化敏 周倩 蔣海強 戴衍朋 石典花 王平 張樂林 周建永

摘 要 目的：建立在線檢測甘草飲片中抗氧化活性成分的方法，并對其進行鑒定。方法：通過檢測1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）清除率來評價甘草飲片的抗氧化活性;采用在線高效液相色譜-紫外-1，1-二苯基-2-三硝基苯肼法（HPLC-UV-DPPH）篩選甘草飲片中的抗氧化活性成分;采用高效液相色譜-飛行時間高分辨質(zhì)譜法（HPLC-TOF/MS）獲取質(zhì)譜數(shù)據(jù)并采用Qualitive Analyst B 06.00 Build 6.0.633.0軟件進行分析，通過對比分析甘草的紫外吸收光譜、在線圖譜、質(zhì)譜信息及各化合物的保留時間、精確分子量，結(jié)合參考相關(guān)文獻初步鑒定抗氧化活性成分，并進行驗證。結(jié)果：8批甘草飲片的DPPH清除率為55.71%～60.17%，均可篩選出7種抗氧化活性成分，經(jīng)鑒定分別為阿佛洛莫生、8-異戊烯基柚皮素、黃羽扇豆魏特酮、半甘草異黃酮B、3′，4′-二甲氧基-3-羥基-6-甲基黃酮、甘草寧E和甘草寧H。經(jīng)驗證，在線反應(yīng)產(chǎn)生的倒峰峰面積與飲片的DPPH清除率呈正相關(guān)。結(jié)論：所建方法簡單、準確，可用于快速篩選并鑒定甘草飲片的抗氧化活性成分，倒峰峰面積可用于評價甘草飲片的抗氧化活性成分大小。

關(guān)鍵詞 甘草;抗氧化活性成分;在線高效液相色譜-紫外-1，1-二苯基-2-三硝基苯肼法;高效液相色譜-飛行時間高分辨質(zhì)譜法;1，1-二苯基-2-三硝基苯肼;結(jié)構(gòu)鑒定

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To establish a method for online detection of antioxidant active components in Glycyrrhiza uroalensis decoction pieces， and to identify it. METHODS： The free radical scavenging rate of 1，1-diphenyl-2-trinitrobenzene hydrazine （DPPH） was determined to evaluate the antioxidant activity of G. uralensis decoction pieces. HPLC-UV-DPPH method was used to screen the antioxidant active components of G. uralensis decoction pieces. HPLC-TOF/MS was used to obtain mass spectrum data and Qualitive Analyst B 06.00 Build 6.0.633.0 software was used to analyze data. Through contrast analysis of UV absorption spectrum， online chromatogram， mass spectrum information of G. uralensis and the retention time of each compound， accurate molecular weight， antioxidant active components were identified by referring to relevant literature. Validation test was also conducted. RESULTS： DPPH free radical scavenging rate in 8 batches of G. uralensis decoction pieces ranged 55.71%-60.17%. Seven antioxidative active compounds， including avolomotor， 8-isopentenyl naringin， yellow lupulin weitone， isoflavone B， 3′，4′-dimethoxy3-hydroxy-6-methyl flavone， glycyrrhizin E and glycyrrhizin H， could be screened from G. uralensis decoction pieces. After validation， the peak area of inverted peak generated by online reaction was positively correlated with DPPH free radical scavenging rate. CONCLUSIONS： Established method is simple and accurate， and can be used to quickly screen and identify the main antioxidant components of G. uralensis decoction pieces; the peak area of inverted peak can be used to evaluate the antioxidant active components of G. uralensis decoction pieces.

