魯 鐵,李 登,謝文凱,余傳東,陳懷中,3,尚浩樂,楊柳杰,劉 宇,謝朝暉*
(1.河南城建學(xué)院生命科學(xué)與工程學(xué)院,河南 平頂山 467036;2.魯東大學(xué)農(nóng)學(xué)院,山東 煙臺(tái) 264025;3.暨南大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院,廣東 廣州 510632)
白蠟多年臥孔菌(Perenniporia fraxinea)隸屬于擔(dān)子菌門(Basidiomycets),蘑菇綱(Agaricomycetes),多孔菌目(Polyporales),多孔菌科(Polyporaceae),多年臥孔菌屬(Perenniporia)[1-3]。其菌絲體是由絲狀真菌菌絲連結(jié)在一起組成的營養(yǎng)體類型;子實(shí)體是其產(chǎn)孢構(gòu)造,由已組織化的菌絲體組成。目前主要分布于我國安徽、北京、福建、廣東、江蘇、江西、四川、云南、浙江等地。白蠟多年臥孔菌作為一種常見的白色真菌,是重要的生物資源,其多糖提取物可通過激活機(jī)體的免疫系統(tǒng)達(dá)到抑制腫瘤、抗氧化活性的目的[4-5]。
真菌多糖提取的常用方法有復(fù)合酶解法[6]、酸堿提取法[7]、超聲提取法[8-9]。目前對(duì)于多糖的提取方法研究較為成熟,但是不同的原料對(duì)提取方法有所要求,原料的結(jié)構(gòu)與來源均會(huì)導(dǎo)致多糖的水溶性和極性不同。傳統(tǒng)的熱水浸提法用時(shí)長,復(fù)合酶解法必須嚴(yán)格控制提取條件,操作難度大,酸堿提取法容易破壞多糖結(jié)構(gòu)。而超聲波輔助水提醇沉法可在保證多糖結(jié)構(gòu)不被破壞的同時(shí)加快提取的速度,且操作簡單,提取率高。目前白蠟多年臥孔菌活性物質(zhì)在國內(nèi)外研究較少,研究表明,白蠟多年臥孔菌的其粗多糖提取物有一定的體外抗氧化活性。子實(shí)體的乙醇提取物具有較強(qiáng)的抑制宮頸癌Hela細(xì)胞株的能力[10]。目前,未對(duì)白蠟多年臥孔菌多糖的提取物進(jìn)行系統(tǒng)化工藝優(yōu)化以及抗氧化評(píng)估。
本研究以多糖提取率為評(píng)價(jià)指標(biāo),采用超聲輔助水提醇沉法提取白蠟多年臥孔菌子實(shí)體及菌絲體多糖,在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上,通過Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)化白蠟多年臥孔菌子實(shí)體、菌絲體的粗多糖提取工藝,并測定其對(duì)1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基、2,2'聯(lián)氮-雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺鹽(2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS)自由基的清除能力,以及對(duì)油脂的抗氧化能力。以期為白蠟多年臥孔菌多糖的開發(fā)利用提供數(shù)據(jù)支持。
1.1.1 菌株
白蠟多年臥孔菌(Perenniporia fraxinea)990715經(jīng)野外采集,組織分離保存于平頂山健康食品協(xié)同創(chuàng)新中心菌種庫。
1.1.2 試劑
葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥98%):天津市優(yōu)譜化學(xué)試劑有限公司;DPPH:北京索萊寶科技有限公司;ABTS(純度≥98%)、水楊酸(純度≥98%):宜興市申光醫(yī)藥化工有限公司;金龍魚菜籽油:益海嘉里公司;其他試劑均為國產(chǎn)分析純。
SW-CJ-2F型水浴鍋:蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司;KQ-50B型超聲儀:昆山市超聲波儀器有限公司;PE Eenspire型酶標(biāo)儀:美國PE公司;KDC-1044型低速離心機(jī):科大創(chuàng)新股份有限公司;GFL-125型電熱鼓風(fēng)干燥箱:天津萊玻特瑞儀器有限公司;MJ-78A型高壓蒸汽滅菌鍋:上海施都凱儀器設(shè)備有限公司;JP-100A-2型紫外分光光度計(jì):北京普析通用儀器有限責(zé)任公司。
