張 珊, 趙明亮, 付夢姣, 張家寧, 周冬生, 熊小路

貝氏柯克斯體是一種專性細胞內(nèi)寄生的嗜酸性革蘭陰性小桿菌，為Q熱病原。Q熱是一種重要的人獸共患病，人Q熱主要傳染源是貝氏柯克斯體感染的家畜(如牛，羊)，其排出貝氏柯克斯體污染環(huán)境[1]，人吸入少量貝氏柯克斯體氣溶膠而發(fā)病[2-3]。Q熱分為急性和慢性2種類型。急性Q熱為貝氏柯克斯體進入體內(nèi)引起急性發(fā)病，主要有頭痛、發(fā)熱等類似流感臨床表現(xiàn)。慢性Q熱為貝氏柯克斯體持續(xù)存在體內(nèi)建立慢性遷延感染，可引起心內(nèi)膜炎、肝炎、骨髓炎等并發(fā)癥[1]，嚴重可導(dǎo)致死亡。Q熱為一種全球廣泛分布傳染病，Q熱暴發(fā)流行已經(jīng)成為世界性公共衛(wèi)生問題。

貝氏柯克斯體除具有脂多糖內(nèi)毒素外，其還具有重要的致病因素——Dot/Icm IV型分泌系統(tǒng)(Dot/Icm IV secretion system，T4BSS)。其分泌至宿主細胞的效應(yīng)蛋白(效應(yīng)子)，目前已鑒定了150多個。隨著貝氏柯克斯體體外培養(yǎng)[4]和遺傳操作技術(shù)[5]的建立，轉(zhuǎn)座子插入和同源重組技術(shù)被廣泛應(yīng)用于研究T4BSS基因突變或缺失對貝氏柯克斯體胞內(nèi)生存的影響。Weber等發(fā)現(xiàn)Cbu0041(cirA)、Cbu0388、Cbu0425(cirB)、Cbu0937(cirC)、Cbu2052(cirD)和Cbu2059(cirE)等T4BSS基因的插入失活會導(dǎo)致貝氏柯克斯體無法在小鼠巨噬細胞系中生存[6]。Newton等發(fā)現(xiàn)，Cbu1751(cig57)、CoxCC8和Cbu1754等T4BSS基因的插入失活影響貝氏柯克斯體在HeLa細胞中的繁殖[7]。Crabill等構(gòu)建了貝氏柯克斯體突變體文庫，發(fā)現(xiàn)貝氏柯克斯體Cbu0414、Cbu0513、Cbu0978、Cbu1387、Cbu1524和Cbu1752等T4BSS基因插入突變株在宿主細胞內(nèi)生存能力下降[8]。

本文對近十多年來貝氏柯克斯體T4BSS效應(yīng)蛋白的研究進行綜述，以便從分子水平認識貝氏柯克斯體的致病機制。見圖1。

圖1 貝氏柯克斯體Dot/Icm IV型分泌系統(tǒng)效應(yīng)蛋白調(diào)控宿主細胞的信號通路Fig.1 Signaling pathways of host cells regulated by Dot/Icm type IV secretory system effector proteins in Coxiella burnetii

1 促進貝氏柯克斯體寄生泡發(fā)育成熟

貝氏柯克斯體為專性胞內(nèi)寄生菌，其首先與宿主細胞的膜表面受體αvβ3整合素等作用，誘導(dǎo)宿主細胞胞吞將其攝入胞內(nèi)，形成含貝氏柯克斯體的吞噬體。吞噬體循經(jīng)典的內(nèi)吞途徑，依次與早期內(nèi)體、晚期內(nèi)體、溶酶體融合并不斷酸化，形成貝氏柯克斯體寄生泡(Coxiella-containing vacuole，CCV)[9]。在此過程中，CCV還與宿主細胞自噬體和內(nèi)體囊泡發(fā)生異型融合，最終在宿主細胞內(nèi)發(fā)育成一個占據(jù)胞質(zhì)大部分空間的成熟CCV[10]。成熟的CCV是貝氏柯克斯體在細胞內(nèi)建立穩(wěn)定感染的必要場地。

柯克斯體囊泡蛋白(Coxiella vacuolar protein，Cvp)為T4BSS效應(yīng)蛋白，其定位于CCV內(nèi)。Larson等研究發(fā)現(xiàn)效應(yīng)蛋白基因cvpB、cvpC、cvpD和cvpE缺失突變株在細胞內(nèi)的復(fù)制能力下降，形成的CCV有明顯缺陷，而cvpD和cvpE基因回補株可以在一定程度上填補該缺陷[11]。

磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol-3 kinases，PI3Ks)是一類可產(chǎn)生第二信使的脂類激酶，其中PI3Ks激活生成的磷脂酰肌醇3-磷酸(Phosphatidylinositol 3-phosphate，PI(3)P)是誘導(dǎo)細胞自噬的關(guān)鍵因子[12]。磷脂酰肌醇5-激酶(Phosphatidylinositol 5-kinase，PIKfyve)可將PI(3)P磷酸化為PI(3,5)P2；PI(3,5)P2的生成不利于宿主細胞的早期內(nèi)體或晚期內(nèi)體的同型融合[13-14]。Martinez等研究發(fā)現(xiàn)，貝氏柯克斯體cvpB::Tn突變株感染引起宿主細胞呈多囊泡表型，cvpB回補株感染則可使宿主細胞恢復(fù)呈現(xiàn)單一大CCV；抑制PIKfyve的活性則可形成單一大CCV(發(fā)育成熟CCV)，且該CCV中含有LAMP1(Lysosome-associated membrane glycoprotein 1)和LC3(Microtubule-associated protein light chain 3)。這些結(jié)果表明效應(yīng)蛋白CvpB通過與CCV和早期內(nèi)體表面的PI(3)P和磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine，PS)相互作用，干擾早期內(nèi)體招募PIKfyve，并降低PIKfyve的活性，抑制PI(3)P向PI(3,5)P2轉(zhuǎn)化，穩(wěn)定CCV上的PI(3)P水平，從而促進其與其它囊泡融合，使CCV發(fā)育成熟[15]。

另外研究發(fā)現(xiàn)，CvpF能夠特異地與宿主細胞自噬相關(guān)的GTPase RAB26相互作用，CCV招募自噬體標(biāo)志物MAP1LC3B/LC3B(Microtubule associated protein 1 light chain 3 beta)，調(diào)控內(nèi)體轉(zhuǎn)運和自噬，為CCV成熟提供條件[16]。共定位實驗顯示相較于野生型或回補株，cvpF::Tn突變株CCV招募的LC3B在數(shù)量上明顯減少，說明CvpF可以促使CCV招募自噬體標(biāo)志物。異位表達貝氏柯克斯體CvpF-HA后，與僅表達HA的細胞相比較，其SQSTM1(Sequestosome 1)水平更高；SQSTM1是一種與自噬有關(guān)的泛素結(jié)合蛋白，提示CvpF有調(diào)節(jié)宿主細胞自噬的功能[16]。另外，由于RAB26可以參與溶酶體定位、自噬體成熟和囊泡介導(dǎo)的腎上腺素能受體分泌等過程[17-19]，因此推測CvpF可能作為鳥苷交換因子(GEF)或GDI置換因子(GDF)，錨定RAB26并激活其在早期內(nèi)體或前自噬體上的作用，促進貝氏柯克斯體CCV的發(fā)育成熟。

2 重塑宿主細胞骨架

細胞骨架是由蛋白纖維交織形成的立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，包括微管、微絲和中間絲，成束的肌動蛋白絲通過黏著斑與細胞外基質(zhì)相連形成應(yīng)力纖維[20]。Rho(Ras homologus oncogenes)蛋白在細胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中作為信號轉(zhuǎn)換器，調(diào)控細胞骨架運動和細胞形態(tài)等[21]。效應(yīng)蛋白CirA(Coxiella effector for intracellular replication A)含有3個精氨酸指狀基序，與Rho 蛋白家族RhoA(Rho1同源物)相互作用[22]。Weber等構(gòu)建了2個RhoA突變體，分別是RhoA Q63L(持續(xù)GTP結(jié)合的激活態(tài))和RhoA T19N(持續(xù)GDP結(jié)合的失活態(tài))。與僅轉(zhuǎn)染CirA或共轉(zhuǎn)染CirA和RhoA T19N的細胞比較，共轉(zhuǎn)染CirA和RhoA Q63L的細胞內(nèi)應(yīng)力纖維增多，圓形細胞數(shù)量減少。提示存在柯克斯體CCV上的CirA，可以使用CCV上RhoA激活GTP酶，引起宿主細胞骨架重塑[23]。

