)院，臨沂 276000；3.臨沂市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，臨沂 276012)

剪毛是綿羊日常管理中的一項重要措施，不僅可以獲得羊毛、有效降低皮外寄生蟲病，同時還可以有效提高綿羊?qū)Νh(huán)境的適應(yīng)能力并改善其福利水平[1]。但由于在剪毛過程中常伴隨著捕捉、隔離、捆綁及剪毛等一系列引起羊只強烈不適的操作，以及與人接觸的恐懼感和經(jīng)常由剪毛引起的皮膚傷害，使剪毛成為一種強烈的應(yīng)激并引起一些行為及生理的改變[2-3]。但相對于隔離和噪音等其他管理措施而言，剪毛是一種短期的強烈應(yīng)激[4-6]。Pierzchala等[7]將剪毛應(yīng)激分為將羊只趕至剪毛地點、剪毛、剪毛后環(huán)境應(yīng)激3個部分，其中剪毛是最主要的應(yīng)激源。剪毛也是提高動物福利一項重要措施[5,8]，對小尾寒羊來說，在氣溫較高的春末夏初和秋末冬初的兩次剪毛可以提高綿羊的舒適性，以更好的適應(yīng)環(huán)境、增加采食量、提高日糧利用效率和機體脂肪存儲進而提高其生產(chǎn)性能。

Romero等[9]和Boonstra[10]指出應(yīng)激反應(yīng)包括從行為～生理的一系列反應(yīng)，其中動物行為變化最為明顯[11]，進而是心率、脈搏、體溫及相關(guān)激素的變化[12]。動物機體在應(yīng)激反應(yīng)過程中會動用多種激素，如促腎上腺激素、糖皮質(zhì)激素、泌乳素、兒茶酚胺等[13-14]。應(yīng)激反應(yīng)主要通過交感神經(jīng)系統(tǒng)和下丘腦-腦下垂體-腎上腺軸分泌兒茶酚胺和糖皮質(zhì)激素來進行調(diào)控[15]。其中腎上腺既包含在下丘腦-垂體-腎上腺軸也包含在交感-腎上腺髓質(zhì)系統(tǒng)中，因而在應(yīng)激應(yīng)答中發(fā)揮重要作用[13]。而腎上腺反應(yīng)會進一步引發(fā)糖皮質(zhì)激素及兒茶酚胺分泌的增多[16]。這些激素會誘發(fā)動物警覺，并給予其對環(huán)境應(yīng)激做出反應(yīng)及維持體內(nèi)平衡的能力，同時，應(yīng)激條件下機體會動用更多能量供應(yīng)給腦和肌肉，以引發(fā)更為有效應(yīng)對應(yīng)激的行為效應(yīng)。

小尾寒羊是中國重要的肉毛兼用型的優(yōu)良地方品種，因其耐粗飼、生長快，多羔、常年發(fā)情、群居性好而大量養(yǎng)殖。目前，關(guān)于剪毛對小尾寒羊行為和生理影響方面的研究鮮見報道，因此，開展剪毛對小尾寒羊行為和生理等方面影響的研究，對于減少小尾寒羊應(yīng)激，改善動物福利，提高小尾寒羊生產(chǎn)性能具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 試驗動物及處理

選擇體況相近的8～10月齡青年健康公羊9只、母羊13只進行剪毛，剪毛地點為臨沂白沙埠小尾寒羊養(yǎng)殖場，剪毛時間設(shè)定為粗毛羊的普遍剪毛期2015年9月1日-10日。用線繩將前后肢分別捆綁后前后拉伸側(cè)臥固定，用普通剪毛剪進行剪毛，剪毛時段為每天上午9:00-12:00，剪毛持續(xù)時間為每只30～40 min。剪毛綿羊與其他綿羊均正常飼喂混合日糧(苜蓿草粉70%，玉米30%)，每天飼喂2次，每次按1.5 kg·只-1飼喂，飼喂時間分別為上午7：00和下午17:00，自由采食和飲水。

