余 米, 劉 嘉, 蒲德成,周 夢, 封孝蘭, 曹 敏

1. 重慶市藥物種植研究所，重慶 南川 408435； 2. 貴州省畜禽遺傳資源管理站，貴陽 550001； 3. 巫溪縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村委員會，重慶 巫溪 405899

日本醫(yī)蛭(HirudonippnicaWhitman)為《中國藥典》收錄品種，其咽周體腺分泌的水蛭素，具有抗血栓、抗凝、降血脂、抗腫瘤[1-3]等功效，是抗凝血類藥物的主要生物原料．近年來關(guān)于日本醫(yī)蛭的研究主要集中在抗凝血活性和抗凝物質(zhì)以及病害等方面[4-7]，關(guān)于日本醫(yī)蛭冬眠和繁殖的研究主要集中在以小體積的塑料箱體(如水族缸)模式研究方面[8-9]，但因日本醫(yī)蛭投放量小，密度不具有代表性，故在實際生產(chǎn)推廣中存在一定的局限性．

越冬密度和越冬模式是影響水生動物在冬眠期間存活率的關(guān)鍵因素[10-11]．冬季休眠是日本醫(yī)蛭生活史的必要環(huán)節(jié)，人工養(yǎng)殖過程中，其冬眠存活率的高低直接影響到繁殖和來年的養(yǎng)殖產(chǎn)量，提高規(guī)?；B(yǎng)殖中日本醫(yī)蛭冬眠存活率是提高經(jīng)濟(jì)效益的關(guān)鍵．然而，目前關(guān)于日本醫(yī)蛭的冬眠密度研究報道較少．本試驗采用越冬產(chǎn)繭一體化越冬模式，研究不同規(guī)格日本醫(yī)蛭越冬密度對存活數(shù)和產(chǎn)繭的影響，為規(guī)?；斯ゐB(yǎng)殖日本醫(yī)蛭提供理論依據(jù)．

1 材料和方法

1.1 試驗材料

試驗所用日本醫(yī)蛭飼養(yǎng)于重慶市藥物種植研究所水蛭養(yǎng)殖基地，均為體表無傷痕、體內(nèi)血液消化完全的1齡苗．冬眠土壤為重慶市典型的紫色土，采自南川區(qū)三泉鎮(zhèn)三泉村周邊山脈．冬眠池為20個自建水泥池(內(nèi)長6 m，寬1.2 m，高0.8 m)．池內(nèi)搭建5個底面積為0.5 m2的越冬場所，依次投放不同密度的日本醫(yī)蛭．

1.2 試驗方法

1.2.1 越冬場所搭建與管理措施

越冬土壤的準(zhǔn)備： 將未被耕作過的土壤暴曬7 d后過篩，然后利用甲醛熏蒸(標(biāo)準(zhǔn)為50 mL/m2甲醛加水6～12 L稀釋)，使用細(xì)眼花灑均勻噴灑，最后進(jìn)行堆土、覆蓋薄膜．7 d后，去掉薄膜、攤開土，待甲醛揮發(fā)完全后備用．

越冬場所搭建： 沿水泥池內(nèi)壁搭建越冬場所，最底層用磚鋪滿，總體高度為0.4～0.5 m，長、寬均為0.71 m，底面積為0.5 m2，土壤層厚度0.35 m．

水位控制： 采用微循環(huán)水流控制水位，水位與鋪設(shè)的磚塊高度齊平，適當(dāng)調(diào)節(jié)水位高度保證越冬期間土壤濕度一致．

越冬管理： 越冬(溫度低于16 ℃)-產(chǎn)繭(溫度介于22～24 ℃)時間為當(dāng)年10月底至次年5月初[12]，期間不必將水蛭收集出來單獨產(chǎn)繭．

1.2.2 密度對越冬存活率和產(chǎn)繭的影響

將飼養(yǎng)的日本醫(yī)蛭分為A，B，C，D組(4個質(zhì)量等級組)和E組(1個混合質(zhì)量組)，其中，A組體質(zhì)量為1±0.15 g/條，B組體質(zhì)量為2±0.15 g/條，C組為3±0.15 g/條，D組為4±0.15 g/條，E組將1～4 g不同體質(zhì)量規(guī)格的日本醫(yī)蛭進(jìn)行隨機(質(zhì)量比為1∶1∶1∶1)混合，即質(zhì)量密度組．在石萍等[8]、張健等[9]對日本醫(yī)蛭繁殖密度的研究基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)，將各個質(zhì)量等級組分為5個密度組，每個密度組2個重復(fù)，其中A1-A5組分別投放1 000，1 200，1 400，1 600，1 800條； B1-B5分別投放500，600，700，800，900條； C1-C5分別投放300，400，500，600，700條； D1-D5分別投放200，300，400，500，600條．E組按質(zhì)量投放為1.0 kg，1.25 kg，1.5 kg，1.75 kg，2.0 kg．休眠期結(jié)束后，以人工計數(shù)的方式統(tǒng)計各個試驗組越冬存活數(shù)、產(chǎn)繭數(shù)、卵繭質(zhì)量、孵化數(shù)量等．

