鄭風(fēng)敏，王繁華，李 彬

（鶴壁市食品藥品檢驗檢測中心，河南 458030）

鹽酸普萘洛爾作為非選擇性的β 受體阻斷劑，臨床上常用做高血壓、心絞痛、心率失常等疾病的常用藥［1，2］。隨著我國人口老齡化的到來，特別是老年性高血壓的增加，該藥用量呈增加的趨勢?！吨袊幍洹?015年版中規(guī)定，鹽酸普萘洛爾片中的含量測定采用紫外-可見分光光度法［3］，該方法沒有高效液相色譜法的分離功能，所測定的結(jié)果容易受片劑中的各種輔料的影響，因此，采用高效液相色譜法可以有效去除輔料的干擾，更準(zhǔn)確地測定鹽酸普萘洛爾的含量。本試驗通過采用反相高效液相色譜法來測定鹽酸普萘洛爾片中鹽酸普萘洛爾的含量，方法簡單，回收率高，重復(fù)性好，可以做為一種測定鹽酸普萘洛爾含量的方法。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 Waters e2695 高效液相色譜儀，waters 2998 二極管陣列檢測器，Agilent 20Rbax C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），賽多利斯CPA225D 電子分析天平，F(xiàn)RQ-1008HT 型超聲波清洗機(jī)（杭州法蘭特超聲波科技有限公司），賽多利斯mini 超純水系統(tǒng)（德國賽多利斯集團(tuán)）。

1.2 試藥 鹽酸普萘洛爾對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號100783-201202，100%）；色譜純乙腈（德國默克），色譜純磷酸（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司），分析純磷酸二氫鉀（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司），水為試驗室自制超純水。鹽酸普萘洛爾片（江蘇亞邦愛普森藥業(yè)有限公司，10 mg，批號200102、190915、190806）。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件 Waters e2695 高效液相色譜儀，waters 2998 二極管陣列檢測器，Agilent 20Rbax C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為乙腈-水（含1%庚烷磺酸鈉）（45∶55），檢測波長為290 nm，進(jìn)樣體積：20 μl，流速：1.0 ml/min，柱溫：35 ℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品貯備液與對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸普萘洛爾對照品約20 mg，置于20 ml 棕色量瓶中，加入流動相10 ml，超聲使溶解，自然放冷，繼續(xù)加流動相并定容至刻度作為對照品貯備液。精密量取對照品貯備液2 ml，置于100 ml 的棕色量瓶中，加流動相稀釋并定容至刻度，作為對照品溶液，備用。

2.2.2 供試品溶液的制備 取重量差異項下的鹽酸普萘洛爾片20 片，研細(xì)，精密稱取約20 mg，置于100 ml棕色量瓶中，加流動相60 ml，超聲使溶解，自然放冷，繼續(xù)加流動相并定容至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10 ml，置于100 ml 的棕色量瓶內(nèi)，用流動相稀釋至刻度，作為供試品溶液，備用。

2.2.3 陰性對照溶液制備 按該藥的處方，取各輔料適量，按照該藥處方比例和制備方法制成陰性對照藥品。取此種藥品，按照文中上述“2.2.2”項下方法制成陰性對照溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗 取文中上述的對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液，按照“2.1”項下設(shè)置的色譜條件分別進(jìn)樣，根據(jù)試驗的色譜圖可知，該試驗條件下的色譜峰峰形較好，出峰時間較短，理論板數(shù)為17 488，試驗結(jié)果所得的參數(shù)符合《中國藥典》2015 年版的相關(guān)規(guī)定。色譜圖見圖1。

圖1 陰性對照（A）對照品（B）供試品（C）高效液相色譜圖

2.4 線性關(guān)系試驗 分別精密量取“2.2.1”項下的對照品貯備液0.5、1 和2 ml，分別放置于100 ml 的量瓶中，另取對照品貯備液3 和5 ml 分別放置于20 ml 的量瓶中，用流動相稀釋并定容，按照“2.1”項下色譜條件進(jìn)行試驗，記錄其色譜圖。以峰面積（Y）對濃度（X）進(jìn)行線性回歸分析，計算可得回歸方程為Y=7 368 X+14 587（r=0.999 9），結(jié)果表明鹽酸普萘洛爾在5.84～246.47 μg/ml 的濃度內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗 取文中上述“2.2.1”項下制備的對照品溶液，按照“2.1”項下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6 次，記錄色譜圖，通過計算可得其RSD 為0.84%（n=6），結(jié)果表明，在該色譜條件下，鹽酸普萘洛爾的精密度較高。

2.6 重復(fù)性試驗 取批號200102 的供試品6 份，按“2.2.2”項下的條件制成供試品溶液，按照“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣，分別記錄其色譜圖。鹽酸普萘洛爾峰面積的RSD 為0.84%（n=6）。計算結(jié)果表明，在該色譜條件下供試品重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取批號200102 的供試品配置成的供試品溶液，室溫下避光放置。分別在0、1、3、5、8、12和24 h 分別取樣，取樣后立即檢測，分別記錄其液相色譜圖，根據(jù)鹽酸普萘洛爾的峰面積計算其RSD 為0.94%。結(jié)果表明，供試品溶液室溫避光放置24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗 取批號200102 的供試品（含量已知）9 份（每份約含鹽酸普萘洛爾20 mg），分別加入鹽酸普萘洛爾對照品適量，按“2.2.2”項下方法制成供試品加標(biāo)回收溶液1～9，按文中“2.1”項下的色譜條件進(jìn)樣，以鹽酸普萘洛爾的峰面積計算其回收率。結(jié)果鹽酸普萘洛爾的平均回收率為99.92%，RSD 為0.17%。見表1。

表1 鹽酸普萘洛爾回收率試驗結(jié)果

2.9 樣品含量測定對比 取批號為200102、190915、190806 的3 批供試品各2 份，按照“2.2.2”項下方法分別制成供試品溶液，按“2.1”項下的色譜條件進(jìn)樣。另取批號為200102、190915、190806 的3 批供試品各2份，按照2015 年版《中國藥典》中規(guī)定的方法測定鹽酸普萘洛爾的含量。分別計算其含量，對結(jié)果進(jìn)行比較。見表2。

表2 不同試驗方法測定鹽酸普萘洛爾含量結(jié)果

3 討論

3.1 流動相的選擇 通過查詢相關(guān)文獻(xiàn)，筆者發(fā)現(xiàn)有采用甲醇-鹽、甲醇-乙腈-鹽、甲醇-磷酸二氫鉀等系統(tǒng)［4-6］作為流動相，本文也對這些條件進(jìn)行了試驗，但結(jié)果沒有在筆者設(shè)置的條件下峰形對稱，出峰時間也沒有該條件下的快。本文設(shè)置的條件下，出峰時間快，峰形對稱，理論板數(shù)較高，因此，流動相最后采用了乙腈-水（含1%庚烷磺酸鈉）（45∶55）。

3.2 檢測波長的選擇 按照“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，對其進(jìn)行了紫外-可見掃描檢測，最后發(fā)現(xiàn)在290 nm 的波長處有最大吸收，因此選用290 nm 為最后的檢測波長。

3.3 結(jié)果分析 通過含量測定結(jié)果比較，發(fā)現(xiàn)紫外和液相所測得結(jié)果基本相同，但是高效液相色譜法可以有效地去除藥品中輔料的干擾，自動化程度也高。因此，本文通過試驗所得到的高效液相色譜方法可以作為測定鹽酸普萘洛爾片含量的一種方法。