1.3.1 白蠟多年臥孔菌子實(shí)體和菌絲體的粗多糖提取工藝
流程及操作要點(diǎn)
操作要點(diǎn):
白蠟多年臥孔菌原料預(yù)處理:子實(shí)體按照文獻(xiàn)[3]的方法栽培獲得,菌絲體按照文獻(xiàn)[11]的方法培養(yǎng)獲得,菌絲體和子實(shí)體經(jīng)過65 ℃鼓風(fēng)干燥箱干燥處理,粉碎機(jī)粉碎過40目篩,-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>
加水?dāng)嚢瑁悍Q取0.1 g白蠟多年臥孔菌子實(shí)體(菌絲體),按照一定的液料比(1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60、1∶70(g∶mL))加水。
超聲提?。涸诔暪β?00 W、提取溫度70 ℃條件下,超聲提?。? min、10 min、15 min、20 min、25 min)。
水浸提、離心:水浸提溫度為80 ℃,提取(40 min、60 min、80 min、100 min、120 min)后,于4 500 r/min離心10 min,取其上清液。
濃縮:在101 kPa,50 ℃條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮,濃縮至原體積的四分之一左右。
除蛋白:采用Sevage法除蛋白,加入等體積Sevage溶液,振蕩10 min,4 000 r/min離心10 min,得上清液[12]。
醇沉:粗子實(shí)體和菌絲體上清液按照1∶3的比例加入體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇于4 ℃醇沉過夜,上清液在4 000 r/min室溫(25 ℃)下離心5 min,將沉淀用無水乙醇洗滌3次,將沉淀溶于1 mL蒸餾水中,得到白蠟多年臥孔菌子實(shí)體和菌絲體粗多糖溶液。
1.3.2 白蠟多年臥孔菌子實(shí)體(菌絲體)粗多糖提取工藝優(yōu)化
單因素試驗(yàn):分別考察不同的料液比(1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60、1∶70(g∶mL))、超聲時(shí)間(5 min、10 min、15 min、20 min、25 min)和提取時(shí)間(40 min、60 min、80 min、100 min、120 min)對(duì)白蠟多年臥孔菌多糖提取率的影響。
響應(yīng)面試驗(yàn):根據(jù)單因素試驗(yàn)的結(jié)果,利用Box-Benhnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)[13-14],選取料液比(A)、提取時(shí)間(B)和超聲時(shí)間(C)3個(gè)因素為自變量,分別以白蠟多年臥孔菌子實(shí)體多糖提取率(Y1)、菌絲體多糖提取率(Y2)為響應(yīng)值,每個(gè)因素設(shè)置3個(gè)水平,分別以-1、0、1進(jìn)行編碼,采用Box-Benhnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)3因素3水平的響應(yīng)面試驗(yàn),試驗(yàn)因素與水平見表1。
表1 子實(shí)體和菌絲體多糖提取工藝優(yōu)化Box-Benhnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素及水平Table 1 Factors and levels of Box-Benhnken experiments design for extraction process optimization of fruiting bodies and mycelium polysaccharides
1.3.3 分析檢測
(1)白蠟多年臥孔菌子實(shí)體和菌絲體多糖體外抗氧化活性的測定
