陳鑫珠，張建國(guó)

（1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)南方草業(yè)研究中心，廣東 廣州510642；2.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，福建 福州350013）

熱研四號(hào)王草（Pennisetum purpereum×P.typhoideumcv.Reyan No.4）屬禾本科狼尾草屬多年生草本植物，由中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院從國(guó)際熱帶農(nóng)業(yè)中心引進(jìn)并經(jīng)多年試驗(yàn)選育而成［1］，是我國(guó)南方種植面積最大的優(yōu)良牧草之一，但其生產(chǎn)具有鮮明的季節(jié)性，因此在產(chǎn)草旺季對(duì)其加工貯存尤為重要［2?3］。刈割是牧草管理的常規(guī)方式，刈割時(shí)期、次數(shù)、頻次對(duì)牧草產(chǎn)量與品質(zhì)的影響有較多研究報(bào)道［4?12］。高赟等［4］研究表明，飼用玉米（Zea mays）刈割次數(shù)增加，其粗蛋白（crude protein，CP）、粗纖維（crude fiber，CF）、干物質(zhì)（dry matter，DM）、磷、鈣的含量下降，鮮草胡蘿卜素含量呈現(xiàn)先上升后下降趨勢(shì)，但刈割次數(shù)不影響粗灰分和粗脂肪含量。陳曉東等［5］報(bào)道，大麥（Hordeum vulgare）第1 茬飼草產(chǎn)量與品質(zhì)均高于第2 茬。雷荷仙等［6］報(bào)道，茬次對(duì)多花黑麥草（Lolium multiflorum）的營(yíng)養(yǎng)成分及細(xì)胞壁各物質(zhì)含量有明顯影響，其粗灰分、中性洗滌纖維（neutral detergent fiber，NDF）和酸性洗滌纖維（acid detergent fiber，ADF）含量隨刈割茬次的增加而增加，而粗蛋白則隨刈割茬次的增加而降低。呂仁龍等［7］報(bào)道，青貯前和青貯后，王草中葉綠素和葉綠醇含量均隨著刈割高度的增加而顯著降低。多花黑麥草第2茬青貯效果優(yōu)于第1 和3 茬［8］。綜上所述，茬次和高度對(duì)牧草的營(yíng)養(yǎng)成分和青貯發(fā)酵品質(zhì)有顯著影響，然而關(guān)于刈割茬次和高度對(duì)牧草乳酸菌（lactic acid bacteria，LAB）分布的研究卻鮮有報(bào)道。有研究表明牧草刈割茬次改變了土壤細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)［13］，但對(duì)地上部分牧草植株細(xì)菌群落是否影響未見研究報(bào)道。本研究旨在研究刈割茬次和高度對(duì)熱研四號(hào)王草的乳酸菌分布和青貯發(fā)酵品質(zhì)的影響，以便為我國(guó)南方地區(qū)熱研四號(hào)王草合理利用和大規(guī)模青貯推廣應(yīng)用提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料及其種植管理概況

熱研四號(hào)王草2011 年2 月28 日種植于華南農(nóng)業(yè)大學(xué)增城寧西試驗(yàn)基地，N 23°14′，E 113°38′。該地屬亞熱帶季風(fēng)氣候，年平均氣溫為21.6 ℃，7 月最熱，平均氣溫達(dá)33.7 ℃，極端最高氣溫39.1 ℃；最冷為1 月，平均氣溫為14.9 ℃，極端最低氣溫4 ℃。全年積溫7910.9 ℃，年平均降水量為1801.2 mm，年平均太陽(yáng)輻射值為4367.2～4597.3 MJ·m?2，年平均日照時(shí)數(shù)為1707.2 h。試驗(yàn)區(qū)土壤類型為水稻土，土壤基礎(chǔ)肥力為有機(jī)質(zhì)10.2 g·kg?1，全氮0.85 g·kg?1，全磷0.62 g·kg?1，全鉀14.82 g·kg?1，速效氮32.35 mg·kg?1，速效磷76.19 mg·kg?1，速效鉀85.42 mg·kg?1，pH 為5.40。于2011 年5 月25 日采集第1 茬1.0、1.5 和2.0 m 樣本，2011 年8 月23 日采集第2 茬1.0、1.5 和2.0 m 樣本，2011 年11 月5 日采集第3 茬1.0、1.5 和2.0 m 樣本。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用雙因素分析熱研四號(hào)王草3 個(gè)茬次（第1、2 和3 茬）和3 個(gè)高度（1.0、1.5 和2.0 m）的乳酸菌的數(shù)量和種類分布、營(yíng)養(yǎng)特性及青貯發(fā)酵品質(zhì)。