1.2 行為觀察及數(shù)據(jù)收集

剪毛過程行為數(shù)據(jù)采集：用錄像將整個剪毛過程錄下，帶回實驗室用Observe XT觀測系統(tǒng)進行觀察分析。觀察方法：目標(biāo)動物取樣法。記錄采用所有事件記錄方法。觀察行為譜(表1)。

剪毛前后行為數(shù)據(jù)采集：用錄像機將剪毛前1 d(記做-1)及剪毛后第1(記做1)、4(記做4)、7(記做7)天的行為進行錄像并拷貝存儲，帶回實驗室進行觀察分析。以掃描取樣法收集每天9:00-12:00(與剪毛相同時段)的行為，掃描間隔為5 min。觀察行為譜(表2)。

表1剪毛過程小尾寒羊行為譜

Table1BehaviorethogramofSmall-tailHansheepduringshearing

行為類型Behavioral pattern行為界定Behavior definition抬頭Rising頭部離開地面距離大于5 cm眨眼Blinking小尾寒羊上下眼瞼進行快速閉合與張開鳴叫Bleating小尾寒羊從口腔發(fā)出聲音搖耳Ear shaking耳朵自根部起發(fā)生擺動擺尾Tail wagging小尾寒羊尾根搖動或舉起豎立的表現(xiàn)排糞尿Excreting糞便和尿液排出體外

表2剪毛前后小尾寒羊行為譜

Table2BehaviorethogramofSmall-tailHansheepbeforeandaftershearing

行為類型Behavioral pattern 行為界定Behavior definition反芻Ruminating綿羊在非睡眠的側(cè)臥時,頭部高于背中線,對食物進行逆嘔、咀嚼、再吞咽等過程臥息Lying左側(cè)臥或右側(cè)臥非反芻時的休息、淺睡和睡眠。臥下時,前肢先跪下,后肢下蹲,接著腹部著地,最后臀部觸地采食Foraging頭部在食槽上方,上下唇協(xié)同動作,對青草、飼料等食物進行切割、咀嚼、濕潤、吞咽的過程,該動作須持續(xù)5 s以上飲水Drinking頭部在水槽上方,具有飲水的動作靜立Standing綿羊長時間站立不動、沒有表現(xiàn)出任何目的性移動Walking綿羊在圈舍內(nèi)自由移動其他Others以上行為除外的其他行為

1.3 生理指標(biāo)測定

分別于剪毛前1天(-1)及剪毛后第1(1)、4(4)、7(7)天上午10：00-11：00利用普通體溫計和聽診器測定剪毛綿羊的直腸體溫(RT)、心率(HR)和呼吸頻率(RF)。

1.4 血液指標(biāo)測定

分別于剪毛前5 min，剪毛開始后10 min、剪毛結(jié)束時和剪毛后10 min用肝素鈉抗凝管頸靜脈采血5 mL，冰盒保存帶回實驗室，3 000 r·min-1離心5 min后,取上清液，-20 ℃冷凍保存。

利用比濁法測定血漿中的鉀(K+)、鈉(Na+)水平，利用絡(luò)-合指示劑法測定血漿中的鎂(Mg2+)水平，利用ELISA法測定血漿中的β-內(nèi)啡肽(β-EP)、促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)、催乳素(PRL)、兒茶酚胺(CA)、三碘甲狀腺原氨酸(T3)、四碘甲狀腺原氨酸(T4)、抗利尿激素(ADH)、皮質(zhì)醇(CORT)、促生長素(GH)、血糖(GLU)含量。

1.5 數(shù)據(jù)分析

利用Excel對所得數(shù)據(jù)進行整理，然后利用SPSS 17.0對觀察數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。利用單因素方差分析(one-way ANOVA)比較分析不同時段內(nèi)各測定指標(biāo)的變化，利用非獨立t檢驗分析相同時段內(nèi)各指標(biāo)的性別差異。數(shù)據(jù)用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。P<0.05表示差異顯著，用P<0.01表示差異極顯著。

2 結(jié) 果

2.1 剪毛過程及剪毛前后小尾寒羊的行為變化

由表3可知，在剪毛過程中，母羊的眨眼和鳴叫頻率分別極顯著(P=0.006)和顯著(P=0.022)高于公羊，而抬頭、搖耳、擺尾及排糞尿頻率與公羊相比均差異不顯著(P>0.05)。