KEYWORDS? ?Glycyrrhiza uralensis; Antioxidant active component; Online HPLC-UV-DPPH;HPLC-TOF/MS;1，1-diphenyl-2-trinitrobenzene hydrazine; Structural identification

中圖分類號 R932 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2021）02-0176-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.02.09

甘草為豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、脹果甘草Glycyrrhiza inflata Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根和根莖，主要分布于我國東北、華北、甘肅、新疆等地[1]。甘草具有補脾益氣、清熱解毒、祛痰止咳、緩急止痛、調(diào)和諸藥的功效，除可用于治療脾胃虛弱、倦怠乏力、心悸氣短、咳嗽痰多、脘腹、四肢攣急疼痛等癥外，還可用于緩解藥物毒性和烈性[2]?，F(xiàn)代藥理研究表明，甘草具有較強的抗氧化活性，其作為一種天然的抗氧化劑，已在食品、化妝品等多個領(lǐng)域中得到了廣泛應(yīng)用[3-4];同時，甘草的抗炎、殺菌、抗衰老等藥理活性均與其抗氧化性活性密切相關(guān)[5-7]，因此篩選甘草的抗氧化活性成分可為該藥藥效作用物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供數(shù)據(jù)支持。

有研究發(fā)現(xiàn)，甘草中的抗氧化活性成分主要包括黃酮[8]、多糖[9]和三萜[10]等多種化合物，但具體的抗氧化成分組成尚不明確。目前，甘草化學(xué)成分的研究方法主要有氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）、高效液相色譜法（HPLC）、HPLC指紋圖譜和液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)（LC-MS）等[11-13]，這些方法雖然可以得到豐富的化學(xué)成分信息，但均未明確成分與藥效的關(guān)系，因此無法對甘草飲片的質(zhì)量和藥效進行評價。

隨著科學(xué)技術(shù)的進步，中藥活性成分辨識技術(shù)得到了一定的發(fā)展，形成了以藥物基本特性為基礎(chǔ)的色譜分離和在線監(jiān)測技術(shù)[14-15]。自由基是指物質(zhì)分子在光或熱等外界條件影響下因共價鍵均裂所形成的含有不成對電子的原子、分子或基團。生物體內(nèi)自由基的產(chǎn)生和清除及氧化損傷與心血管疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[16]。1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）是一種常見的自由基，常用來監(jiān)測物質(zhì)的抗氧化活性[17-18]。鑒于此，本研究采用高效液相色譜-紫外-1，1-二苯基-2-三硝基苯肼法（HPLC-UV-DPPH）對甘草提取物清除DPPH的活性進行在線檢測和評價，以快速篩選甘草飲片中的抗氧化活性成分;同時，結(jié)合高效液相色譜-飛行時間高分辨質(zhì)譜法（HPLC-TOF/MS）對篩選出的抗氧化活性成分進行初步鑒定，旨在為甘草抗氧化物質(zhì)基礎(chǔ)的研究提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

Agilent 1260型HPLC儀（含在線脫氣機、四元泵、自動進樣器、柱溫箱）和Agilent 6230 TOF LC/MS型四級桿飛行時間質(zhì)譜儀（含電噴霧離子源、Mass Hunter Data Acquisition B.06.01在線工作站、Qualiative Analysis B 06.00 Build 6.0.633.0離線分析軟件）均購自美國Agilent公司;ACQUITY H-Class型HPLC儀（包括四元溶劑管理器、樣品管理器、二極管陣列檢測器、Empower 7.20.00.00色譜工作站）購自美國Waters公司;xMark型酶標儀購自南京德鐵實驗設(shè)備有限公司;XS205DU型萬分之一電子天平購自瑞士Mettler Toledo公司;KQ- 300VED型三頻數(shù)控超聲波清洗器購自昆山市超聲儀器有限公司;DHG-9146型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱購自上海精宏實驗設(shè)備有限公司。

1.2 藥品與試劑

實驗用藥品和試劑有：DPPH標準品（合肥博美生物科技有限責(zé)任公司，批號464RB，純度≥97%）等;乙腈為色譜純，甲醇、甲酸、無水乙醇、石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇等為分析純，水為超純水。

8批甘草飲片（編號S1～S8）經(jīng)山東省中醫(yī)藥研究院孫立立研究員鑒定為豆科植物甘草G. uralensis Fisch.的干燥根和根莖，樣本保存于本實驗室，其來源信息見表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 甘草飲片DPPH清除率的檢測

