靳 博 綜述，向 征 審校

(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院胃腸外科，重慶 400016)

結(jié)直腸癌(CRC)在惡性腫瘤中發(fā)病率高達(dá)第四，病死率高居第二[1]。由于我國居民飲食向著低纖維、高蛋白脂肪結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變，CRC發(fā)病率仍不斷升高[2]。手術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，并因此繼發(fā)各種嚴(yán)重并發(fā)癥，是CRC患者死亡的主要原因。即使采用根治性手術(shù)并輔以化療后，仍有近1/2的Ⅱ～Ⅲ期CRC患者會發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。因此，早期識別預(yù)后不良的患者，并予以更積極的治療措施，對提升這部分CRC患者的生活質(zhì)量及預(yù)后意義非凡。循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)是能夠監(jiān)測治療效果并預(yù)測腫瘤患者預(yù)后的指標(biāo)，是指因各種原因脫離原發(fā)實(shí)體腫瘤，進(jìn)入血液并游離其中的腫瘤細(xì)胞。大部分腫瘤細(xì)胞進(jìn)入外周循環(huán)后由于血液的剪切力、缺氧、機(jī)體的免疫識別、自身凋亡等因素會迅速死亡，僅少量存活。殘存的CTC可聚集并黏附形成微小癌栓，隨血流進(jìn)入全身各處。在微環(huán)境適宜的靶器官中，CTC若逃避了免疫系統(tǒng)的識別，則可增殖形成轉(zhuǎn)移灶。因此，腫瘤的血行轉(zhuǎn)移與CTC緊密相連。因CTC來源于原發(fā)灶，與原發(fā)灶腫瘤細(xì)胞的抗原表達(dá)、基因突變情況、生物學(xué)行為高度相同，故可用于惡性腫瘤的“液體活檢”[3]。因此，CTC在CRC的早期診斷、檢測腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移、評估預(yù)后、指導(dǎo)治療等方面具有重要意義，本文就CTC在CRC中的應(yīng)用做一綜述。

1 CTC的亞型

根據(jù)細(xì)胞分子生物特性，CTC可分為多個亞型。第一類是上皮性腫瘤細(xì)胞，和原發(fā)實(shí)體灶一樣主要表達(dá)上皮性抗原的腫瘤細(xì)胞。第二類為經(jīng)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的腫瘤細(xì)胞。不同于細(xì)胞化生，EMT的細(xì)胞丟失上皮特征性的基因表達(dá)、細(xì)胞形態(tài)、表面抗原后，轉(zhuǎn)變?yōu)轭愃朴陂g充質(zhì)來源的細(xì)胞。此過程對于胚胎發(fā)育、修復(fù)受損組織十分重要。上皮來源腫瘤發(fā)生EMT時，會使腫瘤細(xì)胞原本高表達(dá)的上皮細(xì)胞特異性基因表達(dá)下調(diào)，而間質(zhì)細(xì)胞特性的基因表達(dá)上調(diào)，使得上皮細(xì)胞特征性的E-鈣黏蛋白水平大幅降低，而對應(yīng)的間質(zhì)細(xì)胞特征性蛋白顯著升高，從而使其遷移、降解胞外基質(zhì)等侵襲能力增強(qiáng)。同時，腫瘤細(xì)胞丟失極性，連接松散，也更容易穿越組織間質(zhì)、基底膜向血管內(nèi)滲成為CTC[4]。此過程在腫瘤形成早期既可發(fā)生，甚至可早于肉眼可見的腫瘤灶形成之前[5]。這種游離在外周血中、侵襲能力較強(qiáng)、具有間充質(zhì)特性的腫瘤細(xì)胞就是EMT腫瘤細(xì)胞[6]。相較于上皮型CTC，EMT型CTC在預(yù)測CRC患者預(yù)后、評價(jià)療效等方面更具優(yōu)勢，因其與CRC的疾病分期及血行轉(zhuǎn)移關(guān)系更為密切，作為腫瘤生物標(biāo)志物其價(jià)值更大，預(yù)測的各項(xiàng)結(jié)果更為精確[7]。但由于CTC研究的復(fù)雜性，現(xiàn)階段許多檢測方法主要針對上皮性CTC，對EMT型CTC的檢測仍有待深入。最后一類為腫瘤干細(xì)胞(CSCs)，CSCs具有多向分化能力，在微環(huán)境適宜的靶器官中逃避免疫系統(tǒng)攻擊后，可分化增殖產(chǎn)生異質(zhì)性腫瘤細(xì)胞，產(chǎn)生轉(zhuǎn)移灶。因此，原發(fā)灶的血行轉(zhuǎn)移與能夠自我更新的CSCs密不可分。KOJIMA等[8]觀察了189例CRC術(shù)后標(biāo)本的腫瘤細(xì)胞CD133表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)CD133陽性組患者比CD133陰性組患者總生存率(OS)更低，表明CD133陽性表達(dá)可獨(dú)立提示CRC患者預(yù)后差，間接說明CSCs的存在與患者預(yù)后不良具有一定關(guān)聯(lián)。