材料采集：每個(gè)樣品戴無(wú)菌手套距地面10 cm 用滅菌后的剪刀剪取2 份試驗(yàn)所需材料，裝入無(wú)菌封口袋（一份約100 g 用于微生物分析，一份約500 g 用于青貯調(diào)制），放置冷藏箱中冷藏，帶回實(shí)驗(yàn)室立即分析。

1.3 分析方法

取備好的微生物分析樣本，在超凈工作臺(tái)內(nèi)每個(gè)樣本稱取50 g，用無(wú)菌剪刀剪成10 cm 左右，放入無(wú)菌聚乙烯袋中，加入250 mL 無(wú)菌洗脫液（0.1 mol·L?1磷酸鉀?0.1%吐溫緩沖液，pH 7.0），將空氣排盡封口，在200 r·min?1搖床中振蕩30 min。開封后，先取10 mL 洗脫液預(yù)留做劃板培養(yǎng)，其余洗脫液用50 mL 離心管收集，采用高速冷凍離心機(jī)（臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)H1850R，湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司）14000 r·min?14 ℃離心10 min，收集沉淀，?20 ℃冰箱保存［14］。

取青貯調(diào)制樣品，每個(gè)樣本稱取3 份150 g 用無(wú)菌剪刀剪至1～2 cm 混合均勻的原料，裝入聚乙烯袋中，抽真空、密封。常溫條件下貯存60 d 后開封，取樣分析青貯料發(fā)酵品質(zhì)和化學(xué)成分。

將每個(gè)樣品預(yù)留的10 mL 洗脫液進(jìn)行101～106梯度稀釋后，分別采用MRS 瓊脂培養(yǎng)基（MRS agar medium，MRS）、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（nutrient agar，NA）、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（potato dextrose agar，PDA）進(jìn)行乳酸菌、好氧性細(xì)菌、酵母菌和霉菌劃板培養(yǎng)后計(jì)數(shù)［14］。乳酸菌用厭氧箱（YQX-Ⅱ型，上海新苗）37 ℃培養(yǎng)2 d；好氧性細(xì)菌、酵母菌和霉菌在有氧條件下30 ℃培養(yǎng)2 d。

MRS 組成及配制：蛋白胨10.0 g、牛肉膏10.0 g、酵母提取物5.0 g、葡萄糖5.0 g、吐溫80 1.0 mL、乙酸鈉5.0 g、檸檬酸二胺2.0 g、磷酸氫二鉀2.0 g、MgSO4·7H2O 0.1 g、MgSO4·7H2O 0.05 g、瓊脂15.0 g、蒸餾水1.0 L，pH 調(diào)至6.8，121 ℃高壓滅菌25 min。

NA 組成及配制：蛋白胨10.0 g、牛肉膏5.0 g、氯化鈉5.0 g、瓊脂15.0 g、蒸餾水1.0 L，pH 調(diào)至7.0，121 ℃高壓滅菌25 min。

PDA 組成：葡萄糖20.0 g、馬鈴薯浸出液粉4.0 g、瓊脂15.0 g、蒸餾水1.0 L，121 ℃高壓滅菌25 min，再用滅菌酒石酸調(diào)pH 至3.5。

不同刈割高度和茬次所取樣品按常規(guī)方法放置105 ℃烘箱殺青30 min 后，置65 ℃烘箱干燥48 h 測(cè)得干物質(zhì)（DM）；緩沖能（buffer capacity，BC）采用鹽酸、氫氧化鈉滴定法測(cè)定［15］；參考《飼料分析及飼料質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)》［16］測(cè)定風(fēng)干樣本的粗蛋白質(zhì)（CP）、中性洗滌纖維（NDF）、酸性洗滌纖維（ADF）和半纖維素（hemi-cellulose，HC）含量；可溶性碳水化合物（water soluble-carbohydrate，WSC）采用Anthrone 比色法定量［17］，同時(shí)取10 mL 的浸提液，在浸提液中加入少量陽(yáng)離子交換樹脂，離心機(jī)12000 r·min?1離心10 min，用0.22 μm 微孔濾膜過(guò)濾后，采用LC-20AT高效液相色譜儀測(cè)定棉子糖、蔗糖、麥芽糖、葡萄糖、木糖、半乳糖和果糖，色譜條件：色譜柱（SUGAR P0810，日本），流動(dòng)相為超純水，流速0.8 mL·min?1，柱溫75 ℃，檢測(cè)器為RID-10A 紫外檢測(cè)器［14］。