2.1.1 供試品溶液的制備 取甘草飲片（編號S6），粉碎，過60目篩，取約0.25 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲（功率250 W，頻率40 kHz，下同）處理30 min，放冷，再次稱定質(zhì)量，用甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.2 DPPH甲醇溶液的制備 取DPPH標準品適量，精密稱定，加甲醇制成濃度為0.266 3 μmol/mL的DPPH甲醇溶液，置于4 ℃冰箱中保存，備用。

2.1.3 半數(shù)抑制濃度（IC50）的測定 取“2.1.1”項下供試品溶液適量，加甲醇稀釋，制成質(zhì)量濃度分別為10.00、2.00、1.00、0.80、0.40、0.20、0.10、0.04 mg/mL（以生藥量計）的樣品溶液。分別取上述不同質(zhì)量濃度的樣品溶液2 mL，置于EP管中，加入“2.1.2”項下DPPH甲醇溶液2 mL，搖勻，置于暗處反應(yīng)30 min，使用酶標儀于517 nm波長處測定樣品溶液與DPPH甲醇溶液混合液的吸光度（Ai）;同時，測定空白對照溶液（甲醇）的吸光度（A0）、樣品溶液與甲醇混合液（等體積混合，于暗處反應(yīng)30 min）的吸光度（Aj），每樣品重復(fù)測定3次，求平均值，計算DPPH清除率和IC50。DPPH清除率（%）=（1-[Ai-Aj

A0] ）×100%[19]。結(jié)果，上述各質(zhì)量濃度供試品溶液的DPPH清除率分別為98.38%、74.36%、62.55%、51.71%、50.95%、45.07%、44.88%、44.74%，IC50為0.24 mg/mL。

2.1.4 甘草飲片DPPH清除率的檢測 按“2.1.3”項下IC50結(jié)果，分別稱取8批甘草飲片粉末，約0.25 g，精密稱定，按“2.1.1”項下方法制備供試品溶液，精密量取0.6 mL，置于25 mL量瓶中，加甲醇定容，按“2.1.3”項下方法測定吸光度并計算DPPH清除率，結(jié)果見表2。由表2可知，8批甘草飲片的DPPH清除率為55.71%～60.17%，其中S8樣品的DPPH清除率最高，S7樣品最低。

2.2 甘草抗氧化活性成分的篩選與鑒定

2.2.1 供試品溶液的制備 取甘草飲片粉碎，過60目篩，取約0.75 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加甲醇15 mL，密塞，超聲處理30 min，放冷，再次稱定質(zhì)量，用甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，置于4 ℃冰箱中保存，備用。

2.2.2 DPPH甲醇溶液的制備 按“2.1.2”項下方法制備濃度為80 μmol/L的DPPH甲醇溶液，置于4 ℃冰箱中保存，備用。

2.2.3 HPLC-UV-DPPH的色譜條件 以Agilent Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）為色譜柱;以乙腈（A）-0.2%甲酸水溶液（B）為流動相，梯度洗脫（0～10 min，15%A→25%A;10～20.3 min，25%A→30%A;20.3～70 min，30%A→70%A;70～75 min，70%A→15%A）;檢測波長為254 nm;柱溫為30 ℃;流速為0.8 mL/min;進樣量為10 μL。柱后自由基分析系統(tǒng)的流動相為80 μmol/L DPPH甲醇溶液;流速為0.8 mL/min;檢測波長為517 nm;柱后溫度為30 ℃。

2.2.4 HPLC-TOF/MS的色譜與質(zhì)譜條件 以Agilent Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）為色譜柱;以乙腈（A）-0.2%甲酸水溶液（B）為流動相，梯度洗脫（0～10 min，15%A→25%A;10～20.3 min，25%A→30%A;20.3～70 min，30%A→70%A;70～75 min，70%A→15%A）;檢測波長為254 nm;柱溫為30 ℃;流速為0.8 mL/min;進樣量為2 μL。質(zhì)譜條件為三通分流至0.27 mL/min;離子源為電噴霧離子源;離子模式為正離子模式;全掃描范圍為m/z 100～1 000;毛細管電壓為4 000 V;干燥氣體積流量為8 L/min;溫度為350 ℃;裂解電壓為300 V;錐孔電壓為65 V;霧化氣壓力為30 psi。

