高艷云，袁安琪，陳亞運(yùn)

（1.江蘇省中醫(yī)院，江蘇 南京 210029；2.泰州職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇 泰州 225300）

著名熱帶水果番荔枝（Annona squamosaLinn.）為番荔枝科番荔枝屬植物，又名洋波羅、釋迦果，原產(chǎn)于拉丁美洲，現(xiàn)在全球熱帶地區(qū)均有分布，我國南方的臺灣、海南等地也有分布。前期研究發(fā)現(xiàn)，番荔枝果實(shí)外殼具有明顯的抗腫瘤活性[1-2]，且活性成分集中在小極性部位[3-5]?；诖?，本實(shí)驗(yàn)對番荔枝果皮小極性成分繼續(xù)進(jìn)行研究。

1 儀器和耗材

電熱套（Z N H W-10 0 0，南京文科儀器科技有限 公司），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（RE-52A，上海亞榮生化儀器廠），快速中壓制備系統(tǒng)[EZ Purifer，利穗科技（蘇州）有限公司]，三用紫外分析儀（ZF-1，上海安亭科學(xué)儀器廠），核磁共振儀（AⅤ-400 MHz，Bruker公司），分析天平（BP211D，賽多利斯公司）。

色譜分離硅膠（100～200目，200～300目，400目，青島海洋化工有限公司），硅膠板（G，青島裕寶精細(xì)化工有限公司）。石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇（分析純，廣東光華科技股份有限公司）。

番荔枝果實(shí)于2016年10月購自云南省臨滄市秀川生物科技有限公司，經(jīng)鑒定為番荔枝科番荔枝屬植物番荔枝的成熟果實(shí)。果皮經(jīng)人工剝離風(fēng)干后備用（留樣編號No.20161025zh）。

2 提取與分離

將番荔枝果皮（8 kg）粉碎后轉(zhuǎn)移至滲漉筒中，采用95%乙醇（80 L）于室溫下滲漉提取3次。提取液經(jīng)合并后于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中濃縮為稀醇溶液，以400 g硅膠（100～200目）拌樣并干燥，2 kg硅膠（200～300目）濕法裝柱。上樣后，以石油醚∶乙酸乙酯（1∶0，50∶1，25∶1，10∶1，5∶1，2∶1，1∶1，1∶2，1∶5，0∶1）、乙酸乙酯∶甲醇（100∶1，50∶1，10∶1，0∶1）梯度洗脫，每1 000 mL作為一個流分，薄層分析展板檢測合并相同流分，得到15個部位段。其中，F(xiàn)10段采用硅膠柱色譜分離，乙酸乙酯∶甲醇（100∶1～10∶1）梯度洗脫，薄層分析展板檢測合并相同流分，共分為5個段，其中，F(xiàn)10-2經(jīng)硅膠柱分離，二氯甲烷∶甲醇=2∶1等度洗脫，得化合物1（12.80 mg），F(xiàn)10-4經(jīng)硅膠柱分離（400目硅膠），二氯甲烷∶甲醇（2∶1～1∶2）梯度洗脫，得化合物2（10.53 mg）和3（5.17 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色粉末，易溶于甲醇，微溶于二氯甲烷。1H NMR（400 MHz，DMSO-D6）數(shù)據(jù)歸屬如下：6.47（2H，s，OCH2O），7.49（1H，s，H-3），7.62（1H，t，J=8.0 Hz，H-9），7.84（1H，m，H-10），7.98（1H，d，J=4.0 Hz，H-4），8.32（1H，d，J=8.0 Hz，H-8），8.54（1H，d，J=8.3 Hz，H-11），8.78（1H，d，J=4.0 Hz，H-5）。13C NMR（101 MHz，DMSO-D6）譜中存在多個重合碳，數(shù)據(jù)歸屬如下：103.34（OCH2O），103.34（C-3），106.17（C-11b），122.65（C-11c），124.62（C-4），127.02（C-11），127.84（C-8），128.56（C-9），130.80（C-7a），132.54（C-11a），134.19（C-10），135.43（C-6a），144.47（C-5），144.47（C-3a），148.57（C-1），151.72（C-2），181.08（C-7），檢索文 獻(xiàn)[6]可知該化合物數(shù)據(jù)與鵝掌揪堿一致，因此，將化合物1鑒定為鵝掌揪堿。

化合物2：白色粉末，可溶于二氯甲烷。1H N M R （400 MHz，CDCl3）數(shù)據(jù)歸屬如下：8.71（1H，s，1-OH），7.10（1H，m，H-8），6.89（1H，m，H-9），6.70（1H，s，H-3），3.92（6H，brs，2-OCH3，10-OCH3），3.75（3H，s，11-OCH3），2.52（3H，s，NCH3）。13C NMR（101 MHz，CDCl3）譜中存在重合碳，數(shù)據(jù)歸屬如下：29.17（C-4），35.61（C-7），44.16（NCH3），52.85（C-5），56.03（2-OCH3），56.03（10-OCH3），62.06（11-OCH3），62.83（C-6a），110.77（C-9），111.26（C-3），119.25（C-11a），124.05（C-8），124.36（C-6b），126.53（C-11b），128.26（C-7a），130.91（C-3a），142.21（C-1），143.77（C-11），149.11 （C-10），151.81（C-2），以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]中的紫堇定一致，因此，將化合物2鑒定為紫堇定。

化合物3：白色粉末，可溶于二氯甲烷。1H N M R （400 MHz，CDCl3）數(shù)據(jù)歸屬如下：8.72（1H，s，11-OH），6.86（1H，m，H-8），6.85（1H，m，H-9），6.72（1H，s，H-3），3.91（6H，brs，2-OCH3，10-OCH3），3.70（3H，s，1-OCH3），3.05（3H，s，NCH3）。13C NMR（101 MHz，CDCl3）數(shù)據(jù)歸屬如下：26.21（C-4），33.23（C-7），42.31（NCH3），52.42（C-5），56.03（2-OCH3），56.15（10-OCH3），62.34 （1-OCH3），62.98（C-6a），111.02（C-9），111.49（C-3），119.34（C-11a），119.69（C-8），122.04（C-6b），126.16（C-11b），126.47（C-3a），127.06（C-7a），143.09（C-1），144.15（C-11），150.18（C-10），153.00（C-2），以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]中的異紫堇定一致，因此，將該化合物3鑒定為異紫堇定。

4 結(jié)語

從番荔枝果皮中分離并鑒定出3個生物堿類成分：鵝掌揪堿、紫堇定和異紫堇定，均為首次從番荔枝果皮中分離得到，后續(xù)將對3個生物堿的抗腫瘤活性進(jìn)行研究。