取具代表性青貯樣品20 g 加入80 mL 蒸餾水，放置4 ℃冰箱中8 h 后濾紙過(guò)濾收集濾液，測(cè)定濾液的pH；取5 mL 濾液加入樹脂經(jīng)12000 r·min?1離心10 min 后取上清液，該上清液再用孔徑0.22 μm 的濾膜過(guò)濾后，采用LC-20AT 高效液相分析儀（色譜柱：Shodex Rspak KC-811S-DVB gel Column 30 mm×8 mm；檢測(cè)器：SPDM10AVp；流動(dòng)相：3 mmol·L?1高氯酸）測(cè)定乳酸（lactic acid，LA）、乙酸（acetic acid，AA）、丙酸（propionic acid，PA）和丁酸（butyric acid，BA）含量［18］。

1.4 乳酸菌的鑒定

乳酸菌分離與純化參考張慧杰等［19］的方法進(jìn)行，形態(tài)學(xué)和生理生化特性檢測(cè)參考凌代文等［20］的方法進(jìn)行。純化后將不同形態(tài)、生理生化表現(xiàn)的乳酸菌株進(jìn)行全長(zhǎng)DNA 提取，并采用乳酸菌通用引物進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增后的PCR 產(chǎn)物送華大生物科技有限公司（中國(guó)，廣州）測(cè)序，獲得16S rDNA 序列信息后與GeneBank 基因庫(kù)中16S rDNA 序列進(jìn)行比對(duì)［21］。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

用Excel 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理，采用SPSS 17.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，采用Duncan 法對(duì)均值進(jìn)行多重比較，對(duì)材料特性進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同茬次和高度下熱研四號(hào)王草的特性

茬次對(duì)熱研四號(hào)王草的DM、CP、WSC、pH、BC、ADF、HC、棉籽糖、蔗糖、麥芽糖、葡萄糖、果糖和乳酸菌數(shù)量均有極顯著（P＜0.01）影響，對(duì)NDF 有顯著（P＜0.05）影響；高度對(duì)DM、CP、WSC、BC、pH、NDF、ADF、麥芽糖含量均有極顯著（P＜0.01）影響，對(duì)蔗糖、葡萄糖和果糖含量有顯著（P＜0.05）影響；茬次和高度對(duì)CP、WSC、pH、NDF、蔗糖、麥芽糖和果糖有極顯著（P＜0.01）的交互作用，對(duì)BC、ADF、葡萄糖和乳酸菌數(shù)量有顯著（P＜0.05）的交互作用（表1）。

表1 不同茬次和高度下熱研四號(hào)王草的特性Table 1 The characteristic of different cutting and height of Reyan No.4 king grass

熱研四號(hào)王草第1 茬的pH 值、ADF、棉籽糖、蔗糖、麥芽糖和果糖的含量顯著（P＜0.05）高于第2 和3 茬，NDF、HC 和LAB 數(shù)量顯著（P＜0.05）低于第2 和3 茬；第2 茬的DM、HC 和霉菌的數(shù)量顯著（P＜0.05）高于第1和3 茬，CP 和ADF 顯著（P＜0.05）低于第1 和3 茬；第3 茬的BC、葡萄糖和酵母菌數(shù)量顯著（P＜0.05）高于第1 和2 茬，WSC 顯著（P＜0.05）低于第1 和2 茬。

熱研四號(hào)王草1.0 m 高度的CP 和pH 值顯著（P＜0.05）高于、NDF 顯著（P＜0.05）低于1.5 和2.0 m 高度；1.5 m 高度的麥芽糖顯著（P＜0.05）高于、蔗糖和果糖顯著（P＜0.05）低于1.0 和2.0 m 高度；2.0 m 的DM、NDF和ADF 顯著（P＜0.05）高于、pH 值顯著（P＜0.05）低于1.0 和1.5 m 高度。