剪毛前后的行為變化如表4所示，公、母羊在剪毛后的臥息頻率顯著低于剪毛前(P<0.05)，且無性別差異(P>0.05)。剪毛后公羊的靜立頻率與剪毛前相比也顯著降低(P<0.05)，但母羊剪毛前后靜立頻率無顯著差異。剪毛后，公、母羊的反芻頻率、母羊的飲水頻率顯著高于剪毛前(P<0.05)，公、母羊的采食頻率剪毛后顯著或極顯著高于剪毛前(P<0.05或P<0.01)；剪毛前母羊的反芻頻率極顯著高于公羊(P=0.003)。剪毛前公羊的采食頻率多于母羊，而剪毛后母羊采食頻率多于公羊。移動頻率在剪毛前公羊顯著高于母羊(P=0.036<0.05)，在剪毛后公母羊移動增多，但都未達到顯著差異水平(P>0.05)，而且公、母羊之間存在差異，公羊移動頻率多于母羊。

表3剪毛過程中的小尾寒羊行為變化

Table 3 Changes of Small-tail Han sheep’s behavior during shearing次·min-1

P值為公母羊比較后的t檢驗值。下同

P-value indicates thet-value of comparison of the different sex in each column. The same as below

表4剪毛前后綿羊行為變化

Table 4 Changes of Small-tail Han sheep’s behavior before and after shearing次·min-1

(轉(zhuǎn)下頁 Carried forward)

-1表示剪毛前一天；1、4、7表示剪毛之后第1、4和7天。每列數(shù)據(jù)后上標(biāo)不同小寫和大寫字母分別表示同性別數(shù)據(jù)相比較差異顯著(P<0.05)和極顯著(P<0.01)。下同

-1 indicates the first day before shearing; 1， 4, 7. The 1st, 4thand 7thday after shearing; The lower case and upper case letters after each column of data respectively represent significant differences (P<0.05) and extremely significant differences (P<0.01) compared with the same column of data under the same sex. The same as below

2.2 剪毛前后小尾寒羊的生理變化

剪毛前后綿羊生理變化如表5所示。公、母羊直腸體溫(RT)在剪毛后均低于剪毛前，且母羊在剪毛后第7天的直腸體溫顯著低于剪毛前(P<0.05)；剪毛對綿羊心率(HR)沒有明顯影響(P>0.05)；公母羊剪毛后呼吸頻率(RF)均顯著降低(P<0.05)，且呼吸頻率存在性別差異，除剪毛后第4天外，其余時間均是母羊顯著高于公羊(P<0.05)。

表5剪毛前后綿羊生理變化

Table5ChangesofSmall-tailHansheep’sphysiologybeforeandaftershearing

時間/d Time直腸體溫/℃ RT心率/(次·min-1)HR呼吸頻率/(次·min-1)RF公Ram母EweP-值P-value公Ram母EweP-值P-value公Ram母EweP-值P-value-138.94±0.09a39.12±0.11a0.25 67.56±1.45a71.46±1.28a0.60 35.22±1.27a38.31±0.66a0.03 138.71±0.11a38.83±0.10ab0.43 68.00±1.48a70.46±1.32a0.24 32.11±1.23ab35.77±0.71b0.01 438.78±0.12a38.85±0.11ab0.65 68.56±1.26a69.77±1.23a0.51 33.89±1.62ab36.31±1.02ab0.20 738.74±0.10a38.77±0.10b0.87 66.00±1.81a69.38±1.31a0.14 31.89±1.26b35.15±0.77b0.03

2.3 剪毛過程小尾寒羊的血液離子及代謝物的變化

如表6所示，無論公母羊，隨著剪毛的進行血液中K+含量均表現(xiàn)降低(P>0.05)，但Mg2+變化不明顯；母羊的血液Na+隨剪毛進程先升高后降低，但公羊的沒變化。性別間血液Na+存在差異，在剪毛結(jié)束時母羊血液Na+極顯著高于公羊(P=0.008)。