2 CTC的富集與檢測

CRC患者CTC經(jīng)腸系膜靜脈匯入門靜脈再進(jìn)入肝臟，大部分會被肝竇中的庫普弗細(xì)胞及其他免疫細(xì)胞殺滅，殘存的腫瘤細(xì)胞再隨心臟射血分散到全身外周血，因此，腸系膜靜脈及門靜脈血中的CTC水平高于外周靜脈血。CTC相互聚集黏附，會降低單位血液中的腫瘤細(xì)胞密度，對檢測造成一定影響，若3個及以上的CTC形成細(xì)胞腫瘤聚合體，則被稱為CTC cluster。MOLNAR等[9]研究發(fā)現(xiàn)，CTC cluster與EMT腫瘤細(xì)胞密切相關(guān)，且其轉(zhuǎn)移能力比單個CTC強(qiáng)。ACETO等[10]也發(fā)現(xiàn)，外周血中檢出CTC cluster的患者比僅檢出單個CTC的患者，腫瘤轉(zhuǎn)移概率高25～30倍。CTC的水平很低，約100～1 000萬個血細(xì)胞中僅有1個CTC。因此，要發(fā)現(xiàn)外周血中如此稀少的CTC，要先對其富集，再驗(yàn)證所獲細(xì)胞是否為目標(biāo)細(xì)胞。

2.1物理富集法 根據(jù)物理性質(zhì)不同，將腫瘤細(xì)胞從血細(xì)胞中篩選出來的方法被稱為物理富集法，如Oncoquick系統(tǒng)、ISET系統(tǒng)。通常CRC細(xì)胞體積和密度大于血細(xì)胞，通過物理特性而富集的CTC，因完整保留了細(xì)胞的表面抗原及結(jié)構(gòu)，可繼續(xù)行免疫組織化學(xué)、熒光染色，進(jìn)一步研究基因表達(dá)情況。物理富集法簡單易行且價(jià)格低廉，但缺點(diǎn)同樣明顯:特異性不高。在膜濾過分離法中，體積較小或細(xì)胞形態(tài)改變的腫瘤細(xì)胞可能通過濾過膜，某些直徑較大的非腫瘤細(xì)胞(如大于8 μm的單核細(xì)胞)可能會被濾過膜截留；而密度梯度離心法可能出現(xiàn)腫瘤細(xì)胞及血細(xì)胞的遷移影響富集效果，特異性不高，可出現(xiàn)假陽性。