以同質(zhì)量濃度維生素C(vitamin C,VC)溶液為陽性對(duì)照,采用二倍稀釋法配制成質(zhì)量濃度分別為0.5 mg/mL、1.0 mg/mL、1.5 mg/mL、2.0 mg/mL、2.5 mg/mL的白蠟多年臥孔菌子實(shí)體和菌絲體多糖溶液。DPPH·清除率的測定參考文獻(xiàn)[15-17];ABTS+·清除率的測定參考文獻(xiàn)[18]。
(2)白蠟多年臥孔菌多糖抗植物油脂氧化能力的測定
采用Schaal烘箱法[19],分別稱取50 mg的白蠟多年臥孔菌子實(shí)體和菌絲體多糖,添加至100 mL菜籽油中,攪拌均勻后,將其放置于60 ℃烘箱中,每隔12 h對(duì)油脂樣品利用玻璃棒攪拌1次,分別在第0、2、4、6和8天測定過氧化值(peroxide value,POV),同時(shí)以未添加白蠟多年臥孔菌子實(shí)體和菌絲體多糖的植物油為對(duì)照組。參考國家標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.227—2016《食品中過氧化值的測定》,測定其過氧化值(POV),以評(píng)價(jià)白蠟多年臥孔菌子實(shí)體和菌絲體多糖抗油脂氧化效果。
(3)多糖含量的測定
多糖含量的測定采用苯酚-硫酸法[20-22],在波長490 nm處測定吸光度值[23]。以葡萄糖質(zhì)量濃度(x)為橫坐標(biāo),吸光度值(y)為縱坐標(biāo)繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線,得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程y=0.059 7x+0.024 7,相關(guān)系數(shù)R2=0.999 1。按照葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算樣品中多糖含量。
多糖提取率的計(jì)算:將樣品溶液稀釋10倍后得到待測液。取100 μL待測液于5 mL的試管中。多糖提取率(Y)計(jì)算公式如下:
式中:C為粗多糖的含量,g/mL;V為白蠟多年臥孔菌溶液的體積,mL;N為稀釋的倍數(shù);M為樣品的質(zhì)量,g。
1.3.4 數(shù)據(jù)處理
采用軟件Design Expert11.0進(jìn)行響應(yīng)面分析,使用軟件Origin 9.0制圖。
2.1.1 料液比的確定
料液比對(duì)白蠟多年臥孔菌子實(shí)體、菌絲體多糖提取率的影響見圖1。
圖1 料液比對(duì)子實(shí)體及菌絲體多糖提取率的影響Fig. 1 Effect of solid and liquid ratio on extraction rates of fruiting bodies and mycelium polysaccharides
由圖1可知,當(dāng)料液比為1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60(g∶mL)時(shí),子實(shí)體多糖提取率隨著液體比例的增加而逐漸提高;當(dāng)料液比為1∶60(g∶mL)時(shí),子實(shí)體多糖提取率最高,為3.38%;當(dāng)料液比在1∶70(g∶mL)時(shí),子實(shí)體多糖提取率下降。當(dāng)料液比為1∶20、1∶30(g∶mL)時(shí),菌絲體多糖的提取率逐漸增加;當(dāng)料液比為1∶30(g∶mL)時(shí),菌絲體多糖提取率最高,為5.25%,隨著液體占比繼續(xù)增加,菌絲體多糖提取率逐漸下降。原因可能是,溶劑越多,多糖更易溶出,從而多糖提取率提高,當(dāng)多糖溶解達(dá)到平衡時(shí),再增加溶劑的量時(shí),使得水溶性物質(zhì)析出量增加,從而導(dǎo)致多糖提取率相對(duì)減少[13,24]。因此,最佳提取子實(shí)體多糖和菌絲體多糖的料液比分別為1∶60(g∶mL)和1∶30(g∶mL)。
2.1.2 提取時(shí)間的確定
提取時(shí)間對(duì)白蠟多年臥孔菌子實(shí)體和菌絲體多糖提取率的影響見圖2。
圖2 提取時(shí)間對(duì)子實(shí)體及菌絲體多糖提取率的影響Fig. 2 Effect of extraction time on extraction rates of fruiting bodies and mycelium polysaccharides