2.2 不同茬次和高度下熱研四號(hào)王草的青貯發(fā)酵品質(zhì)

不同茬次和高度下熱研四號(hào)王草的青貯發(fā)酵品質(zhì)及兩因素方差分析見表2。茬次對(duì)熱研四號(hào)王草青貯料的pH、乙酸和丁酸含量均有極顯著影響（P＜0.01），對(duì)青貯料的乳酸有顯著（P＜0.05）影響；高度對(duì)青貯料的pH 和乙酸有極顯著（P＜0.01）影響，對(duì)青貯料的DM 和氨態(tài)氮有顯著（P＜0.05）影響；茬次和高度對(duì)pH 值有極顯著（P＜0.01）的交互作用，對(duì)氨態(tài)氮有顯著（P＜0.05）的交互作用。

表2 不同茬次和高度下熱研四號(hào)的發(fā)酵品質(zhì)Table 2 The fermentation characteristics of different cutting and height of Reyan No.4 king grass

熱研四號(hào)王草青貯料中，第1 茬的丁酸和氨態(tài)氮含量顯著（P＜0.05）高于第2 和3 茬；第2 茬pH 顯著（P＜0.05）低于第1 和3 茬，乳酸含量顯著（P＜0.05）高于第1 和3 茬；第3 茬乙酸含量顯著（P＜0.05）低于第1 茬。

熱研四號(hào)王草青貯料中，1.0 m 高度的乙酸含量顯著（P＜0.05）高于1.5 和2.0 m 高度；1.5 m 高度的氨態(tài)氮含量顯著（P＜0.05）高于1.0 和2.0 m 高度；2.0 m 高度DM 含量顯著（P＜0.05）高于1.0 和1.5 m 高度，pH 值顯著（P＜0.05）低于1.0 和1.5 m 高度。

2.3 不同茬次和高度下熱研四號(hào)王草乳酸菌的分布

從熱研四號(hào)王草3 個(gè)茬次的3 個(gè)不同高度共分離了122 株乳酸菌，依形態(tài)、生理生化、碳源發(fā)酵特性進(jìn)行分組，對(duì)各組的代表菌株的16S rDNA 測(cè)序、分析比較，發(fā)現(xiàn)有5 種乳酸菌存在，分別是Lactobacillus屬的植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum）和戊糖乳桿菌（Lactobacillus pentosus）、Lactococcus屬的乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）和Weissella屬的融合乳桿菌（Weissella confuse）和魏斯氏菌（Weissella cibaria）（表3）。

表3 代表菌株測(cè)序NCBI 比對(duì)結(jié)果Table 3 NCBI comparison results of the representative strains

表4 不同茬次和高度下熱研四號(hào)王草分離乳酸菌的數(shù)量和種類Table 4 The number and kinds of LAB of different cutting and height of Reyan No.4 king grass

其中第1 茬的1.0、1.5 和2.0 m 植株中植物乳桿菌占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)，分別為93.33%、93.55%和83.33%，1.0 m植株中有少量的乳酸乳球菌（6.66%），1.5 和2.0 m 中有少量的戊糖乳桿菌（6.66%和16.67%）；第2 茬中1.0 m植株植物乳桿菌占64.28%，融合乳桿菌和魏斯氏菌分別占28.57% 和7.14%，1.5 m 植株融合乳桿菌占78.55%，植物乳桿菌占21.42%，從2.0 m 植株只分離到融合乳桿菌；第3 茬1.0 m 植株植物乳桿菌占57.14%、乳酸乳球菌7.14%、融合乳桿菌28.57%和魏斯氏菌7.14%，1.5 m 植株只分離到植物乳桿菌和融合乳桿菌，分別占66.66%和33.33%，2.0 m 植株主要是融合乳桿菌（84.61%）和少量的魏斯氏菌（15.38%）（表4）。

