喬靜，龐新豐

(焦作市婦幼保健院 兒科一區(qū)，河南 焦作 454000)

肺炎支原體是兒童呼吸道感染中的易感病原體，在呼吸道病原體中陽性檢出率居于前列[1]。肺炎支原體感染癥狀不典型，不僅可以引起兒童呼吸道感染，還可以引起支氣管炎、肺膿腫及肺外合并癥，嚴重者甚至危及患者的生命[2]。原有的專家共識及治療指南，推薦大環(huán)內(nèi)酯類藥物作為治療此類疾病的首選藥物[3]，但是近年來，兒童肺炎支原體感染治療指南將抗菌藥物的選擇、用藥時長、耐藥監(jiān)測作為研究重點。針對上述特點，本研究對兒童呼吸道感染患者進行肺炎支原體核酸及耐藥基因突變位點檢測，分析耐藥性對臨床治療帶來的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

對于疑似肺炎支原體感染、臨床診斷有呼吸道感染癥狀的患兒進行采樣。896 例肺炎支原體核酸檢測及耐藥基因標本收集于焦作市婦幼保健院兒科呼吸病區(qū)，時間2019年1月1日至2019年8月1日，患兒年齡3 個月至14 歲，男515 例，女381 例。

納入標準：①肺炎支原體感染的診斷標準采用《諸福棠實用兒科學(xué)》第八版診療標準[4]：患兒有呼吸道感染癥狀；肺部聽診濕啰音；胸部影像學(xué)顯示病灶存在；肺炎支原體抗體檢測陽性抗體滴度大于1∶160。②本研究陽性應(yīng)符合核酸檢測陽性。③納入本研究的患兒樣本采集均已取得家屬同意，符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)要求。

排除標準：①近1 個月因MP 感染入院治療的患者；②既往重癥肺炎未痊愈者；③免疫治療者。

1.2 檢測試劑

MP 核酸及基因位點A2603G 和A2604G 檢測試劑盒選用默樂生物，檢測儀器為ABI7500 熒光定量檢測儀，檢測試劑盒選用江蘇默樂生物產(chǎn)品，遵循檢測儀器和試劑說明書進行試驗操作。

1.3 檢測方法

聚合酶鏈式反應(yīng)結(jié)合TaqMan 熒光探針技術(shù)檢測。對患者標本進行肺炎支原體核酸檢測；對肺炎支原體核酸陽性患者進行肺炎支原體基因點位A2603G、A2604G 檢測。

1.4 觀察指標

臨床癥狀觀察指標選擇：肺炎陽性率，肺外多系統(tǒng)并發(fā)癥及住院時長，發(fā)熱時長。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 22.0 進行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料用x±s表示，采用t檢驗；計數(shù)資料用n(%)表示，采用χ2檢驗；P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 不同年齡段分組MP 陽性率比較

2 結(jié) 果

2.1 肺炎支原體核酸陽性率在不同年齡段中檢測情況

896 例兒童呼吸道感染患者中，MP 陽性98 例，陽性率為10.9%(98/896)。肺炎支原體核酸檢測陽性患兒按不同年齡段進行分組，分為0 ～6月，6 ～12月，1 ～3歲，＞3 歲四個年齡組，卡方值為48.65，P ＜0.01，對比差異明顯，不同年齡段肺炎支原體核酸陽性率不同，6 ～12月組肺炎支原體核酸檢測陽性率最低為5.4%，3 歲以上組肺炎支原體核酸檢測陽性率最高為32.1%。 見表1。

2.2 不同年齡組MP 耐藥基因A2603G 和A2604G 突變位點突變率檢測

98 例MP陽性標本中，83例檢測出A2603G 和A2604G 突變，耐藥基因突變率為84.7%(83/98)。耐藥基因突變位點突變率在兒童肺炎支原體陽性患者中隨年齡段增加而增高。見表2。

表2 年齡段分組耐藥基因突變情況

2.3 臨床特點分析

以肺炎支原體耐藥基因突變位點A2603G 和A2604G是否突變分組，突變組83 例，未突變組15 例。按照臨床特點分析，以年齡、肺炎、肺外合并癥、住院時長、發(fā)熱時長等指標作為統(tǒng)計要素進行分析。表二中，肺炎支原體耐藥基因突變位點以不同年齡段分組，低年齡段不易發(fā)生肺炎支原體耐藥基因突變點位，不同年齡段四組肺炎支原體耐藥基因突變率對比有統(tǒng)計學(xué)意義。

在臨床癥狀特點分組中，突變組肺炎例數(shù)、肺外感染、住院時長、發(fā)熱時長均顯著高于非突變組(P＜0.05)，說明肺炎支原體耐藥基因突變位點陽性患者臨床癥狀中發(fā)熱時長，住院周期均高于為突變組，且易發(fā)生肺部及肺外感染。見表3。

表3 MP 耐藥基因位點突變分組情況與臨床癥狀分析

3 討 論

肺炎支原體是一種無細胞壁原核細胞型病原體，由于病原體結(jié)構(gòu)缺乏細胞壁，易產(chǎn)生耐藥。文獻[4]報道北京地區(qū)兒童肺炎支原體的耐藥基因突變率超過80%，與本研究兒童MP 耐藥基因突變率84.7% 接近。核糖體50s 亞單位23Sr RNA 的V 區(qū)是大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥物的結(jié)合位點，如果V 區(qū)核苷酸突變即可引起核糖體結(jié)合抗菌藥物親和力下降，從而使肺炎支原體產(chǎn)生耐藥性[5]，目前已發(fā)現(xiàn)突變位點主要有A2063G、A2064G[6]。

不同年齡段分組研究，實驗數(shù)據(jù)表明：＞3 歲組為焦作地區(qū)兒童呼吸道感染肺炎支原體易感人群；但在耐藥基因突變分組中，肺炎支原體耐藥基因位點突變率隨年齡增高而增高。

肺炎支原體感染常見于呼吸道感染，除了呼吸道感染癥狀外，還易累及其他臟器，引起肺外感染癥狀[7]。本研究中98 例肺炎支原體陽性感染患者中32 例有肺外感染癥狀，肺外感染率32.7%(32/98)，其中以肝酶異常、心肌受累最常見，其次是胃腸道、中樞神經(jīng)系統(tǒng)等。研究發(fā)現(xiàn)肺炎支原體耐藥基因突變組更易出現(xiàn)肺外感染癥狀。突變組肺外感染癥狀37.3%(31/83)肺外感染率遠高于未突變組的6.7%(1/15)，這與其他學(xué)者研究數(shù)據(jù)相似[8]。耐藥基因突變組臨床癥狀中住院時間、發(fā)熱時間均高于未突變組，肺炎及肺外感染等重癥患者比例，肺炎支原體耐藥基因突變組較高(92.8%，77/83)，與耐藥特點密切相關(guān)。

綜上所述，肺炎支原體感染率在不同年齡段陽性比例略有不同，三歲以上為易感人群，23Sr RNA 基因位點突變在年齡分組中呈現(xiàn)隨年齡增長突變率增高的特點，23Sr RNA 基因位點突變對于發(fā)熱時長，住院時長以及肺部、肺外感染均有影響。聚合酶鏈式反應(yīng)結(jié)合TaqMan熒光探針技術(shù)檢測肺炎支原體23Sr RNA 基因位點突變，在抗菌藥物的選擇和治療方案使用上有指導(dǎo)意義。