由圖2可知,當(dāng)提取時(shí)間為40~80 min時(shí),子實(shí)體多糖逐漸增加;提取時(shí)間為80 min時(shí),子實(shí)體多糖提取率達(dá)到最大值3.42%;提取時(shí)間從80 min增加至120 min時(shí),多糖提取率逐漸下降。隨著提取時(shí)間在40~100 min范圍內(nèi)的增加,菌絲體多糖提取率逐漸增加,提取時(shí)間為100 min時(shí);菌絲體多糖提取率值最大,為5.65%;提取時(shí)間>100 min之后,菌絲體多糖提取率下降。其原因可能是,在提取物與提取料液未達(dá)到擴(kuò)散平衡前,提取時(shí)間越長意味提取物與提取液相互作用時(shí)間越長,因此提取率越高[25]。但提取時(shí)間太長會(huì)導(dǎo)致多糖的提取率下降,可能是由于多糖在水中浸提時(shí)間過長,結(jié)構(gòu)破壞,導(dǎo)致多糖含量減少[26]。因此,最佳的子實(shí)體、菌絲體多糖提取時(shí)間分別為80 min、100 min。
2.1.3 超聲時(shí)間的確定
超聲時(shí)間對(duì)白蠟多年臥孔菌子實(shí)體和菌絲體多糖提取率的影響見圖3。
由圖3可知,隨著超聲時(shí)間在5~15 min范圍內(nèi)的增加,子實(shí)體多糖和菌絲體多糖的提取率均逐漸增加;超聲時(shí)間為15 min時(shí),多糖提取率均達(dá)到最大值,子實(shí)體多糖提取率為2.56%,菌絲體多糖提取率為5.06%;當(dāng)提取時(shí)間>15 min之后,子實(shí)體多糖和菌絲體多糖的提取率均逐漸下降。其原因可能為較短的超聲時(shí)間不能使多糖完全溶出。當(dāng)超過最佳超聲時(shí)間時(shí),雜質(zhì)溶出會(huì)抑制多糖溶出,同時(shí)由于機(jī)械波和熱效應(yīng)作用會(huì)破壞多糖結(jié)構(gòu),使多糖提取率降低[27-28]。因此,最佳子實(shí)體多糖與菌絲體多糖超聲時(shí)間均為15 min。
圖3 超聲時(shí)間對(duì)子實(shí)體及菌絲體多糖提取率的影響Fig. 3 Effect of ultrasonic time on extraction rates of fruiting bodies and mycelium polysaccharides
根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果,以料液比(A)、提取時(shí)間(B)和超聲時(shí)間(C)為主要影響因素,以白蠟多年臥孔菌子實(shí)體(Y1)和菌絲體多糖提取率(Y2)為響應(yīng)值進(jìn)行3因素3水平的響應(yīng)面試驗(yàn)。子實(shí)體和菌絲體多糖提取工藝優(yōu)化Box-Benhnken響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)[29-30]結(jié)果見表2,方差分析結(jié)果見表3。
表2 子實(shí)體和菌絲體多糖提取工藝優(yōu)化Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 2 Design and results of Box-Behnken experiments design for extraction process optimization of fruiting bodies and mycelium polysaccharides
表3 回歸模型的方差分析Table 3 Variance analysis of regression model
利用統(tǒng)計(jì)軟件Design-Expert V8.0.6對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析并進(jìn)行多元擬合,得到白蠟多年臥孔菌子實(shí)體(Y1)、菌絲體多糖提取率(Y2)的二次多項(xiàng)回歸方程:
