羅娟,閆再宏,郭文有

非酒精性脂肪肝疾病(nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)是一種代謝應(yīng)激性肝損傷，與胰島素抵抗(IR)和遺傳易感性密切相關(guān)，其病理變化與酒精性肝病相似，但該病患者無過度飲酒史的臨床病理綜合癥[1]。NAFLD患者罹患肝硬化、肝癌和其他相關(guān)并發(fā)癥風(fēng)險增加[2]。非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis，NASH)是NAFLD進展的關(guān)鍵階段，NASH的持續(xù)存在可能誘發(fā)肝癌的發(fā)生[3]。研究發(fā)現(xiàn)，多種細胞因子參與了NAFLD的病理生理過程，并在NAFLD的發(fā)展中發(fā)揮了關(guān)鍵作用，包括白介素-1β(IL-1β)和白介素-18(IL-18)以及白介素-1受體拮抗劑(IL-1RA)[4]。肝臟是人體重要的免疫器官，在人體的免疫中發(fā)揮重要作用，T細胞是細胞免疫反應(yīng)的效應(yīng)細胞，其CD4+T細胞和CD8+T細胞亞群的數(shù)量和功能異?？赡芘c慢性肝病進展的密切相關(guān)[5]。IL-1RA作為體內(nèi)唯一一種天然拮抗劑，具有抗炎作用，能夠減輕IL-1和IL-18引起的一系列生理和病理反應(yīng)，但與NAFLD炎癥程度及病程進展的相關(guān)性尚不明確。為了探討NAFLD患者血清炎癥因子、T細胞亞群水平及意義，本研究選取2018年1月至2019年12月在我院治療的NAFLD患者進行研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月至2019年12月在我院就診的NAFLD患者89例(NAFLD組)。其中非酒精性脂肪性肝炎(NASH)患者30例，男性19例，女性11例；年齡29～59歲，平均年齡(44.6±9.7)歲；ALT 67～310 U/L,平均(204.4±89.2)U/L；AST 58～266 U/L，平均(163.3±67.3)U/L。非酒精性單純性脂肪肝(NAFL)患者59例，男性35例，女性24例，年齡27～66歲，平均年齡(45.9±10.1)歲；脂肪肝程度：中度30例，重度29例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者符合《非酒精性脂肪性肝病診療指南》中NAFLD的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；②NAFL為中重度患者；③本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，患者及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①入選前3個月有保肝藥物治療史；②有病毒性肝炎、自身免疫性肝病、肝豆?fàn)詈俗冃缘绕渌愋透尾?；③其他因素?dǎo)致的脂肪肝。采用年齡匹配原則，選取同期體檢健康者60例作為對照組，NAFLD組和對照組一般資料比較見表1。

表1 NAFLD組和對照組一般資料比較

1.2 實驗方法

清晨空腹抽取納入對象6 mL靜脈血，3 000 r/min離心10 min，取上清液，采用流式細胞法檢測T細胞亞群CD4+、CD8+T細胞的水平，流式細胞儀購于常州必達科生物科技有限公司，操作過程嚴(yán)格遵循說明書。采用雙抗夾心 ELISA 法測定血清IL-1RA、IL-1β、IL-18 IL-1RA 水平(ELISA KIT, R&D)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 NAFLD組和對照組血清炎癥因子、T細胞亞群比較

NAFLD組血清IL-1β、IL-18和CD4+T細胞明顯高于對照組(P<0.05)，而IL-1RA和CD8+T細胞明顯低于對照組(P<0.05)，見表2。

表2 NAFLD組和對照組血清炎癥因子、T細胞亞群比較

2.2 NASH和NAFL患者血清炎癥因子、T細胞亞群比較

NASH和非酒精性單純性脂肪肝(NAFL)患者性別、年齡、吸煙和飲酒比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表3。NASH患者血清IL-1β、IL-18和CD4+T細胞明顯高于NAFL患者(P<0.05)，而IL-1RA和CD8+T細胞明顯低于NAFL患者(P<0.05),見表4。

表3 NASH和NAFL患者一般資料比較

表4 NASH和NAFL患者血清炎癥因子、T細胞亞群比較

2.3 血清炎癥因子、T細胞亞群鑒別NASH的價值

血清IL-1β、IL-18、IL-1RA、CD4+T細胞、CD8+T細胞診斷NASH的ROC曲線下面積分別為0.694、0.808、0.669、0.872和0.742，P均<0.05，見圖1和表5。