2.2免疫富集法 免疫富集法包括正向和負(fù)向富集兩種，主要利用磁珠表面固定的特異性抗體與細(xì)胞表面對應(yīng)抗原結(jié)合并形成復(fù)合物，從而將目標(biāo)細(xì)胞固定在磁珠上，在磁場中與其他未被固定細(xì)胞分離,最終富集CTC。其中，正向富集的特異性抗體與CTC表面的特異性腫瘤抗原(如CK20、EpCAM等)結(jié)合，直接富集CTC。目前，唯一獲得美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)批準(zhǔn)上市的Cell Search系統(tǒng)就屬于免疫磁珠正向富集系統(tǒng)。它能捕獲血液中EpCAM陽性細(xì)胞，再用CD45抗體和CK抗體區(qū)分白細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞，所獲CTC純度較高。但是，EMT機(jī)制會導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的上皮性抗原減少，系統(tǒng)無法有效捕獲EpCAM低表達(dá)的EMT腫瘤細(xì)胞，可能出現(xiàn)假陰性[11-12]。負(fù)向富集法過程類似正向富集，但其使用白細(xì)胞特異性抗體(如抗CD45)，其與白細(xì)胞表面抗原結(jié)合形成復(fù)合物后，可去除樣本血液中的白細(xì)胞，反向富集目標(biāo)CTC，因此不受EMT機(jī)制導(dǎo)致的腫瘤細(xì)胞上皮特征性抗原減少等因素影響，可用于所有上皮來源實(shí)體腫瘤且無視表面抗原的變化。其缺點(diǎn)是富集過程中少量的白細(xì)胞殘留會明顯影響細(xì)胞純度。在實(shí)際工作中正、負(fù)向富集法常聯(lián)合使用以提高檢測效率。

2.3富集細(xì)胞驗(yàn)證 富集獲得的細(xì)胞還需檢測驗(yàn)證是否確為CTC，驗(yàn)證方法包含核酸檢測法和細(xì)胞計(jì)數(shù)法。聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)屬于核酸檢測法，無法直接觀察并計(jì)數(shù)CTC。使用PCR可檢測外周血中的癌基因或抑癌基因DNA片段，簡單易行，但因原發(fā)腫瘤細(xì)胞裂解時DNA片段釋放入血，在血液循環(huán)可能已存在一段時間，因此檢測到外周血中有腫瘤DNA片段，并不能直接證明血液中存在腫瘤細(xì)胞，故此法不適用于臨床CTC檢測。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)也是核酸檢測法，可通過檢測外周血中特定的逆轉(zhuǎn)錄DNA片段來證實(shí)CTC的存在。與PCR法不同的是，RT-PCR檢測的對象為腫瘤細(xì)胞特定mRNA的逆轉(zhuǎn)錄DNA，通常癌胚抗原(CEA)、細(xì)胞角質(zhì)蛋白19(CK19)等癌基因的mRNA在血液中并不存在，即使釋放到血液中后也會很快被各種RNA酶降解，因此，只要RT-PCR在擴(kuò)增后檢測到外周血中CEA、CK19對應(yīng)的特定逆轉(zhuǎn)錄DNA，即可間接證明CTC的存在，并可推斷出CTC水平。此法也無法直接觀察和計(jì)數(shù)CTC，可能受惡性腫瘤伴隨炎癥導(dǎo)致的腫瘤mRNA、上皮細(xì)胞污染血液樣本、腫瘤基因異常表達(dá)等情況的影響。免疫細(xì)胞化學(xué)法(ICC)可直接觀察和計(jì)數(shù)CTC。ICC技術(shù)將顯色劑與針對腫瘤抗原的特異性抗體結(jié)合，其與腫瘤細(xì)胞表面抗原發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的顯色，所獲細(xì)胞可進(jìn)一步行熒光原位雜交(FISH)來研究CTC的基因表達(dá)、突變情況。缺點(diǎn)是目前所用特異性抗體(如CK)特異性不高，仍會受巨噬細(xì)胞、漿細(xì)胞表面抗原干擾，導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)假陽性。流式細(xì)胞分析技術(shù)(FCM)與ICC類似，它使用被特殊熒光標(biāo)記的特異性抗體，抗體與腫瘤細(xì)胞對應(yīng)抗原結(jié)合時即可對腫瘤細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記和流式細(xì)胞檢測，直接計(jì)數(shù)CTC。該法獲得的細(xì)胞可在基因?qū)用?、蛋白水平、?xì)胞形態(tài)等方面進(jìn)一步開展研究。FCM技術(shù)也因抗體特異性不高，面臨著檢測結(jié)果特異性、敏感性較低的問題。在實(shí)際工作中，為提高檢測效率，常常聯(lián)合2種或多種方法進(jìn)行CTC的檢測。