1.2.3 不同規(guī)格水蛭所產(chǎn)卵繭的平均出苗數(shù)

1.2.4 繁殖系數(shù)與越冬密度計算

平均產(chǎn)繭率計算公式為

式中，C為平均產(chǎn)繭率，N為收集到的卵繭數(shù)量，M為越冬存活數(shù)量．

質(zhì)量密度與不同規(guī)格的單位面積數(shù)量密度換算公式為

m=n×R

式中，m為質(zhì)量密度，單位為kg/m2，n為不同規(guī)格的日本醫(yī)蛭越冬密度，單位為kg/條，R為單位面積越冬數(shù)量，單位為條/m2．

2 結(jié)果與分析

2.1 不同規(guī)格下日本醫(yī)蛭適宜越冬數(shù)量

從圖1得出小規(guī)格(1～3 g)的日本醫(yī)蛭越冬數(shù)量其存活數(shù)隨越冬數(shù)量的增加先上升再下降； 大規(guī)格(4 g)的日本醫(yī)蛭越冬存活數(shù)量隨越冬數(shù)量的增加而增加．圖2中，不同規(guī)格的日本醫(yī)蛭越冬存活率總體上均呈現(xiàn)出平穩(wěn)再下降的趨勢．A，B試驗組在A5，B5時存活率最低，C，D組在C4，D4時開始下降，C5，D5時最低．

圖1 不同規(guī)格日本醫(yī)蛭越冬存活數(shù)

圖2 不同規(guī)格日本醫(yī)蛭各組別越冬存活率

A組冬眠存活數(shù)最高為投放1 600條的A4處理組，平均存活1 587條(即3.174 kg/m2)，存活率為99.2%； B組冬眠存活數(shù)最高為投放800條的B4處理組，平均存活797條(即3.188 kg/m2)，存活率為99.6%； C組冬眠存活數(shù)最高為投放500條的C3處理組，平均存活484條(即2.904 kg/m2)，存活率為96.8%； D組冬眠存活數(shù)最高為投放600條的D5處理組，平均存活436條(即3.488 kg/m2) ，存活率為72%，D3存活396條(3.168 kg/m2)，實際存活率為99.0%．

2.2 不同規(guī)格下日本醫(yī)蛭產(chǎn)繭數(shù)量

由圖3所示，不同規(guī)格日本醫(yī)蛭越冬后產(chǎn)繭數(shù)量隨越冬數(shù)量的增加呈現(xiàn)先上升再下降的趨勢．

A組卵繭數(shù)隨冬眠密度的增加先上升再下降，A4試驗組平均卵繭數(shù)達(dá)到最高，為1 822顆，平均產(chǎn)繭率為1.15； B組卵繭數(shù)也隨冬眠密度的增加先上升再下降，B4試驗組卵繭數(shù)達(dá)到最高，為811顆，平均產(chǎn)繭率為1.21； C，D組分別在C3和D3卵繭數(shù)最多，分別為542和476顆，平均產(chǎn)繭率均為1.20．

圖3 不同規(guī)格日本醫(yī)蛭越冬卵繭數(shù)

圖4 不同質(zhì)量密度越冬后日本醫(yī)蛭存活質(zhì)量

2.3 不同質(zhì)量密度下日本醫(yī)蛭越冬存活質(zhì)量

如圖4所示，在不同質(zhì)量密度下越冬，總體上日本醫(yī)蛭越冬存活質(zhì)量隨投放密度上升而上升； 在密度為3.0 kg/m2時，存活質(zhì)量與投放質(zhì)量比值最高，達(dá)到了98.7%，而在3.5 kg/m2時，存活質(zhì)量最大為1.615±0.01 kg．結(jié)合質(zhì)量密度與不同規(guī)格的密度換算公式得出： 單位面積越冬最佳投放總量為3.0～3.5 kg．

2.4 不同規(guī)格日本醫(yī)蛭越冬后產(chǎn)繭質(zhì)量及出苗數(shù)

從表1得出，日本醫(yī)蛭越冬體質(zhì)量越大，所產(chǎn)卵繭質(zhì)量也越大，出苗數(shù)也相應(yīng)增多，幼苗平均質(zhì)量也相應(yīng)增加．