無論性別，ACTH水平均隨剪毛進程表現(xiàn)先升高后降低的趨勢，而且對母羊來說ACTH在剪毛開始10 min還顯著高于剪毛結(jié)束時及結(jié)束后10 min(P<0.05)；對于GH，公羊的血液水平隨著剪毛進程持續(xù)降低，而母羊則隨著剪毛進程先升高后降低，并且在剪毛開始10 min時還顯著高于其他時段(P<0.05)；對于β-EP、CORT和GLU，無論公母羊，其血液水平均隨著剪毛進程表現(xiàn)先升高后降低的趨勢，但變化差異不顯著(P>0.05)；對于T3、T4和PRL在剪毛過程中也無明顯變化(P>0.05)。血液代謝物水平也存在性別差異。在剪毛結(jié)束時，公羊的血液ACTH、CA和T4則顯著或極顯著高于母羊(P=0.050、0.004和0.029)；在剪毛結(jié)束后10 min，公羊的血液ACTH和T3則顯著高于母羊(P=0.037和0.031)。

3 討 論

3.1 剪毛對小尾寒羊行為的影響

Hargreaves等[4]和Boonstra[10]指出，剪毛是一種短期強烈應(yīng)激，會首先引起動物行為方面的系列反應(yīng)。但公母羊?qū)裘珣?yīng)激的反應(yīng)不同，從試驗結(jié)果可以看出，在整個剪毛過程中，母羊的抬頭、眨眼、鳴叫、搖耳、擺尾及排糞尿的行為頻率都要多于公羊，其中眨眼和鳴叫行為分別為極顯著和顯著高于公羊，這可能是由于剪毛對母羊的應(yīng)激更大所致。

剪毛前后行為發(fā)生明顯變化。與剪毛前相比，剪毛后公母羊的移動、反芻、飲水和采食行為增加，而臥息和靜立行為減少。綿羊?qū)儆跁冃行詣游?，在白天具有較高的移動是反芻動物福利行為的一個體現(xiàn)[17]，而反芻則是綿羊作為反芻動物的一種本能行為和特有行為，因此，移動和反芻行為的增多表明小尾寒羊處于一種舒適自然的狀態(tài)，說明剪毛改善了綿羊的福利。而采食和飲水行為的增加有助于綿羊的生長。同時，母羊在剪毛后的反芻和采食行為均多于公羊，這應(yīng)該與剪毛更加有利于提高母羊的適應(yīng)性及與所剪毛母羊帶羔需要更多食物攝入有關(guān)。

3.2 剪毛對小尾寒羊生理的影響

Carere等[12]研究表明，剪毛可顯著影響小尾寒羊的生理。剪毛后母羊會出現(xiàn)體溫下降、呼吸頻率降低和心率升高[8，18]。本試驗也表明，無論公、母羊，剪毛后小尾寒羊的直腸體溫和呼吸頻率都表現(xiàn)降低，除公羊RT降低不顯著外，其他均顯著降低(P<0.05)。這是由于本試驗期在9月初，氣溫還相對較高，呼吸是小尾寒羊體熱散失的一個有效途徑，而被毛卻是其體熱散失的一道屏障。但剪毛對心率影響不大，這可能與環(huán)境溫度未達熱應(yīng)激程度有關(guān)。