3 CTC的應(yīng)用及挑戰(zhàn)

CTC已被用于轉(zhuǎn)移性乳腺癌、前列腺癌、CRC的檢測，但仍面臨某些問題，如各檢測方法各異不利于臨床研究、檢測時間節(jié)點(diǎn)無一致標(biāo)準(zhǔn)、cut-off值尚無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)等等，同時，仍需開發(fā)特異性更高的腫瘤抗原及相應(yīng)抗體，以提高檢測結(jié)果的可信度并兼顧EMT型CTC。能為臨床提供更多信息的新型CTC檢測手段也在不斷出現(xiàn)，如單細(xì)胞測序隨著基因組學(xué)技術(shù)進(jìn)步而成為目前研究熱點(diǎn)，可對CTC進(jìn)行DNA擴(kuò)增，實(shí)現(xiàn)對單個CTC的基因測序，以此研究CTC及原發(fā)灶腫瘤細(xì)胞基因表達(dá)、突變情況。當(dāng)無法獲取患者原發(fā)或轉(zhuǎn)移灶腫瘤細(xì)胞時，可通過CTC進(jìn)行腫瘤基因突變及耐藥情況的動態(tài)監(jiān)測。GAO等[13]通過單細(xì)胞測序?qū)Ρ攘?3例腫瘤患者的CTC、原發(fā)灶腫瘤細(xì)胞、轉(zhuǎn)移灶腫瘤細(xì)胞的拷貝數(shù)變異(CNV)，發(fā)現(xiàn)CTC與轉(zhuǎn)移灶細(xì)胞的CNV模式極為相似，同時部分CTC與原發(fā)灶CNV模式相同，提示這些原發(fā)灶具有轉(zhuǎn)移潛能。

4 CTC在CRC中的應(yīng)用

4.1早期診斷CRC Ⅰ～Ⅱ期CRC預(yù)后較好，但已有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者，其5年生存率較早期患者迅速跌至10%～20%[14-15]。CRC早期癥狀不明顯，許多患者確診時分期較晚，腫瘤已穿透全層腸壁至周圍組織器官或已有轉(zhuǎn)移，故早發(fā)現(xiàn)、早治療能有效改善CRC患者預(yù)后。CRC發(fā)病早期就可有腫瘤細(xì)胞進(jìn)入外周血，發(fā)現(xiàn)CTC有助于腫瘤早期診斷[16]。糞便隱血試驗(yàn)快捷、廉價(jià)，但特異性低，常受到腸道炎癥、痔等因素影響；CEA、糖類抗原199(CA199)等腫瘤標(biāo)志物升高常提示腫瘤性疾病，但缺乏特異性，受某些良性疾病影響，且有許多CRC患者腫瘤標(biāo)志物水平并不升高。腸鏡檢查可發(fā)現(xiàn)早期CRC甚至息肉等癌前病變等，檢查前需進(jìn)行機(jī)械性腸道準(zhǔn)備，某些患者甚至不能耐受腸鏡檢查，腸鏡檢查也不能實(shí)時觀察腫瘤的生長變化情況，不易常規(guī)實(shí)施。CT檢查具有輻射，且只能發(fā)現(xiàn)肉眼可見的病變，結(jié)果存在一定的滯后性。相較以上檢查項(xiàng)目，CTC檢查只需抽取外周靜脈血，具有方便、實(shí)時、微創(chuàng)的優(yōu)點(diǎn)，在CRC早期診斷方面有獨(dú)特優(yōu)勢。CTC也可同時篩查其他某些腫瘤性疾病。張波等[17]研究指出，當(dāng)以0作為7.5 mL外周血中CTC數(shù)目的cut-off值時，CTC檢出早期CRC的敏感度為63.3%(19/30)，且其水平與疾病分期、腫瘤分級呈正相關(guān)。WENSY等[18]研究顯示，CTC檢出Ⅰ～Ⅳ期CRC的敏感度為86.9%，特異度為97.3%，準(zhǔn)確度遠(yuǎn)高于糞便隱血試驗(yàn)。