另外研究發(fā)現(xiàn)AnkF與宿主細胞骨架III型中間絲蛋白分子——波形蛋白相互作用，但AnkF并不在轉(zhuǎn)錄或翻譯水平上影響波形蛋白；在CHO細胞中過表達的AnkF與波形蛋白共定位，且波形蛋白由原來的絲狀排列變?yōu)辄c樣分布，推測AnkF通過改變波形蛋白的裝配和細胞內(nèi)定位從而干擾其功能。免疫熒光分析法觀察到貝氏柯克斯體感染的細胞中AnkF可以招募波形蛋白到CCV，且波形蛋白水平隨CCV的發(fā)育成熟而有所上升。貝氏柯克斯體在內(nèi)源性波形蛋白敲除的細胞中生長繁殖不受影響，推測有其他的細胞骨架蛋白彌補了波形蛋白缺失所帶來的影響。在CHO細胞中過表達AnkF和波形蛋白，通過免疫熒光分析發(fā)現(xiàn)其他的細胞骨架蛋白如肌動蛋白和微管蛋白的定位未發(fā)生改變，即AnkF可特異地調(diào)節(jié)波形蛋白的定位[24]。

3 調(diào)控宿主細胞物質(zhì)分泌和運送

網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞可以調(diào)控細胞對轉(zhuǎn)鐵蛋白的攝取以及蛋白質(zhì)在內(nèi)體與高爾基體間的運輸[25-26]。此外，網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的轉(zhuǎn)運對貝氏柯克斯體的胞內(nèi)生存也十分重要。效應(yīng)蛋白Cig57含有3個胞內(nèi)分選基序，其中的酪氨酸基序是與網(wǎng)格蛋白包被囊泡組分——FCHO2相互作用的基礎(chǔ)，可促使柯克斯體CCV招募網(wǎng)格蛋白，逆轉(zhuǎn)網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的囊泡轉(zhuǎn)運[7,27]。用定量PCR分析貝氏柯克斯體感染宿主細胞的荷菌量，與正常細胞相比較，F(xiàn)CHO2基因敲除細胞在感染后第2、4、6 d，荷菌量呈下降趨勢；通過免疫熒光分析發(fā)現(xiàn)FCHO2基因敲除細胞在感染第4 d后，柯克斯體CCV明顯縮小[27]，提示Cig57需要與FCHO2相互作用介導(dǎo)物質(zhì)轉(zhuǎn)運才能誘導(dǎo)CCV成熟。

效應(yīng)蛋白CvpA包含多個雙亮氨酸和酪氨酸的內(nèi)吞分選基序，可被網(wǎng)格蛋白銜接蛋白(Adaptor protein，AP)復(fù)合物AP1、AP2和AP3識別。免疫共沉淀分析發(fā)現(xiàn)，含有CvpA分選基序的多肽和完整CvpA蛋白均能與AP2和網(wǎng)格蛋白重鏈(Clathrin heavy chain，CLTC)結(jié)合；cvpA突變或AP2和網(wǎng)格蛋白的任一成分缺失均可顯著抑制貝氏柯克斯體生長繁殖[28]。此外，異位表達的CvpA定位于轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(Transferrin receptor，TfR)陽性囊泡，同時該細胞攝取轉(zhuǎn)鐵蛋白(Transferrin，Tf)減少，提示CvpA可抑制胞內(nèi)轉(zhuǎn)鐵蛋白的轉(zhuǎn)運[28]。另外，AP2基因敲除細胞的轉(zhuǎn)鐵蛋白攝取也減少[29]，提示CvpA可與AP2相互作用調(diào)控宿主細胞物質(zhì)轉(zhuǎn)運[28]。

效應(yīng)蛋白ElpA具有2個跨膜螺旋和1個螺旋結(jié)構(gòu)域的(ER-localizing protein A)，其定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。研究顯示表達完整ElpA的細胞比表達GFP和表達ElpA1-343/ElpA341-418的細胞分泌更少堿性磷酸酶；進一步研究發(fā)現(xiàn)ElpA能夠引起宿主細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)重排，導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)和分泌運送的嚴重破壞[30]。蛋白CBU0635是目前發(fā)現(xiàn)的唯一一個定位在高爾基體旁的效應(yīng)蛋白，其也可破壞細胞的堿性磷酸酶分泌[31]，另外效應(yīng)蛋白CBUA0019、CBU1556、CBU1825也可能影響宿主細胞分泌。