3 討論

刈割是提高牧草飼用價(jià)值的有效方式，刈割茬次與飼草品質(zhì)密切相關(guān)［22］，但因不同飼草品種，不同種植管理方式、不同種植地點(diǎn)等因素不同營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)在不同研究報(bào)道中結(jié)果不完全一致。陳曉東等［5］報(bào)道，刈割的茬次和高度對(duì)飼草的營(yíng)養(yǎng)成分和青貯品質(zhì)均有影響，隨著飼草高度的增加，其干物質(zhì)、中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量逐漸升高，粗蛋白含量逐漸降低，本試驗(yàn)結(jié)果與此相似。在1.0～2.0 m 高度，熱研四號(hào)王草的干物質(zhì)、中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量顯著升高，粗蛋白含量和pH 值顯著降低。這與植物的生長(zhǎng)發(fā)育和生理特性有關(guān)，植物在幼嫩時(shí)期，粗蛋白和水分含量較高，纖維較細(xì)較少［23］。蘇曉菲［24］報(bào)道，適當(dāng)增加刈割次數(shù)和有機(jī)肥施量可有效提高產(chǎn)量和改善品質(zhì)，但刈割次數(shù)和有機(jī)肥施量過(guò)多對(duì)產(chǎn)量和品質(zhì)的影響不大，不同刈割次數(shù)處理下，紫花苜蓿（Medicago sativa）的產(chǎn)量和粗蛋白含量均隨著有機(jī)肥施量的增加而呈上升趨勢(shì)，中性及酸性洗滌纖維均隨著有機(jī)肥施量增加呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。楊恒山等［25］和王麗霽［26］的研究表明，隨著生長(zhǎng)季中刈割次數(shù)增多，粗蛋白含量及產(chǎn)量均顯著提升，粗纖維含量及產(chǎn)量均顯著下降。于輝等［27］研究表明，隨著刈割次數(shù)的增加，蘇丹草（Sorghum sudanense）的粗纖維水平降低。何振富等［22］研究發(fā)現(xiàn)，中性洗滌纖維含量品種間對(duì)刈割茬次的響應(yīng)程度不一致，酸性洗滌纖維含量品種間對(duì)刈割茬次的響應(yīng)一致，因此表現(xiàn)不同的原因與品種不同有關(guān)。另外，他還發(fā)現(xiàn)對(duì)相同品種的營(yíng)養(yǎng)成分動(dòng)態(tài)變化中，中性洗滌纖維和酸性洗滌含量均呈“升—降—升”的變化趨勢(shì)。董志國(guó)等［28］研究表明，新牧1 號(hào)紫花苜蓿第1 茬的粗蛋白含量顯著最高，中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維的變化規(guī)律為第3 茬＞第1茬＞第2 茬。羅燕等［8］報(bào)道，75%水分多花黑麥草第1 茬的干物質(zhì)和可溶性碳水化合物含量顯著高于第2 和3 茬，第2 茬的粗蛋白含量顯著最高，而65%水分第1 茬的粗蛋白和可溶性碳水化合物顯著高于第2 和3 茬，第3 茬的酸性洗滌纖維最高，其表明第1 茬的多花黑麥草營(yíng)養(yǎng)成分最高。尉志霞等［29］和Morin 等［30］研究報(bào)道，苜蓿第1 茬的營(yíng)養(yǎng)成分優(yōu)于第2 茬。本試驗(yàn)與報(bào)道結(jié)果不完全一致，熱研四號(hào)王草原料中第2 茬的干物質(zhì)含量顯著高于第1 和3 茬，中性洗滌纖維第1 茬顯著最高，酸性洗滌纖維第1 茬顯著最低，這可能與牧草品種、種植區(qū)域和管理方式等不同有關(guān)，但第1 茬的粗蛋白含量和可溶性碳水化合物的含量顯著最高與各報(bào)道結(jié)果一致。