由表3可知,子實(shí)體多糖提取工藝優(yōu)化模型回歸極顯著(P<0.01),失擬項(xiàng)不顯著(P=0.055 0>0.05),說明構(gòu)建的模型合理。模型決定系數(shù)R2為0.981 9、調(diào)整決定系數(shù)R2adj為0.958 7,在該模型中,一次項(xiàng)A、B、C對(duì)結(jié)果影響顯著(P<0.05),二次項(xiàng)A2、B2、C2對(duì)結(jié)果影響極顯著(P<0.01),其他項(xiàng)對(duì)結(jié)果影響不顯著(P>0.05)。由F值可知,根據(jù)影響子實(shí)體多糖提取率的程度,對(duì)因素排序?yàn)椋禾崛r(shí)間(B)>料液比(A)>超聲時(shí)間(C)。
菌絲體多糖提取工藝優(yōu)化模型回歸極顯著(P<0.01),失擬項(xiàng)不顯著(P=0.503 8>0.05),說明構(gòu)建的模型合理。模型決定系數(shù)R2為0.993 7、調(diào)整決定系數(shù)R2adj為0.985 6,在該模型中,二次項(xiàng)A2、B2、C2對(duì)結(jié)果影響極顯著(P<0.01),其他項(xiàng)對(duì)結(jié)果影響不顯著(P>0.05)。根據(jù)F值可知,根據(jù)影響菌絲體多糖提取率的程度,對(duì)因素排序?yàn)椋撼晻r(shí)間(C)>提取時(shí)間(B)>料液比(A)。各因素交互作用對(duì)子實(shí)體和菌絲體多糖提取率影響的響應(yīng)面及等高線圖見圖4。
圖4 各因素交互作用對(duì)子實(shí)體(a)和菌絲體(b)多糖提取率影響的響應(yīng)面及等高線Fig. 4 Response surface plots and contour lines of effects of interaction between each factor on extraction rates of fruiting bodies (a) and mycelium (b) polysaccharides
由圖4(a)可知,各因素交互作用對(duì)子實(shí)體多糖提取率影響的響應(yīng)面曲線呈現(xiàn)出拋物線狀,說明所擬合的回歸模型有極大值點(diǎn)。料液比與超聲時(shí)間的交互作用對(duì)子實(shí)體多糖提取率影響極顯著(P<0.01),而其余兩兩因素的交互作用影響較小,與方差分析的結(jié)果一致。子實(shí)體粗多糖的最佳提取工藝條件為料液比1∶61.146(g∶mL)、提取時(shí)間76.151 min和超聲時(shí)間16.277 min。在此條件下,白蠟多年臥孔菌子實(shí)體粗多糖提取率的預(yù)測值為4.388%。考慮到實(shí)際操作情況,將最佳提取工藝條件設(shè)為料液比1∶60(g∶mL)、提取時(shí)間76 min和超聲時(shí)間16 min。為驗(yàn)證回歸模型的有效性,采用優(yōu)化后的提取工藝條件進(jìn)行3次驗(yàn)證試驗(yàn),子實(shí)體多糖提取率平均實(shí)際值為4.38%,和預(yù)測值接近,表明該模型能較準(zhǔn)確反應(yīng)各因素對(duì)子實(shí)體多糖提取率的影響。
由圖4(b)可知,各因素交互作用對(duì)菌絲體多糖提取率影響的響應(yīng)面曲線呈拋物線狀,說明所擬合的回歸模型有極大值。提取時(shí)間與超聲時(shí)間的交互作用對(duì)菌絲體多糖提取率的影響較大,而其余兩兩因素的交互作用影響較小,這與方差分析的結(jié)果一致。菌絲體粗多糖的最佳提取工藝條件為料液比1∶29.832(g∶mL)、提取時(shí)間100.888 min和超聲時(shí)間15.997 min。在此優(yōu)化條件下,白蠟多年臥孔菌菌絲體多糖提取率的預(yù)測值為6.325%??紤]到實(shí)際操作情況,將最佳提取工藝條件設(shè)為料液比1∶30(g∶mL)、提取時(shí)間101 min和超聲時(shí)間16 min。在此條件下進(jìn)行3次平行驗(yàn)證試驗(yàn),所得菌絲體多糖提取率平均實(shí)際值為6.33%,與預(yù)測值接近,表明該模型能較準(zhǔn)確反應(yīng)各因素對(duì)菌絲體多糖提取率的影響。
子實(shí)體和菌絲體多糖對(duì)DPPH·(a)、ABTS+·(b)清除率的影響見圖5。