4 調(diào)控宿主細胞轉(zhuǎn)錄和翻譯

生物信息學(xué)分析顯示貝氏柯克斯體6個效應(yīng)蛋白(Cbu1314、Cbu0388、Cbu1524、Cbu0393、Cbu0794)帶有核定位信號(Nuclear localization signals，NLS)。其中CBU1314含有2個進入核內(nèi)的必須信號：第52～75位氨基酸序列(ELVKRIRVLEKVLKEQQKKIKKLE)和第181～186位氨基酸序列(KPPIRP)。Weber等研究發(fā)現(xiàn)，完整CBU1314蛋白主要定位在細胞核染色質(zhì)，而刪除核定位信號的CBU1314ΔNLS缺失蛋白在染色質(zhì)上的數(shù)量明顯減少；經(jīng)染色質(zhì)免疫共沉淀及DNA測序(Chromatin immunoprecipitation and DNA sequencing，ChIP-Seq)和MEME(Multiple EM for Motif Elicitation)測序分析發(fā)現(xiàn)，CBU1314蛋白可以識別宿主DNA的特定區(qū)域，該區(qū)域的大多數(shù)基因參與宿主細胞的轉(zhuǎn)錄、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和免疫應(yīng)答[32]。比較異源表達CBU1314和CBU1314ΔNLS細胞的轉(zhuǎn)錄組時，證明CBU1314在核內(nèi)調(diào)控宿主細胞轉(zhuǎn)錄[32]。

宿主細胞的轉(zhuǎn)錄、翻譯與絲裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated prote in kinase，MAPK)信號通路密切相關(guān)[33]。研究發(fā)現(xiàn)效應(yīng)蛋白CBU0388(CetCb2)、CBU0885(CetCb4)和CBU1676(Cem9)分別通過對信號通路中一個或多個分子的磷酸化修飾，特異地調(diào)控酵母MAPK信號通路[34]?；蛐蛄蟹治霭l(fā)現(xiàn)CBU0885和CBU1676蛋白均含有一個抑制MAPK活化的鹵酸脫鹵酶(Haloacid dehalogenase，HAD)保守結(jié)構(gòu)域[34]。

5 抑制宿主細胞凋亡

宿主細胞是貝氏柯克斯體賴以生存之地，因此延長宿主細胞的壽命是其致病所必須具備的能力。AnkG(Ankyrin repeat family G)、CaeA(Coxiella anti-apoptotic effector A)和CaeB(Coxiella anti-apoptotic effector B)是目前已知的3個由T4BSS分泌的抗宿主細胞凋亡(Apoptosis)效應(yīng)蛋白。三者均可抑制宿主細胞的內(nèi)源性凋亡，CaeA還可作用于外源性凋亡通路[35]。

宿主細胞的p32是一種促凋亡蛋白，主要分布在線粒體，少量位于細胞核[36-37]。p32與Hrk(Bcl-2促凋亡家族成員之一)結(jié)合可促進細胞色素c的釋放，p32與ARF(ADP-ribosylation factor)C-末端結(jié)合定位于線粒體發(fā)揮促凋亡作用[38-40]。免疫熒光和免疫印跡實驗也顯示效應(yīng)蛋白AnkG與p32結(jié)合定位于線粒體，序列分析發(fā)現(xiàn)AnkG的N-末端含有與宿主蛋白p32結(jié)合的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域。AnkG不含NLS，但經(jīng)星形孢菌素誘導(dǎo)細胞凋亡后，細胞內(nèi)的AnkG定位發(fā)生改變，主要位于細胞核。另外發(fā)現(xiàn)AnkG突變體AnkGR22/23S不能與p32結(jié)合，該突變體主要與微管蛋白共定位[41]。

星形孢菌素誘導(dǎo)細胞凋亡發(fā)現(xiàn)，與僅表達GFP的細胞比較，表達GFP-AnkG和GFP-NES-AnkG(GFP-AnkG fused to the nuclear export signal of the HIV-1 Rev protein)細胞的細胞核裂解水平降低[41]，說明AnkG依賴與p32結(jié)合轉(zhuǎn)運至細胞核才能發(fā)揮抗凋亡作用，但該抗凋亡作用與p32無關(guān)。另一方面，Lührmann等人利用嗜肺軍團菌鞭毛蛋白缺失株來研究AnkG的抗凋亡作用，指出AnkG可以通過干擾p32的促凋亡活性，使細胞色素c釋放減少來發(fā)揮抗凋亡作用[42]。Importin α1是輸入蛋白家族中的重要成員之一，協(xié)助含有NLS的蛋白分子入核，通過識別和結(jié)合靶蛋白的核定位信號，與其他相關(guān)蛋白分子結(jié)合形成核轉(zhuǎn)運復(fù)合體，將目的蛋白運輸?shù)胶藘?nèi)發(fā)揮作用[43]。Sch?fer等認為AnkG不含NLS，但其8到14個氨基酸具有與非經(jīng)典NLS相似作用；他們通過免疫共沉淀實驗又發(fā)現(xiàn)importin α1可與AnkG的11個氨基酸序列相結(jié)合而將AnkG轉(zhuǎn)運至細胞核，其與p32無關(guān)；但他們最后認為AnkG的入核轉(zhuǎn)運需要與p32和importin α1共同參與[44-45]。