4.2檢測腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移 通過研究有肝臟和骨微轉(zhuǎn)移灶的CRC患者，MOHAJERI等[19]證實(shí)CTC可預(yù)測腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)。遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移仍是消化道腫瘤患者死亡的主要原因[20]，在首次原發(fā)灶切除術(shù)后3年內(nèi)，早期發(fā)現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移能為某些患者爭取再次治療的機(jī)會。影像學(xué)及腸鏡只能發(fā)現(xiàn)人眼可見的較大病灶，兩者無法對更早期的微小轉(zhuǎn)移瘤進(jìn)行預(yù)警，而CTC數(shù)目的變化趨勢可早期預(yù)測可能的腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，甚至其預(yù)測結(jié)果準(zhǔn)確度高于腫瘤標(biāo)志物及正電子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層掃描(PET-CT)[21]，CTC也能比CRC相關(guān)腫瘤標(biāo)志物更早、更靈敏地反映腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移[22]，具有為患者爭取再次治療機(jī)會的潛力。國內(nèi)學(xué)者統(tǒng)計(jì)了1 847例CRC患者數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)有轉(zhuǎn)移患者的CTC數(shù)目明顯高于無轉(zhuǎn)移患者，而有肝轉(zhuǎn)移瘤患者的CTC檢出數(shù)顯著高于肝轉(zhuǎn)陰性患者[23`]。TIEN等[24]的研究也指出,門靜脈中CTC的數(shù)量可較準(zhǔn)確地預(yù)測患者術(shù)后肝轉(zhuǎn)移發(fā)生概率，證明CTC可預(yù)警影像學(xué)陰性的肝臟轉(zhuǎn)移。姚月娟等[25]研究發(fā)現(xiàn)，在CRC患者中，復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者檢出CTC率比首次診斷患者約高40%，也證明CTC可用于檢測有無腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。

4.3評估預(yù)后 CTC作為一種潛在的微轉(zhuǎn)移灶，其計(jì)數(shù)及其動態(tài)變化過程，尤其是在圍手術(shù)期的變化趨勢可用于預(yù)測腫瘤患者預(yù)后[26]，其與TNM分期聯(lián)合應(yīng)用可更精確預(yù)測患者預(yù)后[27-28]。薈萃分析發(fā)現(xiàn)，根據(jù)CTC數(shù)量基線將患者分為高數(shù)量組和低數(shù)量組，高數(shù)量組的OS和無進(jìn)展生存期(PFS)均低于低數(shù)量組，預(yù)后明顯更差(P<0.001)。對CTC動態(tài)隨訪結(jié)果進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，由原本低數(shù)量組增加轉(zhuǎn)變?yōu)楦邤?shù)量組的患者，預(yù)后差于從高數(shù)量組降低為低數(shù)量組的患者，相應(yīng)的OS和PFS同樣更短[29]。薈萃分析統(tǒng)計(jì)了2 363、3 129例CRC患者外周血CTC數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)無論TNM分期、采樣時間、是否有過新輔助治療、檢測方法，CTC陽性均意味著更差的OS與PFS。CTC可獨(dú)立預(yù)測CRC患者預(yù)后不良。同時，CTC檢出數(shù)量與腫瘤局部分期、局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、血管受侵情況緊密相關(guān)。這些證據(jù)均表明CTC比影像學(xué)檢查可更好，能更早期地預(yù)測患者預(yù)后[30-31]。奚天益[32]的薈萃分析結(jié)果也證實(shí)，CTC數(shù)目與CRC的T分期、TNM分期等呈正相關(guān)。

4.4評估化療效果 傳統(tǒng)的RECIST標(biāo)準(zhǔn)以治療后腫瘤大小變化來判斷治療效果，但某些情況下化療后腫瘤的影像學(xué)體積無明顯變化；而CTC在化療前后計(jì)數(shù)變化趨勢聯(lián)合其他腫瘤標(biāo)志物的變化，可補(bǔ)救RECIST標(biāo)準(zhǔn)中依賴影像學(xué)檢查，導(dǎo)致某些情況無法準(zhǔn)確評估療效的欠缺。TAN等[33]研究轉(zhuǎn)移性CRC化療過程中CTC和腫瘤標(biāo)志物變化情況，發(fā)現(xiàn)CTC更能反映療效及病情進(jìn)展?fàn)顩r。