2.2.5 數(shù)據(jù)分析 采用Qualitive Analyst B 06.00 Build 6.0.633.0軟件對HPLC-TOF/MS所得數(shù)據(jù)進行分析。通過對比分析甘草的紫外吸收光譜、在線圖譜、質(zhì)譜信息及各化合物的保留時間、精確分子量，同時參考相關(guān)文獻[20-25]，對可能存在抗氧化活性的成分進行鑒定。

2.2.6 抗氧化活性成分的檢測與鑒定結(jié)果 取“2.2.1”項下供試品溶液適量，按“2.2.3”“2.2.4”項下條件進樣分析，記錄色譜圖。結(jié)果，甘草飲片在線鑒別出7種抗氧化活性成分，經(jīng)鑒定分別為阿佛洛莫生、8-異戊烯基柚皮素、黃羽扇豆魏特酮、半甘草異黃酮B、3′，4′-二甲氧基-3-羥基-6-甲基黃酮、甘草寧E、甘草寧H。甘草飲片的高效液相色譜圖見圖1（圖中，峰1～7分別對應(yīng)上述化合物，后圖同），DPPH自由基在線圖譜見圖2，甘草飲片的總離子流圖見圖3，甘草飲片質(zhì)譜圖所對應(yīng)的色譜圖見圖4，其抗氧化活性成分的結(jié)構(gòu)式見圖5，其質(zhì)譜鑒定結(jié)果見表3。

2.3 裂解規(guī)律及特征分析

化合物1：保留時間為49.542 min（以圖4為例，下同），在正離子模式下出現(xiàn)準分子離子峰m/z 299.092 6[M+H]+，推斷可能的分子式為C17H14O5。進一步進行碎片掃描，發(fā)現(xiàn)主要碎片m/z 284.332 2，推測可能為準分子離子脫掉1分子CH3所得;同時，還存在m/z 132.101 5[C9H8O]的中性分子以及m/z 136.112 2的[M+H-OCH3-C9H8O]+的碎片離子。根據(jù)以上信息并參考相關(guān)文獻[20-21]，推測該化合物為阿佛洛莫生 。

化合物2：保留時間為50.450 min，在正離子模式下出現(xiàn)準分子離子峰m/z 341.139 5[M+H]+，推斷可能的分子式為C20H20O5。進一步進行碎片掃描，發(fā)現(xiàn)主要碎片m/z 285.076 1，推測可能為準分子離子通過質(zhì)譜裂解丟失m/z 56.013 1的碎片峰，提示有異戊烯基結(jié)構(gòu)存在。根據(jù)以上信息并參考相關(guān)文獻[21-22]，推測該化合物為8-異戊烯基柚皮素。

化合物3：保留時間為53.173 min，在正離子模式下出現(xiàn)準分子離子峰m/z 339.124 5[M+H]+，推測可能的分子式為C20H18O5。進一步進行碎片掃描，發(fā)現(xiàn)主要碎片離子m/z 147.090 0[M+H-C11H12O3]+及m/z 119.082 7[M+H-C12H12O4]+。根據(jù)以上信息并參考相關(guān)文獻[23]，同時結(jié)合化合物極性，推測該化合物為黃羽扇豆魏特酮。

化合物4：保留時間為59.224 min，在正離子模式下出現(xiàn)準分子離子峰m/z 353.104 8[M+H]+、m/z 375.082 7 [M+Na]+，推測可能的分子式為C20H16O6。進一步進行碎片掃描，發(fā)現(xiàn)主要碎片m/z 257.570 8[M+H-C3O2-CO]+。根據(jù)以上信息并參考相關(guān)文獻[24]，同時結(jié)合裂解規(guī)律，推測該化合物為半甘草異黃酮B。