CaeA定位于細胞核。CaeA含有的雙螺旋結(jié)構(gòu)域、NLS和谷氨酸/賴氨酸(Glutamic acid/lysine，EK)重復(fù)基序，這些結(jié)構(gòu)是其抗凋亡的分子基礎(chǔ)[31,46-47]。CaeA的表達可上調(diào)survivin(半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)抑制劑)表達水平，但與抗凋亡作用無直接關(guān)系[46]。星形孢菌素和紫外線誘導(dǎo)凋亡實驗顯示，CaeA僅能減少由紫外線誘導(dǎo)的多聚ADP核糖聚合酶(Poly ADP-ribose polymerase，PARP)裂解；而CaeB可抑制星形孢菌素和紫外線誘導(dǎo)的PARP裂解，說明CaeA抗凋亡能力弱于CaeB[47]。此外，CaeA可抑制Fas配體誘導(dǎo)的外源性凋亡，然而，CaeA抑制內(nèi)源性和外源性凋亡的具體機制尚未完全闡明[46]。

CaeB定位于線粒體，免疫共沉淀實驗發(fā)現(xiàn)CaeB不與p32結(jié)合[47]，提示其發(fā)揮抗凋亡作用與結(jié)合p32的AnkG不同。細胞凋亡過程中Bax(Bcl-2-associated X protein)和Bak(Bcl-2 homologous antagonist/killer)形成寡聚物，線粒體外膜通透性增強，細胞色素c釋放到細胞質(zhì)，促使細胞色素c與caspase-9結(jié)合形成凋亡小體，激活caspase-3和caspase-7[48]。多西環(huán)素誘導(dǎo)Bax表達后，GFP-CaeB能抑制細胞內(nèi)PARP的裂解[47]，說明CaeB作用于Bax活化后的下游反應(yīng)來發(fā)揮抗凋亡作用。經(jīng)星形孢菌素處理后，僅表達GFP的細胞PARP、caspase-9和caspase-7均裂解，而表達GFP-CaeB的細胞caspase-9和caspase-7均未裂解[47]，說明CaeB抑制caspase-9的活化。綜上所述，CaeB可能作用于Bax和caspase-9間的級聯(lián)反應(yīng)從而發(fā)揮抗凋亡作用。

6 抑制宿主細胞炎性反應(yīng)

細胞炎性反應(yīng)為天然免疫反應(yīng)，在抗胞內(nèi)菌感染中起重要作用。炎性小體為調(diào)節(jié)天然免疫反應(yīng)的是一類多蛋白復(fù)合物，其功能包括激活caspase-1(人和小鼠)、caspase-4/5(人)、caspase-11(小鼠)，促炎性細胞因子IL-1β和IL-18的分泌，誘導(dǎo)細胞焦亡/炎性壞死(Pyroptosis/Inflammatory necrosis)等[49-50]。細胞焦亡途徑可分為依賴caspase-1的經(jīng)典途徑和依賴caspase-4/5/11的非經(jīng)典途徑，其中非經(jīng)典途徑主要由革蘭陰性細菌分泌的脂多糖所激活[50]。Cunha等[51]發(fā)現(xiàn)T4BSS效應(yīng)蛋白IcaA(Inhibition of caspase activation A)可以抑制caspase-11介導(dǎo)的非典型性炎性小體激活，從而干擾細胞焦亡的發(fā)生。