青貯發(fā)酵主要影響因素有可溶性碳水化合物、含水量、溫度、厭氧條件及其他等［31?32］。在無(wú)任何添加劑處理情況下，影響飼草青貯發(fā)酵的主要因素為飼草含糖量和附生的乳酸菌數(shù)量。有報(bào)道［21］表明，原料中的含糖量直接影響青貯品質(zhì)。一般而言，青貯原料中的可溶性碳水化合物含量應(yīng)為鮮重的3%以上或?yàn)楦晌镔|(zhì)含量的6%以上方可制成優(yōu)質(zhì)青貯飼料，含糖量過(guò)低時(shí)（低于2%）則難以制成優(yōu)質(zhì)青貯飼料［31，33?34］。本試驗(yàn)不同茬次和高度間青貯品質(zhì)均有顯著差異，其中第2 茬的pH、乙酸、丁酸和氨態(tài)氮含量較低，干物質(zhì)和乳酸含量最高，青貯品質(zhì)較佳；3個(gè)高度中，2.0 m 的干物質(zhì)和乳酸含量較高，pH 值和氨態(tài)氮含量較低，效果較佳。這與蔣利芳等［35］在紫花苜蓿裹包青貯品質(zhì)的研究中認(rèn)為第2 茬青貯品質(zhì)優(yōu)于第1 茬和羅燕等［8］在黑麥草75%和65%水分青貯中認(rèn)為第2 茬的青貯發(fā)酵品質(zhì)最優(yōu)的報(bào)道結(jié)果相似。這與尉志霞等［29］和Morin 等［30］在紫花苜蓿上報(bào)道的第1 茬的青貯品質(zhì)優(yōu)于第2 茬的結(jié)果不同?？赡苁堑? 茬的營(yíng)養(yǎng)成分高于第3 茬，雖然低于第1 茬，但因第2 茬附生的乳酸菌含量顯著高于第1 茬，其進(jìn)行了更充分的乳酸發(fā)酵，保留更多的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)［8］，故第2 茬青貯料的干物質(zhì)含量顯著最高。因此，滿足優(yōu)質(zhì)青貯含糖量的條件下，乳酸菌就成為青貯發(fā)酵的關(guān)鍵因素［36］。糖分是乳酸菌發(fā)酵時(shí)的底物，只有充足的底物含量，才能促進(jìn)乳酸菌的快速、大量繁殖，使乳酸菌產(chǎn)生足夠數(shù)量的乳酸［37］，提高青貯發(fā)酵品質(zhì)，抑制不良菌的生長(zhǎng)繁殖，保留較多的青貯料養(yǎng)分［34］。本試驗(yàn)中第2 茬和2.0 m 高度中乳酸菌含量最高，與本試驗(yàn)青貯品質(zhì)最佳組的趨勢(shì)相符，再一次證明附生乳酸菌在青貯發(fā)酵中的關(guān)鍵作用。

張慧杰［38］報(bào)道，不同茬次的苜蓿上附生的乳酸菌數(shù)量上無(wú)顯著差異，原料干物質(zhì)升高，苜蓿表面的乳酸菌的數(shù)量逐漸增多，有害菌的數(shù)量逐漸減少。Holden 等［39］發(fā)現(xiàn)在第1 次刈割和第2 次刈割期間，乳酸菌的數(shù)量呈上升趨勢(shì)。不同茬次、高度、生育期和部位的植物乳酸菌數(shù)量和種類存在很大差異，且不同植物品種表現(xiàn)不同［40］。因此，不同茬次和高度的飼草表面乳酸菌種類和數(shù)量有一定的差異，但目前關(guān)于這方面深入的研究報(bào)道較少，僅有的報(bào)道也只是采用劃板培養(yǎng)法研究乳酸菌數(shù)量差異［39］。本研究劃板培養(yǎng)結(jié)果表明，熱研四號(hào)王草第2 和3 茬乳酸菌的數(shù)量顯著高于第1 茬，2.0 m 高度乳酸菌數(shù)量較多，但3 個(gè)高度統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)顯著差異。不同茬次和高度樣本中分離到的乳酸菌進(jìn)行種類鑒定后發(fā)現(xiàn)，植物乳桿菌和融合乳桿菌是熱研四號(hào)王草的高頻乳酸菌，第1 茬的乳酸菌種類較少，第3 茬的乳酸菌種類較多。

4 結(jié)論

1）隨著熱研四號(hào)王草刈割高度增加（1.0～2.0 m），DM、NDF 和ADF 含量顯著升高，CP 含量和pH 值顯著降低；第2 茬的DM 含量最高，第1 茬的CP、WSC 和ADF 含量最高，NDF 含量最低。 2）3 茬熱研四號(hào)王草青貯料中，第2 茬的青貯效果優(yōu)于第1 和3 茬；3 個(gè)高度青貯料中，2.0 m 高度的青貯效果較佳。3）第2 和3 茬乳酸菌的數(shù)量顯著高于第1 茬，第3 茬的乳酸菌的種類高于第1 茬；2.0 m 高度乳酸菌數(shù)量較多。4）植物乳桿菌和融合乳桿菌是熱研四號(hào)王草出現(xiàn)頻率最高的乳酸菌。