化合物5：保留時間為64.620 min，在正離子模式下出現(xiàn)準分子離子峰m/z 313.105 8[M+H]+，推測可能的分子式為C18H16O5。進一步進行碎片掃描，發(fā)現(xiàn)主要碎片離子m/z 270.315 0為準分子離子失去甲基后又失去CO中性分子所得。根據(jù)以上信息并參考相關(guān)文獻[25]，同時結(jié)合化合物極性，推測該化合物可能為3′，4′-二甲氧基-3-羥基-6-甲基黃酮。

化合物6：保留時間為67.494 min，在正離子模式下出現(xiàn)準分子離子峰m/z 425.196 8[M+H]+，推測可能的分子式為C25H28O6。進一步進行碎片掃描，發(fā)現(xiàn)準分子離子失去1分子H2O產(chǎn)生碎片離子m/z 407.184 4，同時存在碎片離子m/z 369.167 6和m/z 313.106 5，判斷可能有兩個異戊烯基。根據(jù)以上信息并參考相關(guān)文獻[23]，推測該化合物為甘草寧E。

化合物7：保留時間為68.755 min，在正離子模式下出現(xiàn)準分子離子峰m/z 421.163 9[M+H]+，推測可能的分子式為C25H24O6。進一步進行碎片掃描，發(fā)現(xiàn)在m/z 365.101 0處出現(xiàn)碎片離子，提示可能含有異戊烯基或準分子離子失去兩分子CO所致，結(jié)合文獻[22]可知[M+H-2CO]-為異黃酮的特征離子峰。根據(jù)以上信息并參考相關(guān)文獻[21-22]，推測該化合物為甘草寧H。

2.4 抗氧化活性成分檢測方法的驗證

取8批甘草飲片，按“2.2.1”項下方法制備供試品溶液，再按“2.2.3”項下條件進樣分析，采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)（2012版）》生成8批甘草飲片的HPLC疊加特征圖譜。結(jié)果，8批甘草飲片均可檢測出7種抗氧化活性成分。同時，結(jié)合表2中不同產(chǎn)地甘草飲片的DPPH清除率結(jié)果，發(fā)現(xiàn)在線反應(yīng)產(chǎn)生的倒峰峰面積與飲片的DPPH清除率呈正相關(guān)，提示可用倒峰峰面積初步評價抗氧化活性成分的大小，詳見圖6、圖7、表4。

3 討論

在中藥現(xiàn)代化研究領(lǐng)域中，抗氧化中藥的研究占重要地位，已有針對清熱類、補益類中藥等抗氧化活性的系列研究報道[26-28]，以及對中藥中所含抗氧化活性成分的研究[29]。甘草作為臨床應(yīng)用較廣泛的中藥之一，具有抗氧化活性，且多種藥理活性與抗氧化活性密切相關(guān)[16，30]。目前，關(guān)于甘草抗氧化活性的研究較少，也尚無甘草抗氧化活性成分的相關(guān)研究。中藥的質(zhì)量控制需以藥效成分的辨識和確認為基礎(chǔ)，只有科學(xué)合理的藥效成分研究才是保證中藥安全有效的前提[31]。因此，本研究以提升飲片質(zhì)量標準為目標，借助“中藥活性成分色譜辨識”技術(shù)，建立了甘草飲片的HPLC-UV-DPPH在線檢測方法，以用于甘草抗氧化活性成分的快速篩選。結(jié)果，甘草飲片中共篩選出7種抗氧化活性成分，經(jīng)HPLC-TOF/MS法鑒定分別為阿佛洛莫生、8-異戊烯基柚皮素、黃羽扇豆魏特酮、半甘草異黃酮B、3′，4′-二甲氧基-3-羥基-6-甲基黃酮、甘草寧E和甘草寧H。其中，阿佛洛莫生、8-異戊烯基柚皮素和半甘草異黃酮B已有抗氧化活性的相關(guān)報道[32-34]，而黃羽扇豆魏特酮、3′，4′-二甲氧基-3-羥基-6-甲基黃酮、甘草寧E和甘草寧H未見報道。DPPH是一種穩(wěn)定的以氮為中心的自由基，在517 nm波長處具有特征吸收，以DPPH甲醇溶液為流動相，在517 nm波長下可得到平整的基線;當(dāng)樣品中存在可與自由基反應(yīng)的成分時，其可與DPPH反應(yīng)，通過DPPH中的單電子配對而使其吸收逐漸消失，在色譜圖上表現(xiàn)為負峰，利用該原理可進行抗氧化活性成分的在線篩選。本研究中的8批甘草飲片的7種抗氧化活性成分在其出現(xiàn)的對應(yīng)時間處均表現(xiàn)為倒峰，且倒峰的峰面積與甘草飲片的DPPH清除率呈正相關(guān)，提示可通過比較倒峰峰面積來評價甘草飲片的抗氧化活性。