表1 不同規(guī)格日本醫(yī)蛭越冬產(chǎn)繭質(zhì)量與出苗數(shù)

3 討 論

3.1 基質(zhì)對日本醫(yī)蛭冬眠的影響

土壤是日本醫(yī)蛭在自然環(huán)境下越冬產(chǎn)繭的主要基質(zhì)，本研究采用仿生態(tài)越冬方法，保證了土壤的濕度，從而提高了日本醫(yī)蛭的存活率．郭坤等[13]的研究結(jié)果也證明了土壤濕度是影響蛭類越冬存活率的主要因素．加之，越冬土壤的消毒處理也消除了土壤中的蟲卵和病菌，相應(yīng)減少了病蟲害的發(fā)生； 已有研究證明土壤的消毒處理會改變其化學(xué)性質(zhì)[14]，此外，干燥土壤后再粉粹的過程，也重建了土壤的物理結(jié)構(gòu)，改善了土壤的壓實現(xiàn)象、增加了表面積和孔隙度，從而提高了土壤的保水能力，干燥后的土壤吸水保證了越冬期間的透氣性和濕度，保證了日本醫(yī)蛭越冬的存活率．

3.2 越冬密度對日本醫(yī)蛭存活和產(chǎn)繭的影響

越冬密度是日本醫(yī)蛭生產(chǎn)管理中最基本的生產(chǎn)管理因素，本研究發(fā)現(xiàn)： 存活數(shù)較高的實驗組(即低密度處理組以A1，A2，A3，A4； B1，B2，B3； C1和C2； D1和D2為主)基本未見出土后死亡的日本醫(yī)蛭，同時也未發(fā)現(xiàn)土內(nèi)死亡現(xiàn)象； 存活數(shù)較低的實驗組(高密度組以A5，B5，C4和C5，D4和D5為主)在投放種蛭一月后出現(xiàn)了日本醫(yī)蛭出土死亡的現(xiàn)象．其中D組中D5的存活數(shù)最高，但產(chǎn)繭數(shù)量和存活率以D3最高，故D3應(yīng)為D組最佳密度組．除此在采集卵繭時發(fā)現(xiàn)： 其土層中有草綠色降解物和異味，可斷定高密度組土壤中也有死亡現(xiàn)象．高密度組日本醫(yī)蛭死亡原因可能是爭奪越冬空間而造成了，越冬密度過低不能有效利用越冬空間，密度過高會導(dǎo)致日本醫(yī)蛭的死亡，在曹陽等[15]的研究中亦有類似現(xiàn)象．

相同規(guī)格的日本醫(yī)蛭的卵繭其質(zhì)量相對集中，極少出現(xiàn)極小和極大的卵繭，而在混合規(guī)格越冬組中收集到的卵繭其質(zhì)量分布區(qū)間在0.030 2～0.295 2 g之間．為了保證卵繭質(zhì)量應(yīng)選擇體質(zhì)量相對一致的親蛭進(jìn)行越冬繁殖．

3.3 親本對后代的影響

薛凌展[16]研究表明，大刺鰍其產(chǎn)卵量與其親本的規(guī)格呈正相關(guān)，規(guī)格越大的，其卵子質(zhì)量越好，其受精率與孵化率均較高，主要原因可能是親本的規(guī)格決定性腺成熟度和精卵質(zhì)量[17]．本研究結(jié)果與之相似，日本醫(yī)蛭規(guī)格越大，其卵繭質(zhì)量越大，幼苗數(shù)越多，幼苗質(zhì)量越高．此外，我們在飼養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)日本醫(yī)蛭存在明顯社會等級現(xiàn)象，故在養(yǎng)殖中采用分級飼養(yǎng)的方法，使得日本醫(yī)蛭的體質(zhì)量分布區(qū)域相對較大．但是小規(guī)格的日本醫(yī)蛭死亡率與大規(guī)格的日本醫(yī)蛭死亡率并沒有明顯差異，在移除大規(guī)格的日本醫(yī)蛭后，小規(guī)格的日本醫(yī)蛭的體質(zhì)量也能迅速增加．因此，越冬種蛭應(yīng)具有無病害、活力強、黏液分泌豐富、行動靈敏等特點，但體質(zhì)對其產(chǎn)卵率的影響有待進(jìn)一步研究考證．

4 結(jié) 論

在實際生產(chǎn)中為了獲得較大規(guī)格的幼苗，應(yīng)選擇相對較大的親本進(jìn)行越冬繁殖．單位面積總投放量為3.0～3.5 kg時，存活率和平均產(chǎn)繭率最高，可獲得更好的經(jīng)濟(jì)效益．