圖1 各指標(biāo)鑒別NASH與NAFL的ROC曲線

表5 各指標(biāo)對NASH與NAFL的鑒別診斷價值

3 討論

NAFLD的關(guān)鍵步驟NASH的發(fā)病機制較為復(fù)雜，目前公認(rèn)的機制是脂肪酸沉積和氧應(yīng)激炎癥因子的“二次打擊理論”[7]。NASH已成為當(dāng)今世界上最重要的公共衛(wèi)生問題之一,臨床NASH檢測“金標(biāo)準(zhǔn)”肝活檢具有局限性，探索簡單且可重復(fù)的無創(chuàng)血清學(xué)檢測已成為NASH的研究熱點[8]。無創(chuàng)診斷是NASH診斷和治療的必然發(fā)展方向，但目前缺乏令人滿意的NASH指標(biāo)無創(chuàng)診斷指標(biāo)。

IL-1RA是一種由單核巨噬細胞分泌分子量為22～25 KD的酸性糖蛋白，與IL-1結(jié)構(gòu)同源，可以競爭性地與IL-1受體結(jié)合而不激活靶細胞，抑制IL-1的生物活性，從而影響人體的病理和生理活動，在NAFLD發(fā)展進程中發(fā)揮抗炎作用[9-12]。本次研究結(jié)果顯示，NAFLD患者的IL-1β水平顯著高于對照組，而IL-1RA顯著低于對照組，提示IL-1β在NAFLD患者中發(fā)揮促炎作用，而IL-1RA對炎癥的抑制作用減弱。IL-18水平增加可以進一步激活T細胞和巨噬細胞分泌一系列炎性細胞因子和粘附分子，促進炎癥的持續(xù)發(fā)展，使患者病情惡化，本次研究結(jié)果顯示，NAFLD患者的IL-18水平明顯高于對照組，發(fā)揮促進炎癥發(fā)展的作用。NASH組的IL-1β和IL-18水平顯著高于非NASH組，表明該指標(biāo)與NASH患者的病情發(fā)展密切相關(guān)，并可能反映了NAFLD的嚴(yán)重程度。

肝臟作為人體的免疫器官，在免疫調(diào)節(jié)中具有重要作用，T細胞是執(zhí)行細胞免疫反應(yīng)并在體液免疫反應(yīng)中起重要作用的效應(yīng)細胞，可以分為CD4+T細胞和CD8+T細胞兩個亞群[13-14]。CD8+T細胞對靶細胞具有細胞毒作用，對免疫應(yīng)答中的主要應(yīng)答細胞CD4+T細胞發(fā)揮調(diào)節(jié)性免疫抑制作用，兩者相互影響維持人體細胞免疫反應(yīng)的平衡[15-16]。研究表明，NAFLD患者機體免疫調(diào)節(jié)異常，NAFLD患者外周血T細胞亞群的變化可能參與NAFLD患者肝臟慢性損傷的進程[17-18]。本研究結(jié)果顯示，NAFLD組外周血中CD4+T細胞水平明顯高于對照組，而CD8+T細胞水平明顯低于對照組；NASH組外周血CD4+T細胞水平明顯高于NAFL組，CD8+T細胞水平亦更低。由NAFLD患者的T細胞亞群變化引起的細胞免疫紊亂的可能原因是患者機體反應(yīng)性氧化代謝產(chǎn)物增加導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化、細胞因子增多。CD4+T細胞參與免疫應(yīng)答過程，因此NAFLD患者機體CD4+T細胞增加，其活化后促炎性細胞因子大量分泌，發(fā)揮更強的促炎作用，導(dǎo)致促炎和抗炎作用失衡。NAFLD患者外周血中CD4+T細胞增加，人體的CD8+T細胞在一定程度上對CD4+T細胞起調(diào)節(jié)性免疫抑制作用，使人體處于免疫平衡狀態(tài)，但是一旦失衡則表現(xiàn)為CD4+T細胞增加而CD8+T細胞減少。

血清學(xué)指標(biāo)的檢測具有簡單易行的優(yōu)點，可以動態(tài)觀察NAFLD的發(fā)展過程，并直觀地反映出臨床治療效果[19-20]。目前，關(guān)于NAFLD患者外周血T細胞亞群和炎性因子的變化及其與NAFLD和NASH進展和程度的相關(guān)性的研究很少。本研究通過檢測NAFLD患者外周血IL-1β、IL-18、IL-1RA、CD4+T細胞和CD8+T細胞水平，結(jié)果顯示血清IL-1β、IL-18、IL-1RA、CD4+T細胞、CD8+T細胞診斷NASH靈敏度和特異性較高，對于判斷NAFLD的臨床類型和程度具有一定的臨床價值。同時，提示或可通過糾正免疫疾病來預(yù)防NAFLD的發(fā)展，為NAFLD提供新的思路。

綜上所述，NAFLD患者血清IL-1β、IL-18、IL-1RA、CD4+T細胞和CD8+T細胞水平異常，在鑒別NASH中有一定診斷價值。