綜上所述，所建方法簡單、準確，可用于快速篩選并鑒定甘草飲片的抗氧化活性成分，倒峰峰面積可用于評價甘草飲片的抗氧化活性成分大小，為進一步完善甘草飲片質(zhì)量評價標準和抗氧化物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供了數(shù)據(jù)支持。

參考文獻

[ 1 ] 高曉娟，趙丹，趙建軍，等.甘草的本草考證[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2017，23（2）：193-198.

[ 2 ] 張耀峰.甘草及其活性成分的藥理活性研究進展[J].中醫(yī)臨床研究，2019，11（9）：141-142.

[ 3 ] 趙翾，陳復(fù)生，李紅良.甘草中天然抗氧化劑的提取工藝研究[J].食品科技，2003（2）：50-52.

[ 4 ] 曹思瑤.基于天然藥物-甘草有效成分的功能性化妝品的研制[D].長春：長春中醫(yī)藥大學(xué)，2019.

[ 5 ] 李松.甘草酸對人膠質(zhì)瘤U251細胞的作用及其機制的研究[D].廣州：南方醫(yī)科大學(xué)，2014.

[ 6 ] 趙凡凡.甘草對D-gal誘導(dǎo)的大鼠抗衰老作用及基于牛磺酸通路的靶標代謝組學(xué)研究[D].太原：山西大學(xué)，2018.

[ 7 ] 張澤生，史珅，楊超慧，等.甘草多糖免疫調(diào)節(jié)作用的研究[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展，2008，8（10）：1835-1837.

[ 8 ] 賈世亮，武雪玲，李筱筱，等.甘草中黃酮類物質(zhì)的功能研究進展[J].北京聯(lián)合大學(xué)學(xué)報，2016，30（4）：67-73.

[ 9 ] ZHANG CH，YU Y，LIANG YZ，et al. Purification，partial characterization and antioxidant activity of polysaccharides from Glycyrrhiza uralensis[J]. Int J Biol Macromol，2015. DOI：10.1016/j.ijbiomac.2015.05.060.

[10] 楊豆，張衛(wèi)波.甘草化學(xué)成分及藥理作用研究[J].湖南飼料，2017（3）：21-23.

[11] 周倩，王亮，戴衍朋，等.基于GC-MS分析蜜炙對甘草中揮發(fā)性成分的影響[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2017，23（17）：87-90.

[12] 張浩.HPLC法測定甘草中甘草苷和甘草酸含量[J/OL].臨床醫(yī)藥文獻電子雜志，2020，7（48）：10、21.

[13] 周燕，王明奎，廖循，等.甘草化學(xué)成分的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析[J].分析化學(xué)，2004，32（2）：174-178.

[14] 裴世春，朱俊義，夏廣清，等.刺拐棒天然成分的抗氧化活性[J].食品工業(yè)，2019，40（3）：172-175.

[15] 趙康宏，嚴思恩，何英杰，等. HPLC-Q-TOF-MS法分析百合中酚類化合物[J].中成藥，2019，41（6）：1445-1450.