3.3 剪毛對小尾寒羊血液離子及代謝物的影響

剪毛應(yīng)激屬于短期強應(yīng)激，而應(yīng)激反應(yīng)主要通過交感神經(jīng)系統(tǒng)和下丘腦-腦下垂體-腎上腺軸(HPA軸)分泌CA和Cortisol來進行調(diào)控[14-15]。其中腎上腺既包含在HPA軸也包含在交感-腎上腺髓質(zhì)系統(tǒng)中，因而在應(yīng)激應(yīng)答中發(fā)揮重要作用[13]。一般應(yīng)激反應(yīng)會引發(fā)CORT及CA分泌的增多[8]，而CORT和CA的升高又會誘發(fā)血液Na+升高和K+降低，以維持體內(nèi)離子平衡[19]。本試驗中也發(fā)現(xiàn)剪毛引發(fā)了公母羊Cortisol和CA的類似變化，但變化不明顯。至于剪毛應(yīng)激如何影響血液Mg2+則報道較少[20]，本試驗也沒有發(fā)現(xiàn)剪毛對血液Mg2+的影響。Moberg等[13]研究表明應(yīng)激反應(yīng)會引起ACTH和PRL的分泌增加。本研究結(jié)果也呈現(xiàn)了類似趨勢，但增加未達顯著水平。血液CORT、CA、ACTH、PRL和Na+、K+含量在剪毛應(yīng)激下的變化趨勢雖與其他試驗結(jié)果相似，但均未達差異顯著性水平，這可能與應(yīng)激原(如爭斗行為)及應(yīng)激時的環(huán)境(如高溫)不同有關(guān)[13]。邊疆暉等[21]指出β-內(nèi)啡肽也會參與HPA軸負(fù)反饋的調(diào)節(jié)。本研究結(jié)果表明，剪毛應(yīng)激會影響β-內(nèi)啡肽的分泌，隨剪毛進程的進行，無論公羊還是母羊血液β-內(nèi)啡肽水平均表現(xiàn)出先高后低的趨勢，這也與Hashizume等[22]試驗結(jié)果相一致。

生長激素(GH)也是參與應(yīng)激反應(yīng)的重要激素，但其濃度變化因動物種類和心理狀態(tài)不同而異[23]，對人[24]、豬[25]和猴[26]而言，應(yīng)激會導(dǎo)致血液GH升高，而對嚙齒類動物卻出現(xiàn)降低[27]。Lovinger等[28]及Cronin等[29]研究發(fā)現(xiàn)，處于外科手術(shù)應(yīng)激下的狗和處于暗室受到限制應(yīng)激下的綿羊均未表現(xiàn)出GH的變化。但就急性應(yīng)激來說，對血液GH究竟會有怎樣的影響并無定論。在本試驗中，剪毛對公羊GH影響不大，但明顯改變了母羊的GH水平，隨著剪毛的進行，母羊的GH先是顯著升高然后又恢復(fù)到原來水平。

應(yīng)激條件下，機體會動用更多能量供應(yīng)給腦和肌肉，以引發(fā)更為有效應(yīng)對應(yīng)激的行為效應(yīng)。因此，應(yīng)激反應(yīng)往往會引起血糖的升高[30]，而血糖的變化受到肝糖分解誘導(dǎo)的CA和胰高血糖素變化的影響，其中肝糖分解往往又伴隨著甲狀腺激素的變化[7]。T3是主要的甲狀腺激素并且可以直接產(chǎn)熱供能[31]。本試驗結(jié)果表明，剪毛應(yīng)激引發(fā)了血糖和甲狀腺激素的變化，隨剪毛的進行，公母羊血糖水平均出現(xiàn)先高后低的趨勢，而對T3，只有公羊出現(xiàn)了先高后低的水平變化，母羊的T3和公母羊的T4均未表現(xiàn)出變化。這種未達顯著水平的血糖變化可能也是受到綿羊情緒的影響[32-33]，但這種變化趨勢也可以反映剪毛條件下的小尾寒羊的應(yīng)激進程。

血液離子及代謝物水平存在性別差異。公羊ACTH和CA含量高于母羊。血液Na+、T3和T4含量在剪毛前公母羊含量基本相近，而在剪毛過程中母羊血液Na+水平高于公羊，T3和T4卻顯著低于公羊，這可能由于剪毛對母羊所引起的應(yīng)激更大所致。

4 結(jié) 論

剪毛對小尾寒羊產(chǎn)生了短期強烈應(yīng)激，并導(dǎo)致其行為和生理的變化。剪毛過程中，公、母羊均表現(xiàn)明顯的眨眼、擺尾、抬頭等行為，其生理指標(biāo)、血液離子和血液代謝物也隨著剪毛過程發(fā)生變化，并且這種變化存在性別差異。相比較而言，公羊的應(yīng)激耐受性要強于母羊。剪毛也顯著改善了小尾寒羊的福利水平，剪毛后小尾寒羊采食、飲水、反芻和移動增加，靜立行為減少，同時直腸體溫和呼吸頻率降低等，說明剪毛提高了小尾寒羊在高溫環(huán)境下的適應(yīng)能力。