4.5指導(dǎo)個體化治療 現(xiàn)階段腫瘤的治療要求醫(yī)務(wù)工作者根據(jù)患者病情、經(jīng)濟(jì)狀況、化療敏感度、不良反應(yīng)等綜合制定最佳的個體化治療措施。靶向藥物特異性強(qiáng)、不良反應(yīng)少，但某些患者天然耐藥，且初始敏感患者在靶向治療過程中可能出現(xiàn)獲得性耐藥，因此監(jiān)測靶向藥物應(yīng)用過程中患者的耐藥情況，對更換治療方案極為重要。BUIM等[34]研究報(bào)道，70%原發(fā)灶腫瘤細(xì)胞與CTC的Kras突變相同。MUSELLA等[35]研究亦發(fā)現(xiàn)，可通過對CTC基因檢測，判斷腫瘤對抗表皮生長因子受體靶向治療是否敏感。YANG等[36]對正在靶向治療的轉(zhuǎn)移性CRC患者連續(xù)監(jiān)測CTC的Kras突變情況，發(fā)現(xiàn)有30%的Kras初始野生型患者在靶向治療中發(fā)生了突變。因此，在靶向藥物應(yīng)用過程中，可利用CTC隨訪腫瘤Kras突變情況，避免無效的靶向治療。CTC還可幫助醫(yī)師選擇化療藥物。ABDALLAH等[37]研究顯示，對CTC上胸苷酸合成酶進(jìn)行測定，可了解腫瘤對5-FU的耐藥情況以此判斷患者在氟尿嘧啶(5-FU)應(yīng)用中能否獲益。對CTC基因、分子層面的動態(tài)監(jiān)測，可幫助醫(yī)務(wù)工作者合理利用靶向、化療藥物，及時制定敏感的治療方案，并減少耐藥藥物相關(guān)的不良反應(yīng)和患者不必要的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

5 總結(jié)與展望

CTC目前已用于預(yù)測CRC、乳腺癌、前列腺癌的預(yù)后[38-39]，其技術(shù)仍在快速進(jìn)步，檢測準(zhǔn)確度也在不斷提高，深入檢測的單細(xì)胞組學(xué)結(jié)果也能為臨床提供更多極具價(jià)值的信息。CTC檢測不僅方便、微創(chuàng)，可用于CRC的早期診斷，其連續(xù)動態(tài)檢測結(jié)果的變化趨勢，對CRC療效評估及預(yù)后判斷有較大的實(shí)用價(jià)值，并可輔助制定個體精準(zhǔn)治療方案。當(dāng)然，CTC也面臨某些亟需解決的問題：現(xiàn)存的各種檢測方式結(jié)果有較大差異[40]；需要采用統(tǒng)一的檢測技術(shù)，找到最佳的cut-off值，開發(fā)更具特異性且兼顧EMT型CTC的腫瘤標(biāo)志性抗原，提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度。此外，進(jìn)一步明確CTC與CRC轉(zhuǎn)移、預(yù)后的關(guān)系，可使其發(fā)揮更重要的作用。CHEN等[41]發(fā)現(xiàn)，上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化序列2基因在CRC患者和健康受試者之間差異表達(dá)比例較高(P<0.01)，可幫助提高CTC敏感度及特異度。當(dāng)前CTC為臨床工作提供的信息主要為分選計(jì)數(shù)和倍體，但高通量測序技術(shù)的迅速發(fā)展，將使單細(xì)胞組學(xué)成為CTC的重要發(fā)展方向。不同CTC亞群在CRC發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移中發(fā)揮各自的作用，有必要充分利用單細(xì)胞組學(xué)對各亞群深入探究，明確其在CRC中的作用。其中，具有干細(xì)胞特性的循環(huán)腫瘤干細(xì)胞(CTSCs)可能是早期發(fā)現(xiàn)和阻止腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移的重要環(huán)節(jié)，相較上皮型CTC，更加稀少、神秘的CTSCs可能值得更深入探究。