圖5 子實(shí)體和菌絲體多糖對(duì)DPPH·(a)、ABTS+·(b)的清除率Fig. 5 Scavenging rates of fruiting bodies and mycelium polysaccharides on DPPH·(a) and ABTS+·(b)
由圖5(a)可知,隨著多糖質(zhì)量濃度在0.5~2.0 mg/mL范圍內(nèi)的上升,子實(shí)體與菌絲體多糖對(duì)DPPH·的清除率逐漸增加,當(dāng)多糖質(zhì)量濃度達(dá)到2.0 mg/mL時(shí),子實(shí)體和菌絲體多糖對(duì)DPPH·的清除率達(dá)到最大值,分別為45.67%和51.67%,當(dāng)多糖質(zhì)量濃度繼續(xù)增加,對(duì)DPPH·的清除率逐漸降低。子實(shí)體和菌絲體多糖對(duì)DPPH·有較高的抗氧化活性,前期的研究多糖的制備沒有經(jīng)過除蛋白處理,糖蛋白的形式相對(duì)于多糖表現(xiàn)出較好的清除DPPH·的能力[31]。
由圖5(b)可知,隨著多糖質(zhì)量濃度在0.5~2.0 mg/mL范圍內(nèi)增加,子實(shí)體與菌絲體多糖對(duì)ABTS+·清除作用逐漸增強(qiáng),當(dāng)多糖質(zhì)量濃度達(dá)到2.0 mg/mL時(shí),子實(shí)體和菌絲體多糖的清除率達(dá)到最大值,分別為72.89%和75.83%,當(dāng)多糖質(zhì)量濃度繼續(xù)增加,對(duì)ABTS+·的清除率逐漸降低。
將白蠟多年臥孔菌多糖添加至植物菜籽油中,通過加速氧化方法研究隨著時(shí)間的延長白蠟多年臥孔菌多糖對(duì)于植物油抗氧化的效果,結(jié)果見圖6。由圖6可知,隨著時(shí)間的延長,陽性對(duì)照組的油脂POV幾乎隨著時(shí)間變化而成線性增加,而白蠟多年臥孔菌子實(shí)體和菌絲體多糖組POV僅僅隨著時(shí)間的延長緩慢增加。加熱至第8天,白蠟多年臥孔菌菌絲體多糖組POV僅為對(duì)照組的49%,與初始值相比較,POV增加了142%,而對(duì)照組POV增加量為211%。菌絲體的抗油脂氧化能力略大于子實(shí)體的抗油脂氧化能力,可能是因?yàn)榫z體的多糖純度較高。說明了提取的白蠟多年臥孔菌多糖具有明顯的抗油脂氧化效果,可嘗試用于開發(fā)天然的植物油脂抗氧化劑,但是白蠟多年臥孔菌多糖的得率較低,且在植物油中的溶解度比較小,尚不能大規(guī)模應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)當(dāng)中。
圖6 子實(shí)體和菌絲體多糖抗油脂氧化能力Fig. 6 Anti-lipid oxidation ability of fruiting bodies and mycelium polysaccharides
白蠟多年臥孔菌子實(shí)體多糖最佳提取工藝條件為料液比1∶60(g∶mL)、提取時(shí)間76 min和超聲時(shí)間16 min。在此優(yōu)化條件下,子實(shí)體多糖提取率為4.39%。菌絲體多糖最佳提取工藝條件為料液比1∶30(g∶mL)、提取時(shí)間101 min和超聲時(shí)間16min,在此優(yōu)化條件下,菌絲體多糖提取率為6.33%??寡趸囼?yàn)結(jié)果表明,當(dāng)多糖溶液的質(zhì)量濃度為2.0 mg/mL時(shí),子實(shí)體多糖對(duì)DPPH·、ABTS+·的清除率分別為45.67%、72.89%;菌絲體多糖對(duì)DPPH·、ABTS+的清除率分別為51.67%、75.83%。子實(shí)體、菌絲體多糖均對(duì)ABTS+·有較好的清除能力,對(duì)DPPH·的清除能力次之。在白蠟多年臥孔菌多糖抗油脂氧化能力的實(shí)驗(yàn)中,白蠟多年臥孔菌菌絲體、子實(shí)體多糖能顯著降低植物油的POV,表明白蠟多年臥孔菌多糖具有一定的抗油脂氧化效果。本研究可為白蠟多年臥孔菌多糖作為天然的抗氧化劑的相關(guān)研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。后續(xù)可從多糖及其蛋白的結(jié)合機(jī)制上解析抗氧化活性的方向進(jìn)行研究。