[16] 張玉錦，洪小茜.活性氧與心血管疾病關(guān)系的研究[J].醫(yī)學(xué)綜述，2002，8（4）：212-213.

[17] 李向榮.抗氧化劑和自由基與血清白蛋白相互作用的微量熱和譜學(xué)研究[D].新鄉(xiāng)：河南師范大學(xué)，2014.

[18] 胡曉慧，代向東，李來來，等.生甘草與炙甘草的抗氧化能力比較研究[J].天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2016，35（2）：114-117.

[19] 郭振宇，張毅，張正鋒，等.星點設(shè)計-響應(yīng)面法優(yōu)化川黨參產(chǎn)地加工炮制一體化工藝研究[J].中藥新藥與臨床藥理，2019，30（11）：1385-1390.

[20] 丁麗娜，邱亦亦，束彤，等.超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)解析沙棘果超臨界CO2萃取物中黃酮類天然產(chǎn)物結(jié)構(gòu)[J].食品科學(xué)，2019，40（18）：273-280.

[21] 王艷萍，薛興亞，張秀莉，等. HPLC/ESI-MS法鑒定半枝蓮乙酸乙酯組分中黃酮苷元類化合物[J].質(zhì)譜學(xué)報，2009，30（3）：129-138.

[22] 高昊.異戊烯基黃酮電噴霧多級質(zhì)譜研究[C]//中國有機質(zhì)譜學(xué)第十二屆全國學(xué)術(shù)大會論文集.北京：中國質(zhì)譜學(xué)會，2003：45-46.

[23] 周卿意駿，卿志星，蔡萍，等.基于HPLC-Q-TOF-MS/MS技術(shù)的銀黃清肺膠囊體外物質(zhì)基礎(chǔ)研究[J].中草藥，2016，47（20）：3586-3593.

[24] 張寧，高霞，周宇，等. UPLC-Q-TOF-MS/MS快速分析杏貝止咳顆粒化學(xué)成分[J].中國中藥雜志，2018，43（22）：4439-4449.

[25] 鄭國帥，趙鑫，范國榮.黃酮醇糖苷及其結(jié)構(gòu)類似物的質(zhì)譜裂解規(guī)律研究[J].藥學(xué)服務(wù)與研究，2015，15（3）：196-200.

[26] 郭晶.基于抗氧化活性的厚樸有效組分的研究[D].上海：華東理工大學(xué)，2012.

[27] 邢冬梅，劉潔麗，鄧淑芳，等.當(dāng)歸揮發(fā)油抗氧化譜效關(guān)系研究[J].化學(xué)世界，2020，61（4）：280-286.

[28] 余劉勤，賈愛梅，宋永硯.柴胡皂苷抗炎、抗氧化和降脂研究進展[J].中國動脈硬化雜志，2020，28（1）：87-92.

[29] 段宙位，李維國，竇志浩，等.沉香葉黃酮類化合物的提取及其抗氧化活性[J].食品科學(xué)，2015，36（6）：45-50.

[30] 邢燕，歷飛，林大勇，等.甘草次酸通過PI3K-AKT途徑抑制H2O2所致大鼠心肌細胞氧化損傷[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展，2018，18（6）：1044-1049.

[31] 李想，李冀.甘草提取物活性成分藥理作用研究進展[J].江蘇中醫(yī)藥，2019，51（5）：81-86.

[32] 孫備.膜莢黃芪根中的抗氧化成分[J].國外醫(yī)學(xué)（中醫(yī)中藥分冊），1998，20（4）：54.

[33] 李雋，崔承彬，蔡兵，等.啤酒花黃酮的研究進展[J].中草藥，2008，39（7）：1110-1114.

[34] 趙森銘，李慧曉，張志超，等.甘草水提后藥渣的化學(xué)成分及抗氧化活性研究[J].廣東藥科大學(xué)學(xué)報，2019，35（5）：614-618.

（收稿日期：2020-09-16 修回日期：2020-12-06）

（編輯：陳 宏）