Ras家族蛋白是一類小分子GTP酶，通過與GTP或GDP結(jié)合調(diào)節(jié)其活性，當(dāng)與GTP結(jié)合時Ras蛋白呈活化狀態(tài)，為含NLS的蛋白分子的核轉(zhuǎn)運提供能量[52]。有研究證實真核細胞中的RCC1可以作為Ran(為Ras家族的核運輸?shù)鞍?的鳥苷交換因子與宿主細胞核染色質(zhì)相互作用[53]。效應(yīng)蛋白NopA(Nucleolar protein A)C-末端含有4個染色體聚縮調(diào)控(Regulation of chromosome condensation，RCC)重復(fù)序列，與Ran-GEF RCC1的7個重復(fù)序列同源[54]。含RCC的完整NopA分子主要定位于細胞核，而不含RCC的NopA肽則在宿主細胞質(zhì)中彌散分布，說明RCC對NopA分子進入胞核至關(guān)重要[55]。免疫印跡法發(fā)現(xiàn)NopA與Ran-GDP相互作用，使細胞內(nèi)Ran-GTP水平升高和Ran活性增強，通過干擾p65轉(zhuǎn)錄因子入核而抑制NF-κB信號通路，從而抑制宿主細胞炎性反應(yīng)[55]。

7 其他亞細胞定位明確但功能尚未明確的效應(yīng)蛋白

效應(yīng)蛋白AnkB(Ankyrin repeat family B)富含錨蛋白重復(fù)序列。Rodríguez-Escudero等通過DAPI染色實驗發(fā)現(xiàn)AnkB定位于酵母細胞核，且過表達AnkB的酵母細胞對氨基葡萄糖苷敏感，其可能是通過干擾核糖體基因的表達，影響蛋白質(zhì)合成[56]，但是它如何進入胞核和確切功能有待進一步研究闡明。

MceA/B/C/D/E(Mitochondrial Coxiella effector protein B to E)是5個靶向線粒體的效應(yīng)蛋白，MceB和MceC沿線粒體小管均勻分布，MceD和MceE在線粒體呈點狀分布[57]。免疫沉淀實驗顯示MceC可結(jié)合線粒體組分，如iAAA蛋白酶、YME1L和CLPB(Caseinolytic peptidase)。MceA的N-末端含有2個跨膜結(jié)構(gòu)域，在線粒體外膜上組裝成一個同源寡聚復(fù)合物[58]。MceA(CBU0077)可與LAMP1共定位[31]，亦可存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)去改變內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的形狀與結(jié)構(gòu)[56]。Fielden推測CBU0077定位于不同細胞器是因為真核細胞產(chǎn)生的MceA折疊狀態(tài)與菌體自身表達的MceA結(jié)構(gòu)不同有關(guān)[58]。

Cpe(Coxiella plasmid effector protein)B、CpeC和CpeD為貝氏柯克斯體質(zhì)粒編碼的T4BSS效應(yīng)子。真核異位表達的CpeB與LC3B陽性的自噬體囊泡共定位，提示CpeB可能調(diào)節(jié)了宿主細胞的自噬進程[59]。CpeC含F(xiàn)-box結(jié)構(gòu)域，與泛素連接酶復(fù)合物SCF蛋白(Skp1-Cul1-F-box蛋白，SKP1：S-phase kinase-associated protein 1)結(jié)合，定位于富含泛素的腔內(nèi)[59]。F-box蛋白超家族介導(dǎo)的泛素化可以改變蛋白質(zhì)功能或降解靶蛋白，進而調(diào)節(jié)宿主細胞的天然免疫、炎癥反應(yīng)和細胞凋亡等[60]。CpeD與鈣連蛋白共定位，破壞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)網(wǎng)絡(luò)[59]；CpeD含有一個與鞭毛蟲驅(qū)動蛋白同源的結(jié)構(gòu)域，其可能引導(dǎo)囊泡沿微管運輸[61]。

8 結(jié) 論

隨著貝氏柯克斯體體外培養(yǎng)技術(shù)和遺傳操作方法的發(fā)展，貝氏柯克斯體T4BSS和效應(yīng)蛋白的研究已經(jīng)取得重要進展[4-5, 62-63]。研究證明T4BSS是貝氏柯克斯體重要的毒力因素，其分泌的效應(yīng)蛋白能夠調(diào)控宿主細胞的柯克斯體CCV發(fā)育成熟、宿主細胞的物質(zhì)分泌運送、自噬與凋亡、炎性反應(yīng)等一系列生理和病理過程，為貝氏柯克斯體生長繁殖提供場所和物質(zhì)。這些研究成果為研究貝氏柯克斯體的分子致病機制提供新思路，并為更有效防治Q熱提